第二章中藥制劑的鑒別-2015秋-本科生課件

中藥制劑的鑒別藥物分析教研室內(nèi)容第一節(jié)性狀鑒別第二節(jié)顯微鑒別第三節(jié)理化鑒別大綱要求熟悉性狀鑒別的內(nèi)容熟悉顯微鑒別的內(nèi)容熟悉理化鑒別的方法掌握理化鑒別中薄層色譜法中藥制劑的鑒別定義

利用一定的方法來(lái)確定中藥制劑中原料藥的組成，從而判斷該制劑的真?zhèn)?。?nèi)容性狀鑒別

顯微鑒別理化鑒別中藥制劑的鑒別定義

中藥制劑的性狀是指除去包裝后的性狀，包括大小、色澤、表面特征、質(zhì)地、氣味等方面。

性狀與投料的原料質(zhì)量及工藝有關(guān)初步反映中藥制劑質(zhì)量狀況中藥制劑的鑒別性狀鑒別內(nèi)容顏色：與所含成分、制備工藝有關(guān)復(fù)方制劑考慮到貯存期間顏色會(huì)變深形態(tài)：不同劑型，形態(tài)不一（如：液體）形狀：與設(shè)備模具有關(guān)（栓劑）氣：香、芳香、清香、腥、臭、特異等不明顯用氣微，香氣濃厚時(shí)用芳香濃郁味：甜、酸、苦、澀、辛、涼、咸、辣、麻等中藥制劑的鑒別性狀鑒別注意1.制劑的性狀指成品的顏色、形態(tài)、氣味等2.有包衣的丸劑、片劑應(yīng)描述除去包衣后的片心、丸心的顏色及氣味。3.硬膠囊應(yīng)寫明除去膠囊后內(nèi)容物的性狀4.制劑色澤有兩種色調(diào)組合，描寫時(shí)以后者為主，如棕紅色中藥制劑的鑒別性狀鑒別各種劑型的性狀描述（見書）中藥制劑的鑒別性狀鑒別物理常數(shù)測(cè)定

折光率、旋光度、比旋度、凝點(diǎn)、熔點(diǎn)、相對(duì)密度定性鑒別的一種手段中藥制劑的鑒別性狀鑒別局限性

中藥種類繁多,品種復(fù)雜。中成藥而言，包括“丸、散、膏、丹、片”等多種劑型，僅靠傳統(tǒng)的性狀鑒定方法不能識(shí)別出其中的方藥組成和藥材的真?zhèn)巍Ｖ兴幹苿┑蔫b別性狀鑒別丸散膏丹、神仙難辨發(fā)展

我國(guó)著名生藥學(xué)家徐國(guó)鈞教授，開創(chuàng)了中藥制劑顯微鑒定，從實(shí)際上解決了中藥材粉末和含有中藥原粉的中成藥制劑的真?zhèn)舞b定問(wèn)題。在我國(guó)歷版藥典中均有很大部分的中成藥采用顯微方法鑒定。

中藥制劑的鑒別性狀鑒別定義利用顯微鏡來(lái)觀察中藥制劑中原料藥材的組織碎片、細(xì)胞或內(nèi)含物等特征，從而鑒別制劑的處方組成。

中藥制劑的鑒別顯微鑒別使用范圍

以藥材粉碎成細(xì)粉后直接制成制劑或添加有部分藥材粉末的制劑，原藥材的顯微特征仍保留。（有那些劑型？？？）蛇膽川貝散：川貝母僅用淀粉粒作為指標(biāo)。牛黃解毒片：大黃用草酸鈣簇晶為鑒別特征。中藥制劑的鑒別顯微鑒別制片方法顯微鑒定，制作良好的切片或標(biāo)準(zhǔn)片是關(guān)鍵。把切片或粉末標(biāo)準(zhǔn)片用適當(dāng)?shù)脑囈哼M(jìn)行處理和封藏，試液的選擇必須具有合理性。中藥制劑的鑒別顯微鑒別制片方法——試液的選擇1.水或稀甘油：細(xì)胞壁顏色及淀粉粒、油滴、樹脂2.水合氯醛：組織構(gòu)造和細(xì)胞形狀及葉片、花和花粉粒，尤其適于觀察草酸鈣結(jié)晶。3.

