GB/T 22915-2008口蹄疫病毒熒光RT-PCR檢測(cè)方法

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

犌犅／犜２２９１５—２００８

口蹄疫病毒熒光犚犜犘犆犚檢測(cè)方法

犘狉狅狋狅犮狅犾狅犳狌狀犻狏犲狉狊犪犾犳犾狌狅狉狅犵犲狀犻犮犚犜犘犆犚犳狅狉犳狅狅狋犪狀犱犿狅狌狋犺犱犻狊犲犪狊犲狏犻狉狌狊

２００８１２３１發(fā)布２００９０５０１實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

發(fā)布

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

書(shū)

中華人民共和國(guó)

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

口蹄疫病毒熒光犚犜犘犆犚檢測(cè)方法

ＧＢ／Ｔ２２９１５—２００８

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２００９年４月第一版２００９年４月第一次印刷

書(shū)號(hào)：１５５０６６·１３６４４７

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書(shū)

犌犅／犜２２９１５—２００８

前言

本標(biāo)準(zhǔn)參考了世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（ＯＩＥ）《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊(cè)（哺乳動(dòng)物、禽鳥(niǎo)與蜜蜂）》

（第５版）。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄Ａ、附錄Ｃ為規(guī)范性附錄，附錄Ｂ為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出。

本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國(guó)深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國(guó)云南出入境檢驗(yàn)檢疫

局、中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：花群義、楊云慶、秦智鋒、周曉黎、盧體康、董俊、陶虹、阮周曦、葉弈優(yōu)、林祥梅、

吳紹強(qiáng)。

Ⅰ

書(shū)

犌犅／犜２２９１５—２００８

口蹄疫病毒熒光犚犜犘犆犚檢測(cè)方法

１范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了口蹄疫病毒熒光ＲＴＰＣＲ檢測(cè)的操作方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于動(dòng)物及其動(dòng)物產(chǎn)品中口蹄疫病毒的檢測(cè)。

２縮略語(yǔ)

下列縮略語(yǔ)適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

２．１熒光犚犜犘犆犚

熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)。

２．２犆狋值

每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。

２．３犚犖犃

核糖核酸。

２．４犇犈犘犆

焦碳酸磷酯。

２．５犘犅?tīng)?/p>

磷酸鹽緩沖鹽水，配方見(jiàn)附錄Ａ。

２．６犜犪狇酶

犜犪狇ＤＮＡ聚合酶。

２．７犉犕犇犞

口蹄疫病毒。

３原理

根據(jù)口蹄疫病毒各型共有的基因特定序列的保守片段，合成一對(duì)通用的特異性引物和一條通用的

特異性探針。熒光探針的５′端標(biāo)記ＦＡＭ熒光素，３′端標(biāo)記ＴＡＭＲＡ熒光素，３′端的淬滅基團(tuán)在近距離

內(nèi)能吸收５′端報(bào)告熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光信號(hào)。但在擴(kuò)增時(shí)，由于犜犪狇酶的５′→３′的外切活性，在延伸

到熒光探針時(shí)，將其切斷，兩基團(tuán)分離，淬滅作用消失，熒光信號(hào)產(chǎn)生。因此，可以通過(guò)檢測(cè)熒光信號(hào)對(duì)

核酸模板進(jìn)行檢測(cè)。

４材料與試劑

４．１儀器與器材

４．１．１熒光ＲＴＰＣＲ檢測(cè)儀。

４．１．２高速臺(tái)式冷凍離