雞胚尿囊絨毛膜移

雞胚尿囊絨毛膜移植把從正常環(huán)境分離的胚胎或其它組織移植到雞胚的尿囊絨毛膜（CAM）上，使其在尿囊絨毛膜上繼續(xù)生長和分化，是分析發(fā)育的一種研究方法。如MaryRawles（1952）把早期胚胎的囊胚層仔細地分成一定部分，放在CAM上生長，再把移植體制成切片，檢查它們的組織來確定移植體中的組織類型，根據(jù)實驗結(jié)果就能把囊胚層各部分發(fā)育的潛能編成表。Weiss和Taylor（1960）應(yīng)用CAM移植法去解答胚胎單個細胞的行為和相互作用。從較大的雞胚（孵育8-14天）器官中分離出細胞，離心細胞懸液使其聚集成團，然后再移植到CAM上。在CAM上進一步發(fā)育以后，把聚集的組織制成切片，發(fā)現(xiàn)它們又構(gòu)成原來器官的組織特點。例如，中腎聚集體發(fā)育成正常的腎小管，皮膚聚集體產(chǎn)生羽毛。因此證明了已進入分化階段的器官所分離的細胞仍然具有一種潛能，能再聚集并再構(gòu)成正常的組織。發(fā)育生物學上還有許多研究涉及到CAM移植，甚至已證實從蛙到人的各種組織都能在雞的CAM上生長。但是這種技術(shù)與體外培養(yǎng)方法相比有些不同，體外培養(yǎng)必須在嚴格控制的條件下進行，而在CAM移植上，對研究的組織所提供的環(huán)境是不能精確確定的，隨著胚胎（宿主）發(fā)育，胚胎循環(huán)中的一些物質(zhì)如激素會進入CAM上而影響移植體的發(fā)育。然而CAM移植技術(shù)比體外組織培養(yǎng)技術(shù)要容易的多，不需要那么復雜的準備工作。這個胚外位置對研究的組織進一步發(fā)育提供了非常有利的環(huán)境，胚外液體是合適的“培養(yǎng)基”。如果移植塊在CAM上成功生長的話，CAM上的血管將會長入移植體，為它提供氧氣和營養(yǎng)物，同時帶走代謝廢物。

實驗步驟

一、宿主的準備

1.取孵育8-9天的雞蛋作為宿主。先逐個照蛋，以確定尿囊絨毛膜上血管呈“Y”形的部位。并在蛋殼上作標記。血管交叉點被認為是移植的最好位置。

2.在蛋的鈍端氣室處的蛋殼上用解剖針刺一個孔，這樣，在切開蛋殼時，尿囊絨毛膜會下降一些，膜的下降有助于防止在后面的操作中受到損傷。用酒精消毒雞蛋的鈍端，把探針插入約0.5cm深。做這一步時，必須小心控制探針，因為要用點力氣才能刺穿蛋殼，而這樣又很容易穿過氣室伸入胚胎。

3.在蛋殼上原已做了標記的地方，用單面刀片切割一個四方形的“窗口”，用透明膠帶封住它和鈍端小孔，將雞蛋暫放回孵育箱。實驗步驟二、供體準備

1.供體組織可以從不同胚齡的雞胚中取得。用早期胚胎（孵育36-48小時）的組織效果會更好，這是因為在發(fā)育過程中形態(tài)變化會更顯著。用孵育72小時或更大胚齡的雞胚組織，則容易切割供體和移植供體。但是無論是胚齡小或胚齡大的，移植眼睛、或孵育72-84小時雞胚的肢芽、或孵育5-6天胚胎的背部組織均會得到較好的效果。

2.供體胚胎在盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中切割。先將胚胎與其下方的卵黃囊分離開，然后在供體上用二支解剖針，交叉解剖針，使針尖頂著盤底，象剪子樣彼此以相反的方向拉針，將供體組織切開。一個供體能作幾個移植體。

3.留下幾個與供體同齡的雞蛋，不作任何手術(shù)，在孵育箱中繼續(xù)發(fā)育，以便與相應(yīng)的移植組織塊作對照。實驗步驟三、移植組織塊重新打開宿主雞蛋，集中光源于雞蛋“窗口”以便能看清尿囊絨毛膜上的“Y”字形區(qū)域。用鐘表鑷子移植供體組織塊。把它放在血管交叉點上。也可以用細口吸管移植組織，但是吸管帶來的鹽溶液會造成組織漂浮而離開選擇的位置。如果移植塊滑出視線到窗口邊緣，或者找不到了，應(yīng)該移植第二塊組織到此位置上。移植好以后盡可能快地重新封好蛋殼，防止雞蛋溫度下降太大和水份蒸發(fā)，把它放回孵育箱中。實驗步驟四、觀察實驗結(jié)果

