GB/T 21786-2008化學(xué)品細(xì)菌回復(fù)突變試驗方法

犐犆犛１３．３００；１１．１００

犃８０

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２１７８６—２００８

化學(xué)品細(xì)菌回復(fù)突變試驗方法

犆犺犲犿犻犮犪犾狊—犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犫犪犮狋犲狉犻犪犾狉犲狏犲狉狊犲犿狌狋犪狋犻狅狀

２００８０５１２發(fā)布２００８０９０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

書

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前言

本標(biāo)準(zhǔn)等同采用經(jīng)濟合作與發(fā)展組織（ＯＥＣＤ）化學(xué)品測試指南Ｎｏ．４７１（１９９７年）《細(xì)菌回復(fù)突變試

驗》（英文版）。

本標(biāo)準(zhǔn)作了以下編輯性修改：

———增加了范圍部分；

———計量單位改成我國法定計量單位；

———刪除了ＯＥＣＤ的參考文獻部分。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國危險化學(xué)品管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（ＳＡＣ／ＴＣ２５１）提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)負(fù)責(zé)起草單位：中國疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生與中毒控制所。

本標(biāo)準(zhǔn)參加起草單位：北京市疾病預(yù)防控制中心、寧波出入境檢驗檢疫局。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：鄧瑛、穆嘯群、吳維皚、趙超英、龍再浩。

Ⅰ

書

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犗犈犆犇引言

１．細(xì)菌回復(fù)突變試驗應(yīng)用需要氨基酸的鼠傷寒沙門氏菌（犛犪犾犿狅狀犲犾犾犪犜狔狆犺犻犿狌狉犻狌犿）和大腸桿菌

（犈狊犮犺犲狉犻犮犺犻犪犮狅犾犻）菌株去檢測由ＤＮＡ的一個或數(shù)個堿基對的置換、增加或缺失造成的點突變。本試

驗的原理是檢測試驗株中存在的回復(fù)突變并恢復(fù)合成必需氨基酸的能力。發(fā)生回復(fù)突變的細(xì)菌能在缺

乏特定必需氨基酸的條件下生長，而親代菌株則不能生長，故能檢出。當(dāng)營養(yǎng)缺陷型菌株在受試樣品作

用下發(fā)生回復(fù)突變后，即恢復(fù)了合成特定氨基酸的能力，因此可以在不含該氨基酸的培養(yǎng)基上形成菌

落，而那些沒有發(fā)生突變的菌株和突變菌株的親代菌株則因無法合成特定氨基酸而不能在不含該氨基

酸的培養(yǎng)基上形成菌落。

２．點突變是人類的很多遺傳性疾病的原因，而且，目前已有充足的證據(jù)證明，人和實驗動物體細(xì)胞

的癌基因和抑癌基因的點突變與腫瘤發(fā)生有關(guān)。細(xì)菌回復(fù)突變試驗具有快速、經(jīng)濟和操作相對簡便等

優(yōu)點。很多試驗菌株還具有某些特征，使其對某類致突變物更加敏感，這些特征包括回復(fù)突變位點的應(yīng)

答性ＤＮＡ序列、細(xì)胞對大分子物質(zhì)的通透性增高以及ＤＮＡ修復(fù)系統(tǒng)的消除（缺失）或ＤＮＡ易錯修復(fù)

增多等。通過特異性菌株獲得的試驗結(jié)果可為遺傳毒性物質(zhì)誘發(fā)的突變類型提供有價值的研究資料。

已建立了包含大量不同結(jié)構(gòu)化學(xué)物的細(xì)菌回復(fù)突變試驗結(jié)果的數(shù)據(jù)庫，可以從中得到所需資料，同時，

