文獻(xiàn)研讀李梵

文獻(xiàn)研讀匯報(bào)匯報(bào)人：導(dǎo)師：時(shí)間：2014年12月12日IF:6.8152匯報(bào)內(nèi)容研究背景材料方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果討論我的思考3研究背景TIR：Toll/Interleukin-1receptorNB：nucleotidebindingsiteLRR：leucine-richrepeatdomainsPCD：programmedcelldeath1.目前世界上的釀酒葡萄品種主要為歐洲種，而歐洲種為霜霉病和白粉病的易感品種。目前主要依賴農(nóng)用化學(xué)品抗病，而依賴農(nóng)用化學(xué)品抗病危害環(huán)境。通過(guò)轉(zhuǎn)基因的方法來(lái)獲取抗病基因并轉(zhuǎn)入感病植株是一種優(yōu)良的辦法。2.圓葉葡萄具有抗霜霉病、抗白粉病、抗蟲害、高產(chǎn)和高品質(zhì)的特點(diǎn)。可作為抗病基因來(lái)源。3.圓葉葡萄第12條染色體上有7個(gè)TIR-NBS-LRR類基因。有文獻(xiàn)指出植物（如擬南芥，萵筍）中這類基因?yàn)榭共』?。材料方法BAC：bacteriaartificialchromosome

1.圓葉葡萄和歐洲種葡萄的種間雜交植株部分可繁殖后代F1，F(xiàn)1經(jīng)回交的后代BCs對(duì)霜霉病和白粉病具有抗性。2.以BC5:3294-R23為材料，構(gòu)建BAC文庫(kù)，并從中篩選含有標(biāo)記（CB314.315與CB292.294）的基因片段，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行后續(xù)功能驗(yàn)證及其他研究。3.霜霉菌和白粉病病菌侵染植株后都會(huì)引起細(xì)胞程序性死亡（PCD），葉面產(chǎn)生壞死斑。實(shí)驗(yàn)結(jié)果6RGAs物理定位圖RGAs抗白粉病功能驗(yàn)證RGAs抗霜霉病功能驗(yàn)證MrRUN1/MrRPV1核質(zhì)分布5.MrRUN1和MrRPV1產(chǎn)生多個(gè)剪切片段RGA：resistancegeneanalog.抗病基因同源序列實(shí)驗(yàn)結(jié)果1同源序列氨基酸一致性百分比(b)MrRGA的結(jié)構(gòu)，包括TIR，NB，ARC和10-12個(gè)LRR，區(qū)別在于LRR的個(gè)數(shù)(c)預(yù)測(cè)的MrRGA蛋白的特征(d)同源序列氨基酸一致性百分比，均高于80％②TIR-NB-LRR類基因結(jié)構(gòu)及同源性實(shí)驗(yàn)結(jié)果1紅圈內(nèi)的是編碼TIR-NB-LRR蛋白的基因,是候選基因

