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文檔簡介
14.1轉(zhuǎn)錄(transcription)的特點:
1、以DNA單鏈為模板,NTP為原料,在DNA依賴的RNA聚合酶催化下合成RNA鏈的過程。轉(zhuǎn)錄的條件:模板原料酶產(chǎn)物配對方向引物DNA(不對稱轉(zhuǎn)錄)NTPRNA聚合酶mRNA,tRNA,rRNA,小RNAA-U,T-A,G-C5’3’不需要第1頁/共52頁DNA的大小與基因結(jié)構(gòu)基因(structuregene):
DNA分子中能轉(zhuǎn)錄出RNA的區(qū)段
1、重復(fù)
2、重疊
3、不連續(xù)第2頁/共52頁2、DNA的不對稱轉(zhuǎn)錄
.DNA雙鏈上,僅一股鏈轉(zhuǎn)錄,另一股不轉(zhuǎn)錄。
轉(zhuǎn)錄方向5’3’模板鏈圖13-1第3頁/共52頁模板鏈:
反意義鏈(antisensestrand,(-)鏈)
——
以該鏈中的DNA堿基順序指導(dǎo)RNA的合成即被轉(zhuǎn)錄的那條DNA鏈。
編碼鏈:有意義鏈(sensestrand,(+)鏈)
——不被轉(zhuǎn)錄的那條DNA鏈,但其堿基順序除T代替U外,其余與mRNA相同。
第4頁/共52頁5’-----GCAGTACATGTC-----3’編碼鏈
DNA3’-----CGTCATGTACAG-----5’模板鏈5’-----GCAGUACAUGUC-----3’mRNAN------Ala--Val--His--Val------C蛋白質(zhì)有意義鏈與反意義鏈并非固定不變。
.轉(zhuǎn)錄方向都是5’3’第5頁/共52頁
3、RNA聚合酶——依賴DNA的RNA聚合酶
(DNA-dependentRNApolymerase,DDRP)
以DNA為模板,催化2個游離的NTP形成3’,5’-磷酸二酯鍵第6頁/共52頁14.2.1大腸桿菌RNA聚合酶的組成(1)全酶(holoenzyme)
由4種(5個)亞基α2ββ’σ組成(2)核心酶(coreenzyme)
α2ββ’
,參與轉(zhuǎn)錄的全過程(3)σ亞基(起始亞基)亦稱σ因子(σfactor)—轉(zhuǎn)錄輔助因子
識別啟動子
ω亞基功能未知14.2原核生物的轉(zhuǎn)錄第7頁/共52頁大腸桿菌RNA聚合酶的結(jié)構(gòu)示意圖核心酶(α2ββ)起始因子β——和模板DNA結(jié)合β——起始和催化聚合反應(yīng)α——酶的裝配、結(jié)合啟動子等全酶(α2ββ
)第8頁/共52頁全酶核心酶亞基α2ββ’σ決定哪些基因被轉(zhuǎn)錄結(jié)合底物,形成磷酸二酯鍵(催化)結(jié)合模板(開鏈)(核心酶參與轉(zhuǎn)錄全過程)識別起始點啟動子(延長時脫落)功能第9頁/共52頁第10頁/共52頁14.2.2原核生物的啟動子(promoter)
1、啟動子
RNA聚合酶全酶識別、結(jié)合、開始轉(zhuǎn)錄的DNA序列(雙鏈)
轉(zhuǎn)錄因子
RNA聚合酶起始轉(zhuǎn)錄所需要的輔助因子(蛋白質(zhì))
第11頁/共52頁
原核生物啟動子的特點:
(1)DNA序列在轉(zhuǎn)錄起始點的5’端區(qū)(上游區(qū))
(2)-10bp處-TATAAT-(Pribnowbox)
(3)-35bp處-TTGACA-
第12頁/共52頁14.2.3原核生物RNA的轉(zhuǎn)錄過程14.2.3.1模板的識別第13頁/共52頁14.2.3.2原核生物的轉(zhuǎn)錄起始σ亞基辨認-35區(qū)RNApol全酶移向-10區(qū)合成第一個磷酸二酯鍵5’-pppGpN(A)-OH-轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物RNApol(αββ′σ)—DNA—pppGpN-OHσ亞基脫落(結(jié)合松弛)(結(jié)合緊密)轉(zhuǎn)錄起始不需引物!16/50第14頁/共52頁RNA聚合酶保護區(qū)結(jié)構(gòu)基因終止點10-10TTGACATATAAT轉(zhuǎn)錄開始+1翻譯開始Purine-35(Pribnowbox)辨認結(jié)合區(qū)轉(zhuǎn)錄起始區(qū)12/50編碼鏈第15頁/共52頁RNA聚合酶σ因子識別及結(jié)合啟動子,延長時脫落不參與轉(zhuǎn)錄過程,是轉(zhuǎn)錄輔助因子識別位點:啟動子-35區(qū)、-10區(qū)第16頁/共52頁結(jié)合過程:閉和的啟動子復(fù)合體RNA聚合酶(全酶)中的σ因子在DNA雙鏈上迅速、隨機滑動,尋找到啟動子-35區(qū),形成疏松的復(fù)合物,DNA雙鏈未解開。開放的啟動子復(fù)合體RNA聚合酶(全酶)移向-10區(qū)和轉(zhuǎn)錄起始第17頁/共52頁14.2.3.3延長----轉(zhuǎn)錄泡
RNA聚合酶(核心酶)
◆與DNA模板緊密結(jié)合,沿3’5’方向移動
◆解旋作用:DNA解開
◆聚合功能(不具外切酶功能)
雜交螺旋
◆RNA-DNA形成雜交螺旋
◆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RNA沿5’3’方向延長
第18頁/共52頁第19頁/共52頁第20頁/共52頁SeeMovie第21頁/共52頁14.2.3.4轉(zhuǎn)錄終止:終止子和終止因子
轉(zhuǎn)錄至模板某一位置
停止形成磷酸二酯鍵
RNA—DNA雜交鏈解開
DNA解鏈的部分重新形成雙螺旋
RNA聚合酶離開DNA
第22頁/共52頁終止子(terminator)——提供轉(zhuǎn)錄終止信號的DNA序列終止因子(terminationfactor)——協(xié)助RNAPol識別終止信號的輔助因子第23頁/共52頁第24頁/共52頁第一類:
