新版CNAS對臨床基因擴(kuò)增分析前的要求要素

新版CNAS對臨床基因擴(kuò)增分析前的要求要素分析前階段定義CNAS-CL02定義（ISO15189同等引用）按時間順序自醫(yī)生申請至分析檢驗啟動的過程，包括檢驗申請、患者準(zhǔn)備和識別、原始樣品采集、運(yùn)送和實驗室內(nèi)傳遞等。（檢驗前過程/分析前階段）檢驗申請患者準(zhǔn)備

和識別原始樣品采集原始樣品運(yùn)送實驗室內(nèi)傳遞全面質(zhì)量控制分子診斷分析前質(zhì)量控制特點環(huán)節(jié)眾多包括檢驗申請、患者準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、標(biāo)本運(yùn)送、標(biāo)本接收及處理、保存等參與人員復(fù)雜包括醫(yī)生、患者、護(hù)士、標(biāo)本運(yùn)送人員以及檢驗技師等難以標(biāo)準(zhǔn)化不同醫(yī)院、同一醫(yī)院不同科室條件不同，人員熟練程度不一致，難以標(biāo)準(zhǔn)化標(biāo)本類型多、運(yùn)輸及保存條件復(fù)雜分子診斷分析前要求的要素5.1人員5.2設(shè)施和環(huán)境條件5.3實驗室設(shè)備、試劑和耗材5.4檢驗前過程分析前前階段人員人員資質(zhì)PCR上崗證（《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實驗室管理辦法》的規(guī)定）員工能力評審新員工培訓(xùn)、考核與授權(quán)離崗6個月以上的人員培訓(xùn)設(shè)施和環(huán)境條件實驗室原則上分四個分隔開的工作區(qū)域?qū)嶒炇腋鞣謪^(qū)應(yīng)配置固定和移動紫外線燈，標(biāo)本制備區(qū)應(yīng)配置二級生物安全柜制定實驗室溫濕度的要求并監(jiān)測制定實驗室用水的要求并定期監(jiān)測實驗室設(shè)施與環(huán)境條件標(biāo)準(zhǔn)化5分區(qū)PCR實驗室，各區(qū)之間物理分隔、空氣單向流動、可適當(dāng)合并,具體分區(qū)，視實驗室所開展的項目定，以工作空間夠用，不影響報告時間，操作互不干擾，防止污染為基本原則傳遞倉傳遞標(biāo)本和試劑生物安全柜內(nèi)操作，避免污染環(huán)境設(shè)施和環(huán)境條件基因擴(kuò)增檢驗各工作區(qū)域應(yīng)有明確的標(biāo)記，不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品不能混用應(yīng)有足夠的、溫度適宜的儲存空間（如冰箱），用以保存臨床樣品和試劑，設(shè)置目標(biāo)溫度和允許范圍，并記錄。應(yīng)有溫度失控時的處理措施，并記錄。

冷鏈系統(tǒng)面臨風(fēng)險冷鏈停止工作，溫度快速升高，導(dǎo)致試劑失效，樣本損壞突然停電工作制冷壓縮機(jī)故障無人值守，非工作時間很難快速發(fā)現(xiàn)故障試劑庫標(biāo)本庫生物樣本庫軟件來解決！冷鏈監(jiān)控系統(tǒng)通過終端采集的實時數(shù)據(jù)，設(shè)定報警范圍，選擇報警方式（短信或郵件），選擇接收報警信息的人員系統(tǒng)終端采集到報警數(shù)據(jù)時，自動向相關(guān)人員發(fā)出報警信息，并提醒工作人員及時處理智能化監(jiān)控，實時處理！實驗室設(shè)備、試劑及耗材從事RNA的檢測，應(yīng)配備高速冷凍離心機(jī)應(yīng)按國家法規(guī)要求對強(qiáng)檢設(shè)備進(jìn)行檢定（PCR儀、加樣器、溫度計和恒溫設(shè)備等）應(yīng)對試劑和耗材進(jìn)行合格性驗收，故障后修復(fù)的設(shè)備應(yīng)對其性能進(jìn)行驗證案例：HPV基因分型試劑驗證不合格試劑失效，Globin值普遍在200左右原因分析：試劑運(yùn)輸途中熒光染料失效（SA-PE），導(dǎo)致Globin值偏低采取措施：新批（貨）次試劑與老批