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文檔簡介
選修三現(xiàn)代生物科技第一章基因工程
1.在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中,卡那霉素抗性基因(kan)常作為標記基因,只有含卡那霉素抗性基因的細胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長。簡述獲得轉(zhuǎn)基因發(fā)光玫瑰植株的完整技術(shù)流程。侵染熒光基因
含kan質(zhì)粒重組質(zhì)粒土壤農(nóng)桿菌含重組質(zhì)粒土壤農(nóng)桿菌A構(gòu)建導(dǎo)入B培養(yǎng)選擇轉(zhuǎn)基因發(fā)光植株再生植株愈傷組織離體玫瑰葉片組織C誘導(dǎo)選擇分化D檢測(1)A過程需要的酶有
。(2)B過程及其結(jié)果體現(xiàn)了質(zhì)粒作為運載體必須具備的兩個條件是
。(3)C過程的培養(yǎng)基除含有必要營養(yǎng)物質(zhì)、瓊脂和激素外,還必須加入
。(4)如果利用DNA分子雜交原理對再生植株進行檢測,D過程應(yīng)該用
作為探針。限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶具有標記基因;能在宿主細胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存卡那霉素放射性同位素標記的熒光基因基因工程中,需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒,便于重組和篩選。已知限制酶I的識別序列和切點是—G↓GATCC-,限制酶Ⅱ的識別序列和切點是-↓GATC-。根據(jù)圖示,判斷下列操作正確的是()
A.質(zhì)粒用限制酶Ⅰ切割,目的基因用限制酶Ⅱ切割
B.質(zhì)粒用限制酶Ⅱ切割,目的基因用限制酶Ⅰ切割
C.目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅰ切割
D.目的基因和質(zhì)粒均用限制酶Ⅱ切割A(yù)(山東)2.繼哺乳動物乳腺生物反應(yīng)器研發(fā)成功后,膀胱生物反應(yīng)器的研究也取得了一定進展。最近,科學(xué)家培育出一種轉(zhuǎn)基因小鼠,其膀胱上皮細胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。(1)將人的生長激素基因?qū)胄∈笫荏w細胞,常用方法是
。(2)進行基因轉(zhuǎn)移時,通常要將外源基因轉(zhuǎn)入
中,原因是
。(3)通常采用
技術(shù)檢測外源基因是否插入了小鼠的基因組。(4)在研制膀胱生物反應(yīng)器時,應(yīng)使外源基因在小鼠的
細胞中特異表達。(5)為使外源基因在后代長期保持,可將轉(zhuǎn)基因小鼠體細胞的
轉(zhuǎn)入
細胞中構(gòu)成重組細胞,使其發(fā)育成與供體具有相同性狀的個體。該技術(shù)稱為
。顯微注射技術(shù)
受精卵(或早期胚胎)受精卵(或早期胚胎細胞)具有全能性,可使外源基因在相應(yīng)組織細胞表達DNA分子雜交(核酸探針)膀胱上皮去核的卵核移植(或克隆)細胞核對某一DNA進行酶切,用A限制性內(nèi)切酶酶切時,得到1個DNA片段,用B限制性內(nèi)切酶酶切時,得到3個DNA片段,若同時用A、B限制性內(nèi)切酶酶切時,得到4個DAN片段,則可判斷該DNA有
個A限制性內(nèi)切酶切點,有
個B限制性內(nèi)切酶切點。13
第一步:獲取目的基因(目的基因的序列已知)①化學(xué)方法合成目的基因②PCR(聚合酶鏈式反應(yīng))擴增目的基因2、從基因文庫中獲取目的基因(目的基因的序列未知)1、人工合成目的基因(根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列直接合成)(1)來源:(2)作用:原核生物(主要)識別和切割DNA分子內(nèi)特定核苷酸序列
即:一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列,并且能在特定的切點上切割DNA分子。(3)特點:專一性(特異性)1、限制性核酸內(nèi)切酶磷酸與脫氧核糖之間的磷酸二酯鍵(4)作用部位:(5)作用結(jié)果:產(chǎn)生黏性末端或平末端第二步:形成重組DNA分子2、“分子縫合針”
——DNA連接酶(1)作用:連接DNA片段間的磷酸二酯鍵,將外源基因和載體連接在一起(2)常用種類:①E.coliDNA連接酶:來源:大腸桿菌作用:只連接黏性末端②T4DNA連接酶:來源:T4噬菌體作用:連接黏性末端、平末端DNA連接酶比較DNA聚合酶3、“分子運輸車”——運載體⒈載體需要的條件:⑴能在受體細胞中自主復(fù)制、表達并穩(wěn)定保存⑵有1~多個限制酶切點,以便與外源基因連接⑶有某些標記基因,便于篩選
⑷對受體細胞無害⒉常用運載體:
⑴質(zhì)粒⑵噬菌體或某些動植物病毒(最常用:大腸桿菌的質(zhì)粒):環(huán)狀雙鏈DNA1.將目的基因?qū)胫参锛毎r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法2.將目的基因?qū)雱游锛毎@微注射技術(shù)(最多、最有效)3.將目的基因?qū)胛⑸锛毎鸆aCl2處理,以增加細菌細胞壁的通透性?;ǚ酃芡ǖ婪ǖ谌剑簩⒅亟MDNA分子導(dǎo)入受體細胞第四步:篩選含有目的基因的受體細胞檢測:轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因常用方法:利用標記基因(抗性基因)進行篩選或DNA分子雜交技術(shù)
基因工程是否獲得成功,最重要的是要看目的基因是否在受體細胞中得到表達。第五步:目的基因表達1、檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA?