5%氫氧化鉀液：可溶解糊粉粒、淀粉粒及蛋白質(zhì)，使細(xì)胞壁膨脹，從而增強(qiáng)透明度。4.氯化堿液：試劑可漂白切片及除去葉綠素5.1:1乙醚乙醇液：用于脫去種子類藥材切片中的脂類及揮發(fā)油類成分

中藥制劑的鑒別顯微鑒別制片方法中藥制劑的鑒別顯微鑒別散劑、膠囊劑：粉末+載玻片+適當(dāng)?shù)脑囈猴@微觀察制片方法中藥制劑的鑒別顯微鑒別片劑：正中切開，由切開面由外至內(nèi)刮取少量樣品，裝片。粉末+載玻片+適當(dāng)?shù)脑囈猴@微觀察（糖衣片）制片方法中藥制劑的鑒別顯微鑒別丸劑、顆粒劑：研成粉末，裝片粉末+載玻片+適當(dāng)?shù)脑囈猴@微觀察蜜丸：正中切開，由切開面由外至內(nèi)刮取少量樣品，裝片。制片方法中藥制劑的鑒別顯微鑒別蜜丸——除蜜方法1.5%氫氧化鉀液適量蜜丸+試管中+5%氫氧化鉀液加熱至玻璃棒擠壓能離散為止，傾出堿液+水洗滌，取出少量+試液處理觀察制片方法中藥制劑的鑒別顯微鑒別蜜丸——除蜜方法2.硝鉻酸法適量蜜丸+試管中+硝鉻酸液放置玻璃棒擠壓能離散為止，傾出酸液+水洗滌，取出少量+試液處理觀察制片方法中藥制劑的鑒別顯微鑒別蜜丸——除蜜方法3.氯酸鉀法：適量蜜丸+試管中+硝酸溶液及氯酸鉀少量緩緩加熱至產(chǎn)生的氣泡漸少時(shí)+氯酸鉀少量玻璃棒擠壓能離散為止，傾出酸液+水洗滌，取出少量+試液處理觀察制片方法中藥制劑的鑒別顯微鑒別蜜丸——除蜜方法4.離心分離法：蜜丸切碎+水洗滌離心管中離心分離沉淀（多次）取出少量+試液處理觀察例中藥制劑的鑒別顯微鑒別例中藥制劑的鑒別顯微鑒別山藥茯苓熟地黃牡丹皮山茱萸澤瀉局限性1.藥材粉末特征間的交叉干擾。2.經(jīng)過(guò)提取的藥材，其化學(xué)成分已被浸出，但仍然保持著原來(lái)的細(xì)胞形態(tài)特征，所以僅通過(guò)顯微觀察不能完全解決內(nèi)在的質(zhì)量問(wèn)題。中藥制劑的鑒別顯微鑒別局限性3.一種藥材具有多種植物來(lái)源，通常粉末的特征各不相同。4.藥材在處方中所占的比例小(如貴重藥、毒劇藥)專屬性特征出現(xiàn)的幾率更??；有的粉末粒度過(guò)細(xì)(如水飛法制得的礦物藥粉末)，使特征變得不明顯。

中藥制劑的鑒別顯微鑒別定義利用物理的、化學(xué)的或物理化學(xué)的方法對(duì)制劑中所含的化學(xué)成分進(jìn)行定性鑒別，從而判斷制劑的真?zhèn)?。方法化學(xué)反應(yīng)法升華法熒光法光譜法

色譜法中藥制劑的鑒別理化鑒別

一般化學(xué)反應(yīng)法

中藥制劑的鑒別理化鑒別中藥制劑化學(xué)成分+合適的提取溶劑提取待檢測(cè)成分排除其他成分干擾

一般化學(xué)反應(yīng)法——注意事項(xiàng)

1.避免附加成分的干擾：如注射劑、顆粒劑及糖漿劑2.慎重使用專屬性不好的分析反應(yīng)：如泡沫反應(yīng)、三氯化鐵顯色反應(yīng)3.對(duì)樣品進(jìn)行分離、精制：除去干擾分析反應(yīng)的物質(zhì)，借此改善鑒別方法的專屬性4.采用陰性及陽(yáng)性對(duì)照方式，對(duì)擬定的鑒別方法進(jìn)行反復(fù)驗(yàn)證：防止出現(xiàn)假陽(yáng)性中藥制劑的鑒別理化鑒別