（貨）次試劑比對CNAS-CL02:2012檢驗前過程要素5.4.1總則5.4.2提供給患者和用戶的信息5.4.3申請單信息5.4.4原始樣品采集和處理5.4.5樣品運(yùn)送5.4.6樣品接收5.4.7檢驗前處理、準(zhǔn)備和儲存質(zhì)量控制關(guān)鍵點實驗室應(yīng)制定檢驗前活動的文件化程序和信息，以保證檢驗結(jié)果的有效性患者知情同意要求（例如：需要委托檢驗時，同意向相關(guān)醫(yī)療專家公開臨床信息和家族史）與患者和申請項目相關(guān)的臨床資料，用于檢驗操作和解釋檢驗結(jié)果目的總則科室《原是樣品采集和運(yùn)送管理程序》《標(biāo)本核收、處理和儲存程序》《原始樣品采集手冊》專業(yè)組《實驗室標(biāo)本接收與處理程序》

案例：原始樣品采集手冊微創(chuàng)產(chǎn)前染色體非整倍體（T21/T18/T13）檢測知情同意書案例：2015年10月，一例無創(chuàng)產(chǎn)篩多條染色體數(shù)量信號異常，而B超未提示任何異常，遂于孕婦溝通結(jié)果，孕婦孕前1月有異體輸血病史乳腺癌風(fēng)險評估相關(guān)基因高通量測序申請單申請單——一筆業(yè)務(wù)患者基本信息申請項目申請醫(yī)生信息流轉(zhuǎn)流程記錄采集確認(rèn)標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)標(biāo)本接收……CNAS-CL02:2012檢驗前過程要素5.4.1總則5.4.2提供給患者和用戶的信息5.4.3申請單信息5.4.4原始樣品采集和處理5.4.5樣品運(yùn)送5.4.6樣品接收5.4.7檢驗前處理、準(zhǔn)備和儲存質(zhì)量控制關(guān)鍵點正確選擇原始樣本類型考慮檢測目的、原始樣本穩(wěn)定性及影響因素正確采集標(biāo)本考慮采集原是樣品對檢測的結(jié)果的影響正確運(yùn)送標(biāo)本和保存考慮運(yùn)送過程中原是樣品的穩(wěn)定性、生物安全等因素樣品接收初步判斷樣品是否適合檢驗，信息是否齊全標(biāo)本類型適合的檢測項目全血/血漿/血清HBV、HCV、CMV等血液病毒定量、定型、突變檢測，血流感染細(xì)菌/真菌等鼻咽拭子H7N9、H5N1等呼吸道病毒檢測女性陰道拭子NG、UU、CT、HPV基因分型乳汁CMV、HBV、HCV等腦脊液HSV、CMV、EBV、VZV感染性疾病分子診斷標(biāo)本類型選擇遺傳病分子診斷標(biāo)本類型選擇標(biāo)本類型適合的檢測項目采集容器/量全血遺傳病診斷，微創(chuàng)產(chǎn)前篩查紫頭管/2-3ml羊水產(chǎn)前遺傳病診斷無菌容器/最少10ml/雙份絨毛膜產(chǎn)前遺傳病診斷無菌容器/15mg以上腫瘤個體化醫(yī)療標(biāo)本類型選擇標(biāo)本類型適合的檢測項目血液乳腺癌基因（CYP2D6，BRCA1/2），血液系統(tǒng)疾病(JAK2)，嘌呤類化療藥物等骨髓血液系統(tǒng)疾?。ㄈ诤匣蚝Y查）石蠟組織切片/新鮮組織1、鉑類/紫杉類/氟類/嘌呤類化療藥物，吉西他濱個體化用藥；2、結(jié)腸癌(KRAS/BRAF)、非小細(xì)胞肺癌（EGFR/EML4-ALK）、乳腺癌（PI3KCA/HER2）、胃間質(zhì)瘤（KIT/PDGFRA）、腦膠質(zhì)瘤（1p/19q、IDH1/2）脫落細(xì)胞（胸腹水、支氣管肺泡灌洗液等）結(jié)腸癌(KRAS)、非小細(xì)胞肺癌(EGFR)等甲狀腺癌(RET)、乳腺癌(BRCA1/2)等口腔黏膜細(xì)胞乳腺癌基因（CYP2D6，BRCA1/2）血清Vs.血漿HBV熒光定量檢測結(jié)果可相差10倍Vs.