還為測試不同理化性質(zhì)的化學(xué)物（例如可對揮發(fā)性物質(zhì)）建立了完善的方法。

３．細(xì)菌恢復(fù)突變試驗應(yīng)用的是原核細(xì)胞，其在吸收、代謝、染色體結(jié)構(gòu)、ＤＮＡ修復(fù)過程等方面與哺

乳動物細(xì)胞都有差別。且本試驗是體外試驗，一般需要加入外源性代謝活化系統(tǒng)。但外源性代謝活化

系統(tǒng)不能完全模擬體內(nèi)代謝條件，因此，本試驗的結(jié)果不能為受試樣品對哺乳動物的致突變性和致癌性

提供直接證據(jù)。

４．細(xì)菌回復(fù)突變試驗通常作為遺傳毒性初篩試驗，尤其適用于對受試樣品誘發(fā)點突變能力的檢

測。大量研究數(shù)據(jù)表明，很多在本試驗中獲得陽性結(jié)果的化學(xué)物在其他試驗中也具有致突變活性。但

也有一些致突變劑在本試驗中（結(jié)果）為陰性的例子，本試驗存在這種缺陷可能是由于檢測終點的特殊

性質(zhì)、代謝活化過程不同以及生物利用度的差異等原因造成的。另一方面，一些使本試驗靈敏度增加的

因素也會造成對致突變活性估計過高。

５．細(xì)菌回復(fù)試驗不適合評價某些類型的化學(xué)物，例如，具有較強殺菌作用的化合物（如某些抗生

素）、認(rèn)為或已知對哺乳動物細(xì)胞復(fù)制過程有特異性干擾作用的化合物（如拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、核苷酸類

似物等），這些物質(zhì)選用哺乳動物的致突變試驗更合適。

６．盡管很多在本試驗中獲得陽性結(jié)果的化學(xué)品是哺乳動物的致癌物，但這種相關(guān)性并不是絕對

的，而是與化學(xué)物的種類有關(guān)。還有一些致癌物不能用本試驗檢出，因為這些物質(zhì)是通過其他的、非遺

傳致癌機制或受試菌株不具備（存在）的機制引發(fā)癌癥的。

Ⅱ

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化學(xué)品細(xì)菌回復(fù)突變試驗方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化學(xué)品細(xì)菌回復(fù)突變試驗的范圍、術(shù)語和定義、試驗基本原則、試驗方法、試驗數(shù)據(jù)和

報告。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于檢測化學(xué)品（有殺菌作用的除外）的致突變性。

２術(shù)語和定義

下列定義和術(shù)語適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

２．１

回復(fù)突變試驗狉犲狏犲狉狊犲犿狌狋犪狋犻狅狀狋犲狊狋

在鼠傷寒沙門氏菌（狊犪犾犿狅狀犲犾犾犪狋狔狆犺犻犿狌狉犻狌犿）或大腸桿菌（犲狊犮犺犲狉犻犮犺犻犪犮狅犾犻）中檢測需要氨基酸菌

株（分別為組氨酸和色氨酸）的突變，以產(chǎn)生一株不依賴外界提供氨基酸的菌株。

２．２

堿基對置換突變劑犫犪狊犲狆犪犻狉狊狌犫狊狋犻狋狌狋犻狅狀犿狌狋犪犵犲狀狊

能夠引起ＤＮＡ堿基改變的物質(zhì)。在回變試驗中，這種改變可發(fā)生在原發(fā)突變位點，在細(xì)菌基因組

中也可在第二位點發(fā)生突變。

２．３

移碼突變劑犳狉犪犿犲狊犺犻犳狋犿狌狋犪犵犲狀狊

能夠引起ＤＮＡ中單個或多個堿基對的增加或缺失，繼而改變了ＲＮＡ的讀碼框的物質(zhì)。

３試驗基本原則

３．１細(xì)菌懸液分別在加入或不加入外源性代謝活化系統(tǒng)的條件下與受試樣品接觸，在平皿摻入試驗

中，將上述混合物與頂層瓊脂充分混勻，迅速傾入底層瓊脂平板（最低營養(yǎng)瓊脂）上。在預(yù)孵育試驗中，

先將細(xì)菌懸液與受試樣品混合進行預(yù)孵育，然后再與頂層瓊脂充分混勻，迅速傾入底層瓊脂平板（最低

營養(yǎng)瓊脂）上。上述平皿培養(yǎng)２ｄ～３ｄ后，計數(shù)回復(fù)菌落數(shù)并與溶劑對照組的自發(fā)回