一般化學(xué)反應(yīng)法——例

牛黃解毒片中黃芩、大黃的定性鑒別反應(yīng)取本品6片(包衣者除去包衣)，研細(xì)，加乙醇1Oml，溫?zé)?0分鐘，過(guò)濾，濾液作如下反應(yīng)

(1)取濾液5ml，加鎂粉少量與鹽酸0.5ml，加熱，即顯紅色。

(2)另取濾液4ml，加氫氧化鈉試液，即顯紅色，再加30%過(guò)氧化氫溶液，加熱，紅色不消失，加酸或酸性時(shí)，則紅色變?yōu)辄S色。中藥制劑的鑒別理化鑒別升華法

定義：將具有升華性質(zhì)的成分，在一定的溫度下從制劑中分離出來(lái)，并以升華物所具有的某些理化性質(zhì)作為制劑鑒定的依據(jù)。制劑中若有2種以上的藥味都含有升華物，升華的溫度不同，可控制加熱的溫度分段收集升華物，分別進(jìn)行鑒定。中藥制劑的鑒別理化鑒別升華法操作方法：詳見P20中藥制劑的鑒別理化鑒別升華法——例

牛黃解毒丸微量升華鑒別

取本品進(jìn)行微量升華，先得白色升華物后，繼得黃色升華物。將升華物分別置顯微鏡下觀察。中藥制劑的鑒別理化鑒別光譜法熒光法可見－紫外分光光度法紅外分光光度法中藥制劑的鑒別理化鑒別光譜法——熒光法有些中藥材中含有能產(chǎn)生熒光的化學(xué)成分：在可見光or紫外光照射下發(fā)出熒光，有的須經(jīng)試劑處理后發(fā)出熒光含有這類藥材的中藥制劑:熒光法鑒別操作方法:取制劑的提取液點(diǎn)在濾紙上或試紙上，置紫外光燈下(365nmor254nm)觀察，有時(shí)則是加一定的試劑后再進(jìn)行觀察。中藥制劑的鑒別理化鑒別光譜法——熒光法

例：板藍(lán)根沖劑的熒光鑒別取本品0.5g，加水5ml使溶解，靜置，取上清液點(diǎn)于濾紙上，晾干，置紫外光燈(365nm)下觀察，顯藍(lán)紫色。中藥制劑的鑒別理化鑒別光譜法——可見－紫外分光光度法中藥材有些化學(xué)成分在可見紫外光區(qū)有選擇性吸收，顯示特征吸收光譜。不同的藥材所含的成分不同，在一定條件下吸收光譜的特征可用于鑒別藥材，因此該法也可用于中藥制劑的鑒別。

中藥制劑的鑒別理化鑒別光譜法——可見－紫外分光光度法中藥制劑成分復(fù)雜，具吸收的加和性，樣品不純化，所得光譜為混合光譜，專屬性差。

樣品純化后測(cè)定吸收光譜，常見方法：1.規(guī)定吸收波長(zhǎng)法2.對(duì)照品對(duì)比法

3.規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度法

4.規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度比值法

5.多溶劑光譜法中藥制劑的鑒別理化鑒別光譜法——可見－紫外分光光度法

1.規(guī)定吸收波長(zhǎng)法：樣品經(jīng)適當(dāng)處理后，測(cè)定吸收光譜，在一定波長(zhǎng)處有最大吸收。如復(fù)方丹參滴丸中丹參的鑒別：取本品15丸，研細(xì)，分次加水少量，攪拌、濾過(guò)、濾液移至1OOml量瓶中，并加水至刻度，取溶液2ml，加水至25ml，照分光光度法測(cè)定，在283nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。

中藥制劑的鑒別理化鑒別復(fù)方丹參片紫外光譜圖283nm光譜法——可見－紫外分光光度法

2.對(duì)照品對(duì)比法：取對(duì)照品或?qū)φ账幉募肮┰嚻方?jīng)處理后，制成對(duì)照品及供試品溶液，分別測(cè)定吸收光譜，比較二者吸收光譜的一致性。

中藥制劑的鑒別理化鑒別光譜法——可見－紫外分光光度法

3.規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度法：取樣品經(jīng)處理后，測(cè)定吸收光譜，在吸收光譜的規(guī)定波長(zhǎng)下，應(yīng)有若干個(gè)吸收峰，并有相應(yīng)的吸收度值。