盡管行業(yè)規(guī)范文件以及試劑說明書規(guī)定，HBV-DNA定量既可以用血清也可以用血漿標(biāo)本，實驗室為減少臨床醫(yī)生和患者對結(jié)果的誤解，應(yīng)盡量規(guī)定單一標(biāo)本類型全血、血清、血漿全血/血漿推薦采用EDTA抗凝HIV或HCV等RNA病毒檢測的標(biāo)本需在4h離心分離血漿，含分離膠采血管可原管運(yùn)送、血漿標(biāo)本2-8℃可穩(wěn)定5天，-20℃或-70℃可穩(wěn)定更長時間實驗室應(yīng)評估反復(fù)凍融次數(shù)對檢測目標(biāo)的影響全血、血清、血漿DNA檢測全血標(biāo)本提取核酸之前室溫可穩(wěn)定24h，2-8℃可穩(wěn)定72h，RNA檢測的全血標(biāo)本需加入核酸穩(wěn)定劑血清應(yīng)該在干冰上運(yùn)輸，血漿應(yīng)該在2-8℃條件下運(yùn)輸，并在-20℃以下存放血漿標(biāo)本保存不應(yīng)使用自動除霜的冰箱骨髓推薦以EDTA作為抗凝劑（不可使用肝素）DNA分析時核酸提取之前應(yīng)放置在2-8℃環(huán)境下，必須在72h內(nèi)完成核酸的提取，RNA分析時，骨髓標(biāo)本中應(yīng)加入核酸穩(wěn)定劑、冰上運(yùn)輸至實驗室，2-8℃保存應(yīng)在4h內(nèi)提取核酸不能按時提取核酸應(yīng)將標(biāo)本保存在-20℃條件下，可穩(wěn)定數(shù)月建議凍存前先分離出有核細(xì)胞，避免因凍融紅細(xì)胞裂解釋放亞鐵血紅素抑制PCR新鮮組織以DNA為分析目標(biāo)冰上運(yùn)輸至實驗室DNA在新鮮組織中2-8℃可穩(wěn)定24h、-20℃可穩(wěn)定2w、-70℃以下可穩(wěn)定至少2年實體組織富含內(nèi)源性核酸酶，處理前需盡快保存于-70℃或更低溫度帶血的組織凍存之前應(yīng)用無菌生理鹽水充分洗凈組織凍存應(yīng)盡量以液氮或-70℃的低溫凍存效果最好不可使用自動除霜冰箱保存新鮮組織對于進(jìn)行FISH檢測的新鮮組織，應(yīng)包埋于最佳切割溫度復(fù)合物中，直至檢測開始新鮮組織以RNA為分析目標(biāo)時新鮮組織應(yīng)以干冰運(yùn)輸至實驗室RNA如果不能在1-4h內(nèi)完成提取必須在-70℃凍存，如無條件保存應(yīng)盡快完成RNA抽提，保存RNA，-20℃條件下RNA酶仍然有活性所有冷凍過程都應(yīng)該是快速冷凍標(biāo)本保存容器必須是無菌、疏水性的塑料容器產(chǎn)前標(biāo)本超聲引導(dǎo)下穿刺采集絨毛膜：洗凈后15mg以上（去除母體雜質(zhì)）羊水：最少10ml推薦同時采集母親外周血，供實驗室排除母體基因組的影響絨毛膜運(yùn)輸必須使用惰性組織培養(yǎng)基或者生理鹽水緩沖液培養(yǎng)細(xì)胞必須雙瓶，且75%融合，對于未達(dá)到75%融合的樣本，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)，如滿足要求應(yīng)當(dāng)天處理絨毛膜/羊水細(xì)胞樣本檢測前需通過顯微鏡評價是否母體污染，應(yīng)盡量去除，如不能當(dāng)天處理，必須放置2-8℃保存，次日提取DNA干血片干血片適用于DNA分析，血片不應(yīng)放置在密封的塑料袋中，濕氣會是血片長菌，如果放置塑料袋或容器中，應(yīng)配備足夠的干燥劑和指示劑不同血片之間應(yīng)用玻璃紙或隔開以避免交叉污染，可室溫保存和運(yùn)輸，可穩(wěn)定至少19個月其它標(biāo)本支氣管肺泡盥洗液，室溫運(yùn)輸，穩(wěn)定24h、2-8℃穩(wěn)定72h，更長時間保存需放置-20℃或-70℃、用于結(jié)核分枝桿菌檢測的標(biāo)本凍存之前需經(jīng)過消化去除污染男性尿道標(biāo)本應(yīng)使用聚酯拭子標(biāo)本采集女性子宮頸標(biāo)本或者尿道標(biāo)本可以聚酯拭子或者人造絲拭子、運(yùn)輸需采用轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基HPV檢測標(biāo)本的采集和轉(zhuǎn)運(yùn)應(yīng)按照試劑生產(chǎn)商的要求進(jìn)行口腔黏膜細(xì)胞石蠟組織切片脫落細(xì)胞其它標(biāo)本脫落細(xì)胞：胸水，無菌容器40-50ml；細(xì)