DNA—RNA分子雜交技術(shù)2、檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)(表達)?抗原—抗體雜交如何檢測目的基因是否表達?檢測是否產(chǎn)生了目的基因產(chǎn)物。;/貓先生電競lqu93hmo個學(xué)習(xí)的機會,咱們小學(xué)堂準備同時開辦一期夜校,專門招收十五歲以上,三十歲以下的年青人。上夜校不耽誤白天家里和地里的活計,也是免費學(xué)習(xí),包括課本!”二狗子和大頭聽了,興奮地帶頭鼓掌并大聲歡呼起來:“好哇,太好啦!”耿正笑著示意大家安靜,繼續(xù)說“還有哇,希望大家伙兒回去后,記著轉(zhuǎn)告那些今天不在場的左鄰右舍們,也歡迎他們來學(xué)堂為自家的娃娃們報名。當(dāng)然,愿意上夜校,年齡也合適的大人們也一樣歡迎。有勞各位了,有勞各位了!”耿正說到最后,還連連向大家點頭拱手表示感謝。大家伙兒笑得更開心了,七嘴八舌地說:“這有什么啊,順便一句話的事兒!”“不用你說,俺們記著呢!”“嗨,俺先給俺家的娃兒報上名!這到時候哇,不等俺和鄰家大人們說,娃兒們自己就把這個消息傳揚開了!”“娃娃們傳揚是他們自己的事,反正啊,俺是一定要和大人們說的!”在鄉(xiāng)親們熱情洋溢的議論聲中,剛剛喝完慶功酒的鄉(xiāng)民們紛紛為自家的娃娃報名。耿英把報名學(xué)童的名字、性別、年齡,以及家長的名字,認真地填寫在事先擬定畫好的表格里。二狗子和大頭,還有另外的幾個大齡青年也都當(dāng)場報了名,熱切希望上夜校班學(xué)習(xí)。在隨后的幾天內(nèi),又有不少鄉(xiāng)民專程來小學(xué)堂為自家的娃娃報名。還有不少的大齡青年則高高興興地跑來為自己報名,希望利用晚上的時間,使自己成為文化人兒。六畝試種的水稻獲得了很不錯的收成,這讓耿老爹一家人喜上加喜。辛苦半年多了,一天天看著這些南方水稻在故鄉(xiāng)的土地上試種成功的耿老爹,更是笑得合不攏嘴!新打的稻谷已經(jīng)曬干了。耿老爹決定在兒女們的婚宴上,加上一道北方人非常稀罕的,香噴噴的白米肉丁炒飯!留了足夠的稻種,自家留了一部分,送給左鄰右舍各幾麻袋,又分送給其他街坊鄰居一些以后,耿老爹就讓耿正和耿直把剩余的稻谷全部送到了舅舅家。從此之后,耿老爹妻弟一家在“三六九鎮(zhèn)”上開的飯鋪里,又增加了一道香噴噴的清蒸白米飯,以及各種口味兒的炒米飯。8第百三四回五道廟前謝佑恩|(供品多多心虔誠,五道廟前謝佑恩;各人禱告大不同,返回路上笑不停。)八月十六一大早,郭氏提前準備好了簡單的早飯。飯后,來不及洗刷收拾,又開始準備供品、香火和紙元寶等等一應(yīng)敬
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