中藥制劑的鑒別理化鑒別光譜法——可見－紫外分光光度法

4.規(guī)定吸收波長(zhǎng)和吸收度比值法：樣品在一定波長(zhǎng)下應(yīng)產(chǎn)生相應(yīng)的吸收峰，并且吸收度與對(duì)照峰吸收度比值應(yīng)在一定的范圍之內(nèi)。需有對(duì)照品或參照物。

中藥制劑的鑒別理化鑒別光譜法——紅外分光光度法廣泛用于合成藥的鑒別，用于中藥制劑的鑒別還存在不少困難：成分復(fù)雜，組分吸收峰疊加，專屬性重現(xiàn)性不理想。方法：固體供試品采用溴化鉀壓片法液體供試品采用夾片法

中藥制劑的鑒別理化鑒別光譜法——紅外分光光度法對(duì)于中藥材的真?zhèn)舞b別及摻雜檢查可提供有價(jià)值的信息主要成分的質(zhì)和量大致相同，而且基本恒定，所得紅外光譜也呈現(xiàn)很好的相似性，可重復(fù)，因而可作真?zhèn)舞b別。依據(jù)：I.不太復(fù)雜的混合體系，圖譜有特征性

II.統(tǒng)一分離提取方法，圖譜特征強(qiáng)重復(fù)性好

中藥制劑的鑒別理化鑒別光譜法——紅外分光光度法對(duì)于中藥材的真?zhèn)舞b別及摻雜檢查可提供有價(jià)值的信息例：熊膽、牛膽、豬膽的紅外圖譜比較

中藥制劑的鑒別理化鑒別在特征區(qū)和指紋區(qū)三者則有明顯的差別色譜法紙色譜

TLC法

GC法

HPLC法

中藥制劑的鑒別理化鑒別色譜法—紙色譜法

載體：紙固定相：紙上所含水分或其他物質(zhì)展開劑：供試品、對(duì)照品、對(duì)照藥材

中藥制劑的鑒別理化鑒別色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別定義：將適宜的吸附劑或載體涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開后，與適宜的對(duì)照物按同法在同板上所得的色譜圖對(duì)比，并可用薄層掃描儀掃描，用于中藥制劑的鑒定。中藥制劑的鑒別理化鑒別供試品溶液的制備

薄層板的制備點(diǎn)樣展開顯色與檢視

色譜法—TLC法操作步驟色譜法—TLC法

中藥制劑的鑒別理化鑒別供試品溶液的制備

單一溶劑萃取法：采用單一溶劑萃取出樣品中待測(cè)成分，舍棄其他成分。色譜法—TLC法

中藥制劑的鑒別理化鑒別供試品溶液的制備

分段萃取法液－液萃取法固－液萃取法中藥制劑的鑒別理化鑒別TLC法使用的材料：色譜法—TLC法

薄層板涂布器點(diǎn)樣器材層析缸顯色與檢測(cè)儀器中藥制劑的鑒別理化鑒別TLC法使用的材料—薄層板

手工自制板：玻璃：1～2mm優(yōu)質(zhì)平板玻璃光潔、平整洗凈至不掛水珠，晾干

預(yù)制板：普通薄層板和高效薄層板（鋁箔）色譜法—TLC法

中藥制劑的鑒別理化鑒別TLC法使用的材料—薄層板

載體：硅膠G（石膏作粘合劑）

硅膠GF254（石膏、熒光劑）硅膠H（不含粘合劑）硅膠HF254（熒光劑）聚酰胺薄膜色譜法—TLC法

粘合劑：羧甲基纖維素鈉水溶液（0.2％～0.5％）中藥制劑的鑒別理化鑒別操作方法—薄層板的制備

市售薄層板：臨用前，110℃活化30min

聚酰胺薄膜不用活化

自制薄層板1份固定相+3份水（or含粘合劑的水溶液），在研缽中向同一方向研磨混勻，驅(qū)除氣泡，鋪板（0.2～0.3mm).置水平臺(tái)上室溫晾干，110℃活化30min，置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢驗(yàn)均勻度、麻點(diǎn)、氣泡、有無(wú)污染色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別TLC法使用的材料—涂布器手工、半自動(dòng)、全自動(dòng)固定厚度或可調(diào)節(jié)厚度色譜法—TLC法

中藥制劑的鑒別理化鑒別TLC法使用的材料—點(diǎn)樣器材定量點(diǎn)樣毛細(xì)管：0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10μl。微量注射器（針尖平頭）半自動(dòng)、自動(dòng)點(diǎn)樣器

