人教版高中生物選修一專題二知識(shí)點(diǎn)匯總

人教版高中生物選修一專題二學(xué)問(wèn)點(diǎn)匯總專題二微生物的培育與應(yīng)用一、培育基：人們依據(jù)微生物對(duì)養(yǎng)分物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)生殖的養(yǎng)分基質(zhì)。1、★種類：培育基依據(jù)物理性質(zhì)可分為液體培育基和固體培育基。區(qū)分：液體培育基中參加凝固劑瓊脂制成瓊脂固體培育基，是試驗(yàn)室最常用的培育基之一結(jié)果：微生物在固體培育基外表生長(zhǎng)，可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落。2、★化學(xué)成分：包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源。★培育基還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)PH、特別養(yǎng)分物質(zhì)以及氧氣的要求。二、無(wú)菌技術(shù)例如，培育乳酸桿菌時(shí)需要在培育基中添加維生素，培育厭氧型微生物需要供給無(wú)氧條件，培育霉菌時(shí)須將培育基的pH調(diào)至酸性，培育細(xì)菌是需要將pH調(diào)至中性或微堿性，二、無(wú)菌技術(shù)1、爭(zhēng)辯和應(yīng)用微生物的前提是防止雜菌入侵，獲得純潔的微生物?！铽@得純潔培育物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌的入侵。留意：①對(duì)試驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)展清潔和消毒。①將用于微生物培育的器皿、接種用具和培育基等器具進(jìn)展滅菌。①為避開(kāi)四周環(huán)境中微生物的污染，試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰四周進(jìn)展。①試驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避開(kāi)已經(jīng)滅菌處理的材料用具與四周的物品相接觸?！餆o(wú)菌技術(shù)目的：防止試驗(yàn)室的培育物被其他外來(lái)微生物污染，有效避開(kāi)操作者自身被微生物感染?！?、消毒與滅菌的區(qū)分消毒指使用較為溫存的物理或化學(xué)方法殺死物體外表或內(nèi)部一局部微生物〔不包括芽孢和孢子〕滅菌則是指使用猛烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物，包括芽孢和孢子。方法方法適用條件所用器械①煮沸消毒①巴氏消毒日常生活中常用的方法不耐高溫的液體100度煮沸70-80度煮消毒①化學(xué)藥劑消毒如酒精擦拭雙手、氯氣消毒水源①紫外線消毒法接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)的外表或空氣紫外燈①灼燒滅菌接種工具、試管口和瓶口酒精燈滅菌①干熱滅菌耐高溫，需保持枯燥物品，如吸管，培育皿干熱滅菌箱①高壓蒸汽滅菌，培育基、無(wú)菌水高壓蒸汽滅菌鍋三、制作牛肉膏蛋白胨固體培育基接種室、接種想或超凈工作臺(tái)使用前先用石炭酸或煤酚皂等消毒液消毒，再用紫外線照耀三、制作牛肉膏蛋白胨固體培育基★1、方法步驟：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。 〔滅菌前調(diào)PH〕①稱量時(shí)，放在 稱量紙上稱量；①熔化時(shí)，參加瓊脂 ，補(bǔ)加蒸餾水至100ml；①滅菌前PH；①50①左右時(shí)，在酒精燈火焰四周倒平板。★2、倒平板操作的步驟：①將滅過(guò)菌的培育皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培育基的錐形瓶，左手拔出棉塞。①右手拿錐形瓶，將瓶口快速通過(guò)火焰。①用左手的拇指和食指將培育皿翻開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培育基〔約10～20mL〕倒入培育皿，左手馬上蓋上培育皿的皿蓋。①5～10min。然后，將平板倒過(guò)來(lái)放置。3、倒平板操作的爭(zhēng)辯①培育基滅菌后，需要冷卻到50①左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么方法來(lái)估量培育基的溫度？答：用手觸摸盛有培育基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可進(jìn)展倒平板了。①為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培育基。①平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：可以防止培育基外表的水分更快地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基，造成污染。①為什么？四、純化大腸桿菌答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培育基上滋生，最好不要用這個(gè)平板培育微生物。四、純化大腸桿菌1、微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法?！铩?〕平板劃線法：通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培育基外表連續(xù)劃線的操作。將聚攏的菌種逐步稀釋分散到一個(gè)細(xì)胞生殖而來(lái)的肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體，這就是菌落.作用:可用于分別細(xì)菌，不能計(jì)數(shù)?！铩?〕稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)展一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的外表，進(jìn)展培育。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。目的：使聚攏在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培育基外表形成單個(gè)的菌落。作用:可用于分別細(xì)菌，能計(jì)數(shù)。★2、平板劃線法操作步驟：①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。①在火焰旁冷卻接種環(huán)，并翻開(kāi)棉塞。①將試管口通過(guò)火焰。 ①將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。①將試管通過(guò)火焰，并塞上棉塞。①左手將皿蓋翻開(kāi)一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)快速伸入平板內(nèi)，劃三至五條留意不要?jiǎng)澠婆嘤蟆＂僮茻臃N環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開(kāi)頭往其次區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。