1.繼續(xù)孵育7天后，去掉透明膠帶，一片片地剝?nèi)サ皻な埂按翱凇睌U大，仔細觀察尿囊絨毛膜上移植體生長的情況。如果移植成功的話，在膜上很容易看到一塊較大的組織塊，假如沒有移植好，通常只能看到一塊小小的紅棕色或黑色斑點。

2.把成功的移植塊從尿囊絨毛膜上切下來，保存在10%的福爾瑪林中。

3.在解剖鏡下仔細檢查移植塊，繪畫每個草圖，測量大小，辨認分化的結(jié)構(gòu)，并與孵育箱中未動手術(shù)的供體胚胎的相應(yīng)組織進行對照，比較它們的發(fā)育程度和“正常性”。實驗觀察取不同發(fā)育時期的雞胚照蛋觀察實驗觀察直接觀察（以孵育48小時的雞胚發(fā)育觀察為例）操作：1.取孵育48小時的雞蛋，輕輕搖動后放在小培養(yǎng)皿中，蛋下墊以棉花或軟紙作成的墊圈使之穩(wěn)固。用鑷子尖端在蛋的鈍端氣室處打一小孔，讓空氣逸出。這樣卵黃就下沉離開蛋殼內(nèi)表面。然后用鑷子從氣室開始，慢慢剝?nèi)サ皻?，直至卵黃完全暴露為止，然后將卵倒入盛有39-40℃的0.85%生理鹽水的小碗內(nèi)，使胚胎朝上。2.用尖頭鑷子輕輕剝離胚胎上復蓋的蛋白，使胚胎暴露。然后用尖銳的尖頭剪刀沿胚盤外緣周圍剪開，并速以左手執(zhí)小鏟從剪開處插在胚盤下托起，然后再將胚盤完全剪開，胚盤下也要剪一刀，胚盤就可以脫離卵黃，然后將胚盤用小鏟移至盛有0.85%生理鹽水的小培養(yǎng)皿中。然后取一尖頭鑷子夾住胚盤邊緣，在水中輕輕擺動，吸去胚盤下面的卵黃。這樣多洗幾次用吸管吸干培養(yǎng)皿內(nèi)的生理鹽水，將胚盤平貼在皿底。48小時的雞胚發(fā)育觀察將胚盤置解剖鏡下進行觀察。孵育48小時的雞胚胚體頭部較大軀體已演變成圓柱形，中腦處發(fā)生頭曲，使頭部傾向于右方，稍向后彎曲。腦部已分化成端腦、間腦、中腦、后腦及延髓五部分。眼和耳已形成。視泡位于間腦的兩側(cè)，已呈雙層視杯構(gòu)造，外層為網(wǎng)膜層，內(nèi)層為色素層，晶體也已形成。延髓兩側(cè)背方外胚層增厚凹陷形成聽泡，因頭曲的關(guān)系聽泡位于視杯同一水平。在耳右方與主動脈球左方之間，前腸二側(cè)壁上具有三對的鰓溝。胚胎的循環(huán)系統(tǒng)已明顯。心臟在有規(guī)律地跳動，心管彎曲扭成“S”形，心室在左邊，前接主動脈球，心房在右邊，后接靜脈。觀察胚胎在胚盤上的血液循環(huán)，可見有卵黃靜脈和卵黃動脈否？其間分支有無數(shù)毛細血管彌散于血管區(qū)中并與血竇相連。將解剖鏡小心地聚焦于血管上，如胚胎還活的話，辨別血管內(nèi)血流的方向和速度。血液從胚胎的動脈流出，而由靜脈流進，動脈中的血流顯得起伏搏動，而靜脈血流較為平穩(wěn)和勻稱。觀察胚體的體節(jié)數(shù)，體節(jié)位于脊索的兩側(cè)。此時已有幾對體節(jié)？雞胚發(fā)育的觀察觀察其他孵育時期（如7-8天、16-17天等）的雞胚。同上法將要觀察的雞胚小心從蛋殼中取出置于盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中觀察之。孵育7-8天的雞胚左側(cè)臥于卵黃囊上，胚體外被以透明的羊膜，其上覆以具血管豐富的尿囊絨毛膜（注意這三種胎膜如何分辨）。觀察卵黃囊是否全部包住卵黃？卵黃之下有淡黃色的濃稠卵白及稀的無色透明卵白。觀察孵育16-17天的雞胚，注意卵黃囊、尿囊及羊膜的形態(tài)有否變化？在每期觀察胎膜關(guān)系后，剪開羊膜，仔細觀察胚體外形。注意肢芽的發(fā)育，羽毛的形成，身體各部分相互比例的變化。實驗準備1.實驗材料：受精雞蛋

