標準解讀

《GB/T 22916-2008 水泡性口炎病毒熒光RT-PCR檢測方法》是一項國家標準，主要針對水泡性口炎病毒（VSV）的快速、準確檢測提供了具體的操作指南。該標準詳細規(guī)定了從樣品采集到結(jié)果分析的一系列步驟，旨在通過實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)來識別和量化VSV RNA。

標準首先明確了適用范圍，指出其適用于疑似感染VSV動物組織或細胞培養(yǎng)物中VSV核酸的檢測。接著對實驗所需的主要試劑與材料進行了列舉，包括但不限于RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄酶、dNTPs、引物及探針等，并且強調(diào)了這些材料的質(zhì)量控制要求以保證實驗準確性。

在操作流程部分，《GB/T 22916-2008》詳述了樣本處理的具體方法，比如如何正確地收集樣本并進行初步處理；隨后是關(guān)于總RNA提取的過程描述，以及使用特定引物和探針進行cDNA合成與擴增的條件設(shè)定。此外，還特別提到了熒光信號收集的時間點選擇及其重要性。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2008-12-31 頒布
  • 2009-05-01 實施
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文檔簡介

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國國家標準

犌犅／犜２２９１６—２００８

水泡性口炎病毒熒光犚犜犘犆犚檢測方法

犘狉狅狋狅犮狅犾狅犳犳犾狌狅狉狅犵犲狀犻犮犚犜犘犆犚犳狅狉狏犲狊犻犮狌犾犪狉狊狋狅犿犪狋犻狋犻狊狏犻狉狌狊

２００８１２３１發(fā)布２００９０５０１實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

書

犌犅／犜２２９１６—２００８

前言

本標準參考了世界動物衛(wèi)生組織（ＯＩＥ）《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊（哺乳動物、禽鳥與蜜蜂）》

（第５版）。

本標準的附錄Ａ為規(guī)范性附錄，附錄Ｂ為資料性附錄。

本標準由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。

本標準由全國動物防疫標準化技術(shù)委員會歸口。

本標準起草單位：中華人民共和國深圳出入境檢驗檢疫局、中華人民共和國云南出入境檢驗檢

疫局。

本標準主要起草人：花群義、周曉黎、曾少靈、曹琛福、詹愛軍、張彩虹、林慶燕、陳兵、楊云慶、孫潔。

Ⅰ

書

犌犅／犜２２９１６—２００８

水泡性口炎病毒熒光犚犜犘犆犚檢測方法

１范圍

本標準規(guī)定了水泡性口炎病毒熒光ＲＴＰＣＲ檢測的操作方法。

本標準適用于動物及其產(chǎn)品中水泡性口炎病毒的檢測。

２縮略語

下列縮略語適用于本標準。

２．１熒光犚犜犘犆犚

熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)。

２．２犆狋值

每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達到設(shè)定的閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。

２．３犚犖犃

核糖核酸。

２．４犇犈犘犆

焦碳酸磷酯。

２．５犘犅犛

磷酸鹽緩沖鹽水（配方見附錄Ａ）。

２．６犜犪狇酶

犜犪狇ＤＮＡ聚合酶。

２．７犞犛犞

水泡性口炎病毒。

３原理

水泡性口炎病毒屬ＲＮＡ病毒，根據(jù)水泡性口炎病毒兩型共有基因特定的序列，合成一對特異性引

物和一條特異性的熒光雙標記探針。通過嚴格設(shè)計和篩選的引物和探針，涵蓋水泡性口炎病毒的兩個

型和突變株，為水泡性口炎病毒的特異性通用引物和探針。探針的５′端標記ＦＡＭ熒光素，它發(fā)出的熒

光能夠被檢測儀器接收，稱為報告熒光基團；３′端標記ＴＡＭＲＡ熒光素，它在近距離內(nèi)能吸收５′端報告

熒光基團發(fā)出的熒光信號，稱為淬滅熒光基團。在擴增時，犜犪狇酶發(fā)揮它的５′→３′端外切核酸酶的功

能，將探針水解成單核苷酸，消除阻礙，標記在探針兩端的報告熒光基團和淬滅熒光基團均游離于溶液

中，儀器檢測到發(fā)出的熒光信號。

４材料與試劑

４．１儀器與器材

４．１．１熒光ＲＴＰＣＲ檢測儀。

４．１．２高速臺式冷凍離心機（離心速度１２０００ｒ／ｍｉｎ以上）。

４．１．３臺式離心機（離

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