留意不要將最終一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。①將平板倒置放入培育箱中培育?！铩舅伎肌考僭O(shè)其次劃線區(qū)域所劃的第一條線上無(wú)菌落,誤有：①接種環(huán)灼燒后未冷卻①劃線未從第一區(qū)域末端開(kāi)頭3、平板劃線操作的爭(zhēng)辯★①為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作完畢嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避開(kāi)接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線完畢后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)以便得到菌落。劃線完畢后灼燒接種環(huán)，能準(zhǔn)時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避開(kāi)細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。①答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。①在作其次次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)頭劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)頭，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步削減，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌生殖而來(lái)的菌落?！铫贋榈竭_(dá)把聚攏的菌種逐步稀釋分散到培育基的外表的目的，操作上留意什么？答：其次次及以后每次劃線前接種環(huán)要灼燒，冷卻后從上一區(qū)劃線末端開(kāi)頭劃，首尾不能重疊。4、涂布平板操作的步驟：①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。①取少量菌液滴加到培育基外表。①將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，8～10s。①用涂布器將菌液均勻地涂布在培育基外表。留意：①系列稀釋操作時(shí)，用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次的目的是使菌液與水充分5、涂布平板操作的爭(zhēng)辯①2如何進(jìn)展無(wú)菌操作？提示：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培育皿的距離要適宜、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰四周等等。★①純化培育完畢后，覺(jué)察培育基上菌落連成一片，可能的緣由是什么？五、確定培育基是否合格答：稀釋倍數(shù)不夠，菌落濃度太高；劃線時(shí)，劃完第一次后接著劃其次次。五、確定培育基是否合格六、菌種的保存★方法：將未接種的培育基在適宜溫度的恒溫箱中保溫1～2則需要重制備。六、菌種的保存〔1〕臨時(shí)保藏法適用：頻繁使用的菌種方法：承受固體斜面培育基，當(dāng)菌落長(zhǎng)成后，放入4★3～6個(gè)月，都要轉(zhuǎn)移到穎的培育基上。缺點(diǎn)：保存時(shí)間不長(zhǎng)，菌種簡(jiǎn)潔被污染或產(chǎn)生變異?！?〕甘油管藏 適用：長(zhǎng)期保存的菌種。方法：放在－20★的冷凍箱中保存?！锬蛩夭荒苤苯颖晦r(nóng)作物吸取，只有在脲酶的催化作用下分解成氨之后，才能被植物利用反響式：CO(NH2)2+H2O 細(xì)菌脲酶 CO2+2NH3一、篩選菌株1自然界篩選實(shí)例：查找耐高溫的TaqDNA聚合酶啟發(fā)：查找目的菌種時(shí)要依據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去查找。2、篩選菌株的培育基KH2PO4 1.4gNaHPO4 2.1gMgSO4H2O 0.2g葡萄糖 10.0g尿素 1.0g

思考：2、此配方能否篩選出產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌？為什么？答：能。緣由：只有產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌才能利用尿素作為氮源而生存。1該培育基的配方中，為微生物的生長(zhǎng)供給碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？2、此配方能否篩選出產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌？為什么？答：能。緣由：只有產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌才能利用尿素作為氮源而生存。瓊脂 15.0g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL。3、選擇性培育基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻擋其他種類微生物生長(zhǎng)的培育基二、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目★1、測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法：稀釋涂布平板法〔包括活菌〕顯微鏡直接計(jì)數(shù)〔包括死菌和活菌。此外測(cè)定大腸桿菌菌數(shù)的方法：伊紅美藍(lán)培育基 計(jì)算培育基上黑色菌落數(shù)目★2、稀釋涂布平板法原理：樣品稀釋度足夠高時(shí)，培育基外表生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。留意事項(xiàng)：①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置3個(gè)30～300的平板進(jìn)展計(jì)數(shù)，并取平均值。①統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)緣由：當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀看到的只是一個(gè)菌落。①每克樣品中的菌株數(shù)=〔C÷V〕×M 。C:某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)；V:所用稀釋液的體積；M:稀釋倍數(shù)。3、設(shè)置比照目的：排解試驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，提高試驗(yàn)結(jié)果可信度。