2.實驗儀器：孵蛋箱、照蛋箱、單面刀片、解剖針、鐘表鑷子、眼科剪、酒精燈、培養(yǎng)皿、解剖鏡、透明膠帶。

3.實驗藥品：生理鹽水，用前溫熱到孵育溫度

70%酒精脫脂棉實驗技術(shù)雞的個體發(fā)生中，許多早期發(fā)育如受精及卵裂過程并沒有象蛙胚那樣觀察得如此清楚。困難的原因之一是雞“卵”結(jié)構(gòu)的特殊性。卵子（通常稱卵黃）在排放過程中被雌性生殖道分泌的產(chǎn)物所包圍，它包括蛋白或蛋清、殼膜和卵殼。所有這些附屬層是在卵受精以后加上去的。卵本身是一個大的多卵黃的細胞，有限的細胞質(zhì)區(qū)在胚盤，其中包含細胞核。卵裂只在胚盤上進行。當雞蛋產(chǎn)出時，胚胎發(fā)育已處于原腸期（原條形成期）。隨著溫度的降低，發(fā)育停止。只有將蛋放到孵育溫度下才能繼續(xù)發(fā)育。孵育孵育是雞類繁殖采用的方式，它保證了胚胎正常發(fā)育必須條件。人工孵育就是運用自然孵育規(guī)律，以人工的方法，滿足胚胎發(fā)育不同時期的生理需要，使之得到良好的孵育效果。1.孵蛋箱結(jié)構(gòu)及使用方法目前國內(nèi)各地所使用的電熱孵蛋箱，雖然各種型號不同，但基本結(jié)構(gòu)原理是相似的，均有加熱的電熱絲，利用金屬熱脹冷縮的原理控制電路的通斷，以達到調(diào)節(jié)溫度的目的。溫度調(diào)節(jié)旋鈕一般裝在箱外。箱內(nèi)設(shè)有蛋架、出雛盤、溫度計、濕度計、盛水盤和照明燈。有的孵蛋箱裝有可調(diào)空氣流量的通氣窗，及調(diào)勻溫濕度和空氣用的電風扇。此外有的孵蛋箱還設(shè)有轉(zhuǎn)蛋裝置。孵蛋前幾天，將孵蛋箱擦凈后，再用來蘇爾、或過氧乙酸、或70%酒精消毒滅菌。然后接通電源，打開氣窗，轉(zhuǎn)動調(diào)溫旋鈕，將溫度調(diào)節(jié)到37-39℃。再將同1%HCl浸洗沖凈的砂粒放于盛水盤中，加入適量蒸餾水，使箱內(nèi)濕度達到50-60%的相對濕度。待溫濕度穩(wěn)定2-3天后，即可使用。2.受精蛋的選擇和保存為保證較高的孵化率，必須對蛋進行選擇。最好選用剛產(chǎn)出一周以內(nèi)的蛋。蛋的形態(tài)要正常。過圓、過長或畸形蛋都會影響孵化率。蛋殼的厚薄要均勻一致。殼上具凹凸不平條紋的蛋，也不宜使用。用照蛋燈檢查時，要選氣室小，無裂紋，卵白濃稠的蛋。卵黃浮起，卵黃破散，蛋內(nèi)有黑點或血塊的蛋均不能使用。蛋的保存很重要，蛋產(chǎn)出后最好保存于10℃左右。保存環(huán)境相對濕度應(yīng)為75-85%。濕度低，蛋內(nèi)水份易蒸發(fā)，濕度高，蛋易發(fā)霉。溫度超過20℃時，受精蛋易自行發(fā)育，低于8℃時，蛋的孵化率也受到影響。蛋的保存不宜過長，通常以10天為限，10天以上孵化率可能受影響。3.孵育前蛋的消毒及升溫處理入孵前將蛋從10℃冰箱中取出，先放在20多度的室溫下平衡溫度3-4小時，使之逐漸升溫，再用溫水（30-40℃）浸洗干凈蛋殼上的污物。便可按孵蛋框大小或?qū)嶒炓蟮臄?shù)量立即放入孵蛋箱中。每個蛋殼上要用鉛筆注明日期，作好記錄。

