凝膠成像介紹

startTheitemofmustbeselectedFunctionType:DNAorprotein其他項目選不選都行。但FunctionType一定要選。Autochemi:暗箱燈光控件調(diào)整相機輔助光圈、變焦和焦距控制各種濾光片的選擇。控制各種照明光源。燈光類型選擇:反射照明光:白光及二種波段紫外光透射照明光:白光及三種波段紫外光。但紫外光波段需在紫外燈箱上手動選擇。安全選項:開門時關(guān)閉紫外光源。箱門上有安全窗口可以即時觀察熒光效果。AutoChemi的必選項:Aperture:光圈?？烧{(diào)整亮度。Zoom:變焦?？烧{(diào)整畫面的放大倍數(shù)。Focus:輔助對焦。Filter:選擇濾光片。Lighting:選擇透射光源。CoolSNAP-pro:相機控件設(shè)置相機選擇圖片保存方式選擇圖像預(yù)覽參數(shù)選擇拍攝曝光參數(shù)積分方式拍攝極弱熒光自動拍攝程序設(shè)定OpentheCoolSNAP-pro

對正凝膠塊位置按前述方法，在自然光下對正，避免頻繁開關(guān)紫外光源。然后再打開紫外光源。一般用透射光源，用反射光源亦可。再次強調(diào)應(yīng)調(diào)整相機變焦，使凝膠塊圖象盡量充滿整個畫面。這樣有利于圖象拍攝的清晰EnlargetheZoom,lettheimageofthegelaslargeaspossible.ThesettingofCoolSNAP-pro

setup：currentdriver-8-bitgrayscale…這是拍攝照片的格式。作為平時使用的普通單色黑白照片都是八位灰度。但在本程序里用的是12位灰度。對光密度的測量更準確。所以在拍攝時不要使用8位圖片格式。12位灰度的圖片很多常用的程序都不能識別所以需要轉(zhuǎn)換。只選這一項保存圖片方式:Newimage:每次拍攝都保存成一個新文件Sequence:連續(xù)多幅拍攝并保存系列圖片，用于拍攝動態(tài)畫面，需設(shè)定拍攝間隔時間，拍攝畫面數(shù)量等參數(shù)，但不能象攝相機那樣拍攝錄相。選中這兩項，可使拍攝畫面與預(yù)覽畫面一致不選擇任何自動曝光的功能Acquire:點擊Auto-Exposureoptions，才能看到自動曝光的設(shè)置窗口，確認未選擇任何自動曝光功能。否則照下的畫面與預(yù)覽畫面不會一致的。另外不要調(diào)整Area，一般都需要拍攝滿畫幅的圖片。Intergration:NointergrationIntergration的特殊用處這是專業(yè)拍攝亮度特別弱的熒光時采用的一種特殊拍照方法。對于平時肉眼可見的熒光樣品是不必使用的。實際上使用積分拍攝是很麻煩的。重要的是要作一個正確的空白樣品，這非常困難。Macros:宏操作就是編程序執(zhí)行一系列重復(fù)的操作。太高級了，還是別玩它吧。記住設(shè)置完成后要點擊minimaldialog回到小窗口，不要點擊close。否則前面全都白干了。SetpreviewandacquireexposetimePreviewtime

=acquireexposetime必須把兩個時間設(shè)為同樣的值，才能使拍攝的效果與預(yù)覽的效果一樣。在正確設(shè)置時，兩者會聯(lián)動的。曝光時間與光圈結(jié)合使用來調(diào)整曝光使畫面亮度合適。紫外照明光源是50Hz頻閃光源，因此曝光時間不能太短，至少要大于0.1秒。Acquireimageandsave點此處拍照拍攝后要點此處調(diào)出預(yù)覽畫面拍攝照片點擊acquire即可拍攝當前畫面。拍攝一張照片后屏幕上的窗口就是拍攝的圖片了，要想重新回到預(yù)覽窗口，得點擊一下preview。保存照片時存為TIFF格式較好。然后再另存一張jpeg格式的用于其他用途。分析電泳條帶先關(guān)閉相機控件窗口和燈箱控制窗口SelectainterestedareaandsaveasanewfileRotatetheimage加樣孔必須在圖片上方Sortthelanes整理泳道Add:加上未選中的泳道Delete:刪除錯選中的泳道Lanewidth:調(diào)整泳道寬度Uniformlanewidth:勾上此選項，可保證各泳道寬度一致。記得點OK后再進行下一步操作。泳道跑歪了怎么辦?去掉Forcestraightlane前面的對勾，就可以調(diào)整泳道選擇的方向了。不過這種難看的樣品還是重作為好。Findthebands一條一條地整理帶程序自動識別的帶數(shù)量很多，一般都要刪除掉錯誤識別的帶，只留下需要的帶。也可以先刪掉全部帶，然后手動添加所需的帶。點擊deleteband，在錯誤識別的band上點一下就刪掉它了，也可以在光密度曲線窗口上點，效果一樣。Addband的操作也一樣。對每個band的寬度要逐個調(diào)整。特別是相同分子量的條帶，要盡量讓它們的選擇寬度一致。較正背景正規(guī)的背景較正需要拍攝一張空白樣品作為背景，然后扣減其光密度。這種方法麻煩且實用價值不大，難以操作。直接從光密度曲線上扣除基線背景較易實現(xiàn)，但要根據(jù)實例選擇是否需要扣除基線背景。在background窗口中選擇joiningvalleys即可實現(xiàn)扣除基線背景?？鄢€背景對光密度測量值的改變會非常大，是否應(yīng)該扣除還需要根據(jù)樣品情況來選擇。IndicatetheMarklaneanditsvalue這里有常用的Mark數(shù)據(jù)系列當Mark條不在左邊時，一定要重新手動指定Mark條的位置指定了Mark位置后，還要選取Mark類型，并檢查各個標準點的分子量值是否正確?？梢允謩有薷母鼽c分子量的值。注意各標準點的順序:前面是大分子量，后面是小分子量。Slant是什么東東?如果各泳道的速度不一致，此功能可以進行有限的校正。前提是要在兩邊各作一個Mark。然后在相同的Mark帶之間拉出一根校正線。這樣在分析測量時能夠?qū)Ψ肿恿窟M行較正。Now,theanalysisrdsultcanbeobtained.分析結(jié)果該選哪一項?Rel/bandsAmountRelab%IOD:選這個最保險MaxOD光密度與樣品量之間的關(guān)系正相關(guān)，但不是正比。也就是說，光密度相差一倍并不意味著樣品的量也相差一倍。IOD是累積光密度，此項是直接反映了樣品量之間的對比。但要注意的是，IOD與樣品量之間不是正比關(guān)系，因此用IOD的比例來表達兩個條帶之間的量的對比屬于半定量的分析。其他的定量方法誤差更大。IOD的數(shù)值一般都很大，因此讀數(shù)時很容易搞錯位數(shù)。Thedatacanbecopiedtoexcel測量數(shù)據(jù)中有各條帶的分子量和含量直接把數(shù)據(jù)copy到Excel中，可方便地進行各種統(tǒng)計操作WecandrowasurfaceplotSurfaceplot將圖片轉(zhuǎn)換成jpeg格式保存此程序拍攝的圖片是常用軟件打不開的。要先