試驗(yàn)：在做分別分解尿素的細(xì)菌試驗(yàn)時(shí)，A106150個(gè)菌落，而其50個(gè)菌落。試驗(yàn)：在做分別分解尿素的細(xì)菌試驗(yàn)時(shí)，A106150個(gè)菌落，而其50個(gè)菌落。A同學(xué)的結(jié)果產(chǎn)生緣由可能有：A同學(xué)的培育基被雜菌污染，培育基混入了其它含氮物質(zhì)，A同學(xué)所選用的土壤樣品與其他同學(xué)不同。三、試驗(yàn)設(shè)計(jì)①1、篩選分解尿素分解菌方法：①方法：使用以尿素為唯一氮源的選擇培育基進(jìn)展培育。①培育基要求：加瓊脂，加尿素，不加牛肉膏蛋白胨，加葡萄糖，不加抗生素。①1～2天，假設(shè)未接種的培育基無(wú)菌落，說(shuō)明培育基沒(méi)有雜菌污染。①制備以尿素為唯一氮源的培育基〔A〕和牛肉膏蛋白胨培育基BA培育基上的菌落少于以B基上的數(shù)目，說(shuō)明篩選成功★2、流程：土壤取樣→制備培育基→樣品稀釋涂布平板→微生物的培育與觀看→菌落計(jì)數(shù)H接近土壤中取樣。3～8cm的土壤層取樣。制備培育基：尿素唯一氮源的選擇培育基、牛肉膏蛋白胨培育基樣品的稀釋涂布平板：★①30~300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。①稀釋倍數(shù)：測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用104 105 106的稀釋液進(jìn)展平板培育；測(cè)定放線菌的數(shù)量，一般選用103 104 105的稀釋液進(jìn)展平板培育；測(cè)定真菌的數(shù)量，一般選用102 103 104的稀釋液進(jìn)展平板培育。微生物的培育與觀看①培育：不同種類的微生物，往往需要不同的培育溫度和培育時(shí)間。30~37①1~225~28①5~725~28①3~4天①a.24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，★b.選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，可防止因培育時(shí)間缺乏而導(dǎo)致遺漏菌落數(shù)目。菌落計(jì)數(shù)菌落特征，包括外形、大小、隆起程度、顏色等方面。★3、鑒定分解尿素的細(xì)菌:試劑：酚紅指示劑原理：脲酶催化尿素分解成氨→培育基堿性增加→酚紅變紅→結(jié)論：該細(xì)菌能分解尿素。尿素唯一氮〔鑒別培育基H的變化。4、測(cè)定大腸桿菌的數(shù)目：方法：濾膜法培育基：伊紅美藍(lán)培育基計(jì)算培育基上黑色菌落數(shù)目五、試驗(yàn)的具體操作〔一、無(wú)菌操作1、取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。2、應(yīng)在火焰旁稱取土壤，倒入錐形瓶中，塞好棉塞。3、在稀釋土壤溶液的過(guò)程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)展?！捕⒆龊脴?biāo)記，標(biāo)明培育基種類、培育日期、平板上培育樣品的稀釋度〔三、制定打算★總結(jié)：為從富含纖維素的土壤中分別獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培育基〔成分見(jiàn)下表表示無(wú)。酵母膏無(wú)機(jī)鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水培育基甲++++-++培育基乙+++-+++據(jù)表推斷，培育基甲不能〔填“能”或“不能”〕液體培育基不能分別單菌落培育基乙不能〔填“能”或“不能”〕用于分別和鑒別纖維素分解菌，緣由是乙培育基中沒(méi)有纖維素，不會(huì)形成CR-纖維素紅色復(fù)合物，即使消滅單菌落也不能確定其為纖維素分解菌現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌一、纖維素與纖維素酶

1．纖維素①根本單位：葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，①含量：是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。①分布：棉花是自然界中纖維素含量最高的自然產(chǎn)物，木材、作物秸稈等也富含纖維素。★2．纖維素酶①種類：纖維素酶是一種復(fù)合酶C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，1 ①作用：C、C 酶使纖維素分解成纖維二糖，葡萄糖苷酶將纖維二糖分解成葡萄糖。1 ★二、纖維素分解菌的篩選篩選方法：剛果紅染色法。能夠通過(guò)顏色反響直接對(duì)微生物進(jìn)展篩選。多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培育基中會(huì)消滅以纖維素分解菌為中心的透亮圈。這樣，我們就可以通過(guò)是否產(chǎn)生透亮圈來(lái)篩選纖維素分解菌。染色方法：一種是先培育微生物，再參加剛果紅進(jìn)展顏色反響；另一種是在倒平板時(shí)就參加剛果紅。NaCL作用：漂洗作用，洗去與纖維素結(jié)合不結(jié)實(shí)的剛果紅，以免消滅的透亮圈不夠清楚。三、試驗(yàn)設(shè)計(jì)★土壤取樣→選擇培育→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上→選擇產(chǎn)生透亮圈的菌落〔其次步是否需要，應(yīng)依據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來(lái)確定〕土壤采集：選擇富含纖維素的環(huán)境。選擇培育：目的：增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分別到所需要的微生物。30ml選擇培育基〔液體培育基〕的錐形瓶中，固定在搖床上，在肯定溫度下振蕩培育2-2d，直至培育液渾濁。梯度稀釋：涂布培育：將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上，是固體培育基篩選菌株：剛果紅染色法，選擇產(chǎn)生透亮圈的菌落。四、課題延長(zhǎng)1、為確定得到的透亮圈中的菌落是纖維素分解菌，需要進(jìn)展發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的試驗(yàn)，2、產(chǎn)纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。2.纖維素酶的測(cè)定方法：對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)展定量的測(cè)定。疑難解答為什么要在富含纖維素的環(huán)境中查找纖維素分解菌？答：由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于一般環(huán)境。將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)當(dāng)埋進(jìn)土壤多深？