①M(fèi)rRGAs遺傳圖和物理圖定位實(shí)驗(yàn)結(jié)果2抗病葡萄ShirazCarignanTempranilloPortan①M(fèi)rRGA基因抗白粉病的功能驗(yàn)證轉(zhuǎn)RGA10葡萄農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將候選基因轉(zhuǎn)入易感葡萄Shiraz,Tempranillp,Portan,Maccabeu,Carignan中,以表皮細(xì)胞48hpostinoculation后PCD面積百分比為標(biāo)準(zhǔn)衡量？實(shí)驗(yàn)結(jié)果2①M(fèi)rRGA基因抗白粉病的功能驗(yàn)證MrRGA10在其中四種易感葡萄相對(duì)高表達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果2MrRUN1對(duì)白粉病病菌分離菌A的抗性MrRUN1對(duì)白粉病病菌分離菌B的抗性②MrRUN1對(duì)不同白粉病菌分離菌的抗性結(jié)論：MrRUN1對(duì)白粉病病菌分離菌A和B無(wú)抗性AB來(lái)源于紐約，分別為L(zhǎng)NYM和NY137實(shí)驗(yàn)結(jié)果2MrRUN1對(duì)白粉病病菌分離菌Musc4的抗性來(lái)源于Georgia②MrRUN1對(duì)不同白粉病病菌分離菌的抗性總結(jié)：對(duì)不同分離菌具有不同的抗性，研究中僅對(duì)白粉病病菌分離菌Musc4無(wú)抗性。結(jié)論：MrRUN1對(duì)白粉病病菌分離菌Musc4無(wú)抗性？實(shí)驗(yàn)結(jié)果3①M(fèi)rRGAs基因抗霜霉病的功能驗(yàn)證用霜霉菌噴灑轉(zhuǎn)基因葡萄及抗病葡萄葉盤，用OIV（國(guó)際葡萄與葡萄酒組織）發(fā)病指數(shù)評(píng)價(jià)6dpi時(shí)的得病率，主要指標(biāo)是孢子生成濃度和PCD面積。OIV得分5以上為抗霜霉病?？共∑咸艳D(zhuǎn)RGA8葡萄？實(shí)驗(yàn)結(jié)果3①M(fèi)rRGAs基因抗霜霉病的功能驗(yàn)證通過(guò)孢子囊的生成情況進(jìn)一步驗(yàn)證MrRGA8的抗霜霉病性能，由圖中可以看出轉(zhuǎn)RGA8葡萄顯示出較強(qiáng)抗性結(jié)論：MrRGA8對(duì)霜霉病具有抗性實(shí)驗(yàn)結(jié)果3①M(fèi)rRGAs基因抗霜霉病的功能驗(yàn)證結(jié)論：MrRGA8基因使得葡萄對(duì)霜霉病具有抗性，命名為MrRPV1hyp：hyphal菌絲生成實(shí)驗(yàn)結(jié)果3②MrRPV1對(duì)不同霜霉菌分離菌的抗性MrRPV1對(duì)霜霉菌A抗性結(jié)論：MrRPV1基因使得葡萄對(duì)霜霉菌A具有抗性霜霉菌A來(lái)自于法國(guó)5實(shí)驗(yàn)結(jié)果3②MrRPV1對(duì)不同霜霉菌分離菌的抗性MrRPV1對(duì)霜霉菌B抗性結(jié)論：MrRPV1基因使得葡萄對(duì)霜霉菌B有抗性霜霉菌B來(lái)源于北美實(shí)驗(yàn)結(jié)果3②MrRPV1對(duì)不同霜霉菌分離菌的抗性MrRPV1對(duì)霜霉菌SL抗性結(jié)論：MrRPV1基因使得葡萄對(duì)霜霉菌SL有抗性總結(jié)：MrRPV1基因使得葡萄對(duì)不同分離菌都有抗性實(shí)驗(yàn)結(jié)果4MrRUN1和MrRPV1在細(xì)胞中的分布由于NSL的存在，推測(cè)MrRUN1和MrRPV1蛋白分布在核中，用GFP結(jié)合MrRUN1蛋白和MrRPV1蛋白判斷其分布?？砂l(fā)現(xiàn)MrRUN1：GFP主要位于核中（圖b）；而MrRPV1：GFP在核質(zhì)中均有分布（圖d）。但MrRUN1和MrRPV1中把保守結(jié)構(gòu)域NLS從RKRRR變?yōu)镽TSRR，分布就主要為質(zhì)分布（圖c和e）。因此NSL可能是起作用的那部分。，實(shí)驗(yàn)結(jié)果5通過(guò)克隆和測(cè)序證明基因由于不同的剪切機(jī)制轉(zhuǎn)錄成4種不同的轉(zhuǎn)錄本，每一種都有可能一種產(chǎn)物MrRUN1和MrRPV1產(chǎn)生多個(gè)剪切片段討論1盡管是對(duì)兩種不同的菌——霉菌和卵菌有抗性，MrRUN1/MrRPV1高度同源（86%氨基酸一致），區(qū)別僅僅在于LRR的個(gè)數(shù)不同。這并不是特例。有文獻(xiàn)指出，番茄中Rx/Gpa2類R基因（88%氨基酸一致）分別對(duì)病毒和線蟲有抗性。此外，不能排除其他五條全長(zhǎng)度的MrRGAs可能單獨(dú)或是與其他基因如MrRUN1/MrRPV1一起具有抗病功能。MrRGAs遺傳圖和物理圖定位MrRGA基因抗白粉病的功能驗(yàn)證抗病葡萄感病葡萄Portan，轉(zhuǎn)RGV10基因Portan感病葡萄Tempranillp，轉(zhuǎn)RGV10基因Tempranillp感病葡萄Shiraz，轉(zhuǎn)RGV10基因Shiraz討論：轉(zhuǎn)基因葡萄株系抗病性均不如抗病株系。這很可能是因?yàn)槠渌鸕GAs的存在使得BC5:3292-R23具有更強(qiáng)的抗白粉病性。討論2討論3MrRGA基因抗霜霉病的功能驗(yàn)證問(wèn)題：與抗白粉病相反，MrRPV1轉(zhuǎn)基因植株比BC5：3294-R23有更強(qiáng)的抗霜霉病性。why?查閱文獻(xiàn)進(jìn)行后續(xù)研究。討論4MrRUN1/MrRPV1基因編碼的不同蛋白質(zhì)在抗病或是在PCD信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中起到不同的作用，主要是由于這些蛋白質(zhì)在細(xì)胞中的分布不同，一部分在細(xì)胞核內(nèi)，一部分在細(xì)胞質(zhì)中。分布在細(xì)胞質(zhì)中的蛋白質(zhì)可能在cytoplasmiccelldeath過(guò)程中起作用。MrRUN1和MrRPV1在細(xì)胞中的分布討論5TIR-NB-LRR類基因需要全長(zhǎng)的和截短的ORF（開放閱讀框）。煙草中的N基因和擬南芥中的RPS4基因在沒(méi)有截短的轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄本的情況下就無(wú)法表現(xiàn)出完全的抗性。MrRUN1/MrRPV1基因轉(zhuǎn)錄編碼全長(zhǎng)的蛋白質(zhì)和3種推斷的截短的蛋白質(zhì)，現(xiàn)在正在研究MrRUN1/MrRPV1基因轉(zhuǎn)錄成全長(zhǎng)的cDNA的過(guò)程，并研究3種推斷的被截短蛋白質(zhì)在抗病過(guò)程中的作用。MrRUN1和MrRPV1產(chǎn)生多個(gè)剪切片段我的思考文章亮點(diǎn)葡萄中第一個(gè)被驗(yàn)證的抗病基因可以補(bǔ)充的地方1實(shí)驗(yàn)中提到MrRU