依賴ρ-因子的終止1、轉(zhuǎn)錄終止的兩種方式(原核)第25頁/共52頁第26頁/共52頁
DNA模板上有終止信號
轉(zhuǎn)錄出來的RNAPol遇此結(jié)構(gòu)停止工作DNA和RNA(dA:rU)穩(wěn)定性下降富含GC/AT的回文結(jié)構(gòu)自身互補形成發(fā)夾狀結(jié)構(gòu)(hairpin)3’尾端有≥4個UDNA恢復(fù)雙鏈,釋放轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物第二類:不依賴ρ-因子的終止第27頁/共52頁UUGCAGCCUGAGAAAUCAGGCUGAUGG…5’3’…5’3’自發(fā)形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)(轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物3’末端)例如:第28頁/共52頁AUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUU5’3’UUUU……5’3’自發(fā)形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)第29頁/共52頁發(fā)夾結(jié)構(gòu)環(huán)莖多個U
DNA模板
3’5’第30頁/共52頁第31頁/共52頁起始雙鏈DNA局部解開磷酸二酯鍵形成終止階段解鏈區(qū)到達基因終點延長階段53RNA啟動子Promoter
終止子terminator5RNA聚合酶5353553離開第32頁/共52頁
轉(zhuǎn)錄后的加工
第33頁/共52頁14.2.4.1原核生物mRNA多順反子轉(zhuǎn)錄與翻譯同步mRNA不需加工
壽命短第34頁/共52頁14.2.4.1tRNA的加工堿基修飾3’端5’端切除反密碼環(huán)的內(nèi)含子稀有堿基---Tψ脫氨---AMPIMP還原---DHU甲基化---mAmGCCA-OHRNaseP切除多余的核苷酸RNaseP在前tRNA二級結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上第35頁/共52頁第36頁/共52頁14.2.4.3
rRNA的加工第37頁/共52頁RNaseⅢRNaseⅢRNaseE甲基化堿基甲基化核糖第38頁/共52頁14.3真核細胞中的轉(zhuǎn)錄
1、轉(zhuǎn)錄與翻譯在異處第39頁/共52頁14.3.1真核細胞RNA聚合酶在DEAE-Sephadex柱上的洗脫次序稱為酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ
沒有對應(yīng)于σ因子的成分,需要轉(zhuǎn)錄因子參與第40頁/共52頁14.3.2啟動子(Hongness盒–25)TATA框(Hognessbox)與RNA聚合酶的定位有關(guān)
DNA雙鏈解開的部位輔助因子為通用轉(zhuǎn)錄因子(generaltranscriptionfactor,GTF)第41頁/共52頁
4、真核與原核生物mRNA的區(qū)別原核生物mRNA多順反子轉(zhuǎn)錄與翻譯同步mRNA不需加工
壽命短真核生物mRNA單順反子轉(zhuǎn)錄后需加工運至胞漿再翻譯mRNA需加工壽命較長第42頁/共52頁
真核生物的mRNA轉(zhuǎn)錄后加工轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物:hnRNA(核不均一RNA)
+
蛋白質(zhì)不均一核糖核蛋白(hnRNP)第43頁/共52頁加帽加尾mRNA前體的剪接5’端:m7GpppGpN作用:穩(wěn)定mRNA5’端和翻譯的起始有關(guān)3’端:polyA尾巴作用:穩(wěn)定mRNA
和翻譯模板活性有關(guān)剪除內(nèi)含子,連接外顯子加工過程主要包括:第44頁/共52頁5pppGp…5GpppGp…pppGppi鳥苷酰轉(zhuǎn)移酶5m7GpppGp…甲基轉(zhuǎn)移酶SAM5ppGp…磷酸酶Pi(1)真核生物mRNA轉(zhuǎn)錄后加工--“加帽”以5’-5’三磷酸相連第45頁/共52頁步驟1步驟2作用位置200~250(2)真核生物mRNA轉(zhuǎn)錄后加工--加polyA尾第46頁/共52頁外顯子內(nèi)含子DNA
hnRNA(3)真核生物mRNA轉(zhuǎn)錄后加工—剪接第47頁/共52頁mRNA-DNAhybridsforthechickenovalbumingene(theR-loopingtechnique)第48頁/共52頁●14.4核酶---真核生物rRNA的自身剪切
四膜蟲
26SrRNA核酶(ribozyme)應(yīng)用
前體6.4kb414bp內(nèi)含子
5.986kb
無酶催化,自身剪接具有催化功能的RNA
切割特異性RNA序列具特定的二級結(jié)構(gòu)---槌頭結(jié)構(gòu)人工合成核酶的槌頭結(jié)構(gòu)破壞HIV病毒
第49頁/共52頁底物催化部分圖13-11第50頁/共52頁酶底物圖13-12第51頁/共52頁DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的比較相同點模板兩股鏈均復(fù)制模板鏈轉(zhuǎn)錄合成方式半保留復(fù)制不對稱轉(zhuǎn)錄原料
dNTPNTP
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