實驗1-蒽酮比色定糖法

實驗一：蒽酮比色定糖法糖是世界上存在最多的一類有機化合物，也是人類所需要的最基礎的物質(zhì)。CO2光合作用糖一切含碳物質(zhì)分解代謝合成代謝糖類一、糖的概念和分類1、糖的組成：

CH2O，可以寫成Cn(H2O)m

糖又稱為碳水化合物（Carbohydrate)脫氧核糖C5H10O4

鼠李糖C6H12O5

乙酸C2H4O2，符合Cn(H2O)n

這些糖不符合Cn(H2O)n酮基醛基定義：多羥基的醛類或酮類化合物，以及它們的衍生物或聚合物。(HCOH)nH2COHCHOH2COHCOH2COH(HCOH)n2、糖的分類：糖單糖二糖多糖葡萄糖果糖蔗糖麥芽糖淀粉纖維素不能再水解的糖水解后能生成兩分子單糖水解后能生成多個單糖1、能源物質(zhì)：淀粉，糖原2、碳源：各種有機物的碳架3、結構物質(zhì)：纖維素，肽聚糖，幾丁質(zhì)4、功能物質(zhì)(細胞識別的信息分子)：病毒識別，抗原抗體反應等

二、糖的生理功能與膜蛋白和膜脂相連的糖——通信天線一、實驗目的學習分光光度法的基本原理學習對水果中糖含量進行測定的方法二、實驗原理分光光度法基本原理：物質(zhì)對光吸收的定量關系很早就受到了科學家的注意并進行了研究。皮埃爾·布格（PierreBouguer）和約翰·海因里?！だ什↗ohannHeinrichLambert）分別在1729年和1760年闡明了物質(zhì)對光的吸收程度和吸收介質(zhì)厚度之間的關系；1852年奧古斯特·比爾（AugustBeer）又提出光的吸收程度和吸光物質(zhì)濃度也具有類似關系，兩者結合起來就得到有關光吸收的基本定律——布格－朗伯－比爾定律，簡稱比爾－朗伯定律。溶液中的物質(zhì)在光的照射激發(fā)下，產(chǎn)生對光的吸收效應，不同的物質(zhì)具有各自選擇性的吸收光譜，因此，當某單色光通過溶液時，能量會被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質(zhì)濃度有一定比例關系，即符合于比色原理——比爾定律朗伯-比爾定律

A=lg(1/T)=Kbc

A：為吸光度,

T：為透射比,是投射光強度比上入射光強度

K:

摩爾吸收系數(shù)。它與吸收物質(zhì)的性質(zhì)及入射光的波長λ有關。

c：為吸光物質(zhì)的濃度

b：為吸收層厚度物理意義：是當一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的西光物質(zhì)時,起其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收層厚度b成正比.二、實驗原理蒽酮比色法是一個快速而簡便的定糖方法。蒽酮可以和游離的己糖或多糖中的己糖基，戊醛糖及己糖醛酸反應，反應后溶液呈藍綠色，在620nm處有最大吸收。三、實驗特點蒽酮可與其他一些糖類發(fā)生反應，但顯現(xiàn)的顏色不同。當樣品中存有含較多色氨酸的蛋白質(zhì)時，反應不穩(wěn)定，呈現(xiàn)紅色。對于特定的糖類，反應較穩(wěn)定。本法多用于測定糖原含量，亦可用于測定葡萄糖含量。

四、實驗試劑蒽酮試劑：取0.2g蒽酮溶于100mL80%(V/V)硫酸中，當日配制使用；

標準葡萄糖溶液(0.1mg/mL)：(可滴加幾滴甲苯作防腐劑)；

糖樣品溶液。五、實驗操作步驟1.制作標準曲線：

取干試管5支，依次加入標準糖溶液

0，0.1，0.2，0.4ml,0.8ml并依次用蒸餾水補足體積到1mL，各管均加入蒽酮試劑4mL，震搖混勻。沸水浴準確煮沸10min，室溫放置10min，用1號試管溶液調(diào)零，比色測定A620（同時測定樣品）。用標準糖溶液濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，制作標準曲線。

管號12345葡萄糖標準液（

ml）00.10.20.40.6蒸餾水（

ml）10.90.80.60.4葡萄糖含量（

ug）0102040602.樣品含糖量測定：葡萄汁溶液樣品溶液稀釋1000倍，吸取1mL置試管中，再加入4mL蒽酮試劑，沸水浴中煮沸10分鐘，取出后冷卻10min后比色，其他條件與做標準曲線相同，測得的吸光度值由標準曲線查算出樣品液的糖含量。計算：樣品糖含量(%)=(C×