色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別操作方法—點(diǎn)樣方法：垂直方向，成圓點(diǎn)狀or窄細(xì)的條帶狀（增大上樣量）注意：點(diǎn)樣時(shí)勿損傷薄層表面中藥制劑的鑒別理化鑒別操作方法—展開

展開劑的制備：新鮮配制展開：點(diǎn)樣后的薄層板放入加有展開劑的層析缸中，密閉，一般上行展開，薄層板浸入展開劑深度一般要求溶劑最初的前沿距原點(diǎn)約5mm，展開至規(guī)定展距后立即將薄層板取出，晾干，以備檢測(cè)。

展距：一般8～15cm，高效板5～8cm色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別操作方法—展開

特殊情況處理若需要展開劑或其他溶劑的蒸汽平衡者可在雙槽展開箱的一側(cè)加適量的溶劑。若需達(dá)到飽和狀態(tài)，可在展開箱內(nèi)壁貼一被溶劑濕潤(rùn)的濾紙使展開箱易于被蒸汽平衡。

若薄層板需同時(shí)預(yù)平衡者，應(yīng)將薄層板放入箱內(nèi)沒(méi)有溶劑的一側(cè)槽中，平衡后再將溶劑傾入此槽中展開中藥制劑的鑒別理化鑒別TLC法使用的材料—顯色與檢測(cè)儀器色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別TLC法使用的材料—顯色與檢測(cè)儀器色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別記錄照相掃描圖譜描畫色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別1.樣品的預(yù)處理及供試液的制備2.薄層色譜的點(diǎn)樣技術(shù)3.吸附劑的活性與相對(duì)濕度的影響4.空氣溫度、濕度的影響色譜法—TLC法主要影響因素中藥制劑的鑒別理化鑒別1.

樣品的預(yù)處理及供試液的制備供試液凈化處理相當(dāng)重要。制備樣品供試液的溶劑要求，溶解度不宜太大，粘度不易太高，沸點(diǎn)適中。溶解樣品溶劑沸點(diǎn)不宜太高（如正丁醇）or太低（如乙醚）。

色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別2.薄層色譜的點(diǎn)樣技術(shù)

點(diǎn)樣量不宜過(guò)大，最好控制在10μl以下，不要破壞薄層板。

色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別3.吸附劑的活性與相對(duì)濕度的影響

吸附劑（硅膠）的活性取決于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的相對(duì)濕度，控制展開時(shí)的相對(duì)濕度：在雙槽展開箱的一側(cè)用一定濃度的硫酸溶液，密閉放置一定時(shí)間，再加入展開劑于另一側(cè)展開。將點(diǎn)樣后的薄層板放入內(nèi)有一定濃度的硫酸溶液或其他調(diào)節(jié)相對(duì)濕度的無(wú)機(jī)鹽水溶液的容器中，密閉放置一定時(shí)間后，取出，立即在箱中展開。記錄試驗(yàn)濕度色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別對(duì)照物選擇

對(duì)照品對(duì)照陰陽(yáng)對(duì)照對(duì)照藥材和對(duì)照品同時(shí)對(duì)照色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別對(duì)照物選擇色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別對(duì)照物選擇—對(duì)照品對(duì)照

用已知中藥制劑某一藥材的某一有效成分或特征性成分做對(duì)照品。色譜法—TLC法中藥制劑的鑒別理化鑒別對(duì)照物選擇—陰陽(yáng)對(duì)照

化學(xué)成分和有效成分不明確，有些已明確但無(wú)對(duì)照品對(duì)照藥材溶液制備：色譜法—TLC法把制劑中要鑒別的某對(duì)照藥材，按制劑的制法處理后，以制劑相同的比例、條件、方法提取，制成該味藥的陽(yáng)性對(duì)照液。中藥制劑的鑒別理化鑒別對(duì)照物選擇—陰陽(yáng)對(duì)照

化學(xué)成分和有效成分不明確，有些已明確但無(wú)對(duì)照品

從制劑處方中減去要鑒別的該味藥材，剩下其他各味藥按制劑的制法處理后，以制劑相同的比例、條件、方法提取，制成該味藥的陰性對(duì)照液。色譜法—TLC法陰性對(duì)照液制備：中藥制劑的鑒別理化鑒別對(duì)照物選擇—對(duì)照藥材和對(duì)