實驗四 酵母菌形態(tài)觀察

實驗四酵母菌形態(tài)觀察1.學(xué)習(xí)并觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式，學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌的死活細(xì)胞的試驗方法和子囊孢子的觀察方法。2.掌握酵母菌的一般形態(tài)特征及其與細(xì)菌的區(qū)別。一、目的要求二、基本原理酵母菌是單細(xì)胞真核微生物，大小通常比常見的細(xì)菌大幾倍甚至十幾倍。大多數(shù)酵母以出芽方式進(jìn)行無性繁殖，有的分裂繁殖。有性生殖是通過接合產(chǎn)生子囊孢子。美藍(lán)是一種無毒性的染料，氧化型呈藍(lán)色，還原型呈無色。酵母菌的活細(xì)胞新陳代謝作用強，有較強的還原能力，能使美藍(lán)由藍(lán)色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型。而死細(xì)胞或代謝作用較弱的衰老細(xì)胞則呈藍(lán)色或淡藍(lán)色，借此即可對酵母菌的死、活細(xì)胞進(jìn)行鑒別。

子囊孢子是子囊菌類真菌的有性生殖產(chǎn)生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形態(tài)是酵母菌分類鑒定的重要依據(jù)之一。麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基有利于面包酵母子囊孢子的產(chǎn)生。子囊孢子壁厚，不易染色亦不易脫色，可采用芽孢染色法染色觀察。子囊孢子呈現(xiàn)綠色，而子囊壁和營養(yǎng)細(xì)胞呈紅色。子囊孢子三、實驗材料

1.

菌種：啤酒酵母、面包酵母2.

培養(yǎng)基：豆芽汁斜面、麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基3.溶液或試劑：0.1%的美藍(lán)染色液、芽孢染色液一套4.

儀器及其他用具：載玻片、顯微鏡等四、實驗內(nèi)容

1.水浸片法觀察酵母菌的死活細(xì)胞（啤酒酵母）載片中央滴一滴0.1%的美藍(lán)染液無菌操作取菌并將菌體與染液混勻蓋上蓋玻片鏡檢并繪圖2.子囊孢子的觀察（面包酵母）1.菌種的活化麥?zhǔn)吓囵B(yǎng)基上產(chǎn)孢培養(yǎng)制片（涂片、干燥、固定）2.孔雀綠初染10min95%乙醇脫色30s

水洗沙黃復(fù)染5min水洗干燥鏡檢(子囊孢子綠色、營養(yǎng)菌體和子囊呈紅色)3.制美藍(lán)水浸片觀察面包酵母.染色法觀察子囊孢子水浸片法觀察子囊孢子

3放線菌的插片培養(yǎng)

插片培養(yǎng)法：倒平板（將融化的高氏合成1號培養(yǎng)基無菌操作倒平板）插片（將無菌的蓋玻片以大約45°角插入培養(yǎng)基中（9片/皿/組）接種（無菌操作取灰色鏈霉菌或紫色鏈霉菌劃線接種于插片和培養(yǎng)基接觸處）培養(yǎng)（將插片平板倒置，28℃培養(yǎng)3~5天）放線菌的插片培養(yǎng)接種位置4霉菌小培養(yǎng)裝片培養(yǎng)小室的滅菌：在平皿皿底鋪一張略小于皿底的圓濾紙片，再放一U形玻棒，其上放一潔凈載玻片和兩塊蓋玻片，蓋上皿蓋，包扎后于121℃滅菌30min，烘干備用。五、實驗結(jié)果繪制啤酒酵母的芽殖，示芽體、營養(yǎng)體及死活細(xì)胞繪制面包酵母，示子囊孢子、營養(yǎng)菌體和子囊。六、思考題

1.在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區(qū)別于一般細(xì)菌？P43，2（2）2.如何區(qū)別酵母菌的營養(yǎng)細(xì)胞和釋放出子囊外的子囊孢子？p44，2上次試驗習(xí)題解答1.你認(rèn)為制備細(xì)菌染色標(biāo)本時，尤其應(yīng)該注意哪些環(huán)節(jié)？P28，2（1）①載玻片要潔凈無油跡，制片時取水和菌量不宜過多，涂片時應(yīng)均勻涂開呈一薄層。②熱固定溫度不宜過高（酒精燈火焰上方3～4次），否則會改變甚至破壞細(xì)胞形態(tài)。③水洗時，不要直接沖洗涂面，而應(yīng)使水從載玻片的側(cè)面或背面流下。水流不宜過急、過大，以免涂面薄膜脫落。2.為什么要求制片完全干燥后才能用油鏡觀察？P28，2（2）

制片未完全干燥就滴油觀察，水油不相混溶，視野易滑動而無法清晰觀察。3.你認(rèn)為那些環(huán)節(jié)會影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？P30，2（1）

①

菌齡：要用活躍生長期的幼齡培養(yǎng)物②涂片：不宜過厚，以免脫色不完全造成假陽性③火焰固定：不以過熱（酒精燈火焰上方3～4次）④脫色程度革蘭氏染色乙醇脫色程度為實驗成功的關(guān)鍵步驟。脫色不足，陰性菌誤認(rèn)為陽性菌，脫色過度，陽性菌被誤染成陰性菌，脫色時間一般為30s。4.說明芽孢染色法的原理。用簡單染色法能否觀察到細(xì)菌芽孢？P32，2（1）①芽孢染色的原理：細(xì)菌的芽孢壁厚、不易染色亦不易著色，用著色力強的染色劑孔雀綠通過加熱或延長染色時間而使菌體和芽孢著色，菌體的染料經(jīng)水洗后