4.孵育的日常管理孵育管理是保證雞胚正常發(fā)育的外界條件中的重要環(huán)節(jié)。外界條件主要指孵育溫度、濕度、氧氣的供應(yīng)與轉(zhuǎn)蛋等。氧氣的供應(yīng)，應(yīng)該隨孵育時間而增加，通氣窗也應(yīng)隨孵育的進程而開大。孵育的日常管理（1）轉(zhuǎn)蛋：雞蛋孵育時，胚胎浮于卵黃上面，如果不隨時轉(zhuǎn)蛋，胚胎易與蛋殼粘連，影響出殼。為了防止粘連，每天需轉(zhuǎn)蛋四次。轉(zhuǎn)蛋角度45-50度。轉(zhuǎn)蛋還可使蛋受熱均勻，起調(diào)節(jié)局部溫度的作用。（2）檢蛋：為保證孵育成功，還應(yīng)該經(jīng)常檢查胚胎發(fā)育情況。一般每批蛋要定時檢查2-3次，通常在5-6天，10-11天和17-19天。檢蛋用照蛋箱，照蛋箱可用自制的長方木盒，內(nèi)裝60-100W的燈泡，在盒的一面挖一略小于蛋徑的橢圓形孔。檢蛋通常在較暗的條件下，或在晚上進行。檢蛋時，將雞蛋放置孔內(nèi)，慢慢轉(zhuǎn)動，即可見卵黃上有一小胚胎。第一次檢蛋的目的是檢查蛋的受精情況，及時查出不正常和未受精的蛋，以及死胚蛋、散黃卵等。正常蛋發(fā)育5-6天時，血管分布如蜘蛛網(wǎng)，顏色發(fā)紅，卵黃下沉。無受精蛋此時與未孵育蛋一樣，蛋中透明，卵黃呈桔黃色，懸于卵白中。散黃卵中，昏暗一片，見不到圓形卵黃投影或卵黃飄懸，呈不規(guī)則狀，也見不到血管。死胚蛋中，混濁，可見血環(huán)、血弧或血點。但無清楚的血管?；蚺咛ツ：磺澹琅咭话悴粍?。發(fā)育不正常蛋中，可見胚胎發(fā)育遲緩，如弱胚蛋或保存時間過長或保存溫度過低的蛋常發(fā)育不正常。孵育的日常管理第二次檢蛋目的是檢出中途停止發(fā)育的胚胎。正常發(fā)育的蛋此時除氣室外，卵蛋布滿血管，呈均勻黃色。雞蛋尖端也有血管明顯分布。如雞蛋中出現(xiàn)黑影，并可隨人轉(zhuǎn)蛋而轉(zhuǎn)動，周圍無血管或血管模糊，蛋白混濁不透明，顏色變暗發(fā)黃不呈紅色，或胚胎發(fā)育明顯小于正常，這都說明胚胎已停止發(fā)育或已死亡。第三次檢蛋目的是檢出不正常發(fā)育的蛋，同時為孵化出殼做準備。正常蛋此時氣室下緣呈波浪狀，雞胚頸部突入氣室，使氣室下緣的殼膜忽上忽下閃動。如果胚胎停止發(fā)育，則血管模糊不清，近氣室部分不象正常蛋為紅色，而常變成黃色。如將雞蛋放于眼皮處無熱感，說明胚胎已死。第三次檢蛋后，將蛋的大頭向上呈45度傾斜豎放。此后羊膜與尿囊中的液體漸漸減少。雞胚啄伸向氣室。豎放對出殼有利。雞胚在孵育過程中的發(fā)育1.第1天，雞胚的雛形隱約可見，最初是消化道、脊索，然后是神經(jīng)系統(tǒng)，頭、眼、血島開始形成，胚盤長約0.7cm，但驗蛋時不易辨認。

2.第2天，神經(jīng)管及前、中、后腦形成，心臟形成并開始跳動，血管出現(xiàn)。胚盤長約10cm，驗蛋時可見在卵黃陰影中有一小黑點，血管和心跳尚看不出。

3.第3天，胚胎約長0.55cm，卵黃囊、羊膜和漿膜出現(xiàn)，卵黃囊血管內(nèi)徑大1cm，胚胎的鼻、翼、后肢開始形成，尿囊亦開始出現(xiàn)，驗蛋時可見卵黃上有一小黑點及血絲。

4.第4天，胚胎長0.77cm，卵黃囊血管包圍卵黃約達1/3，胚體各器官已基本具備，胚胎形態(tài)與哺乳類相似。

5.第5天，胚胎繼續(xù)增大，長達1cm，已具有鳥類的外形，頭彎向胸部，雌雄分化，尿囊發(fā)達，與卵殼膜靠近，驗蛋可見心跳，翻蛋可見一透明囊，即為尿囊。

6.第6天，胚胎長1.38cm，啄形成，卵黃囊血管包圍卵黃2/3以上，翅與腿的構(gòu)造可區(qū)別出來，驗蛋時可見胚胎有收縮（羊膜的收縮）。

7.第7天，胚胎長約1.42cm，尿囊急劇增大，與漿膜相貼并愈合，形成尿囊絨毛膜。眼增大，腳上已長出腳趾。

8.第8天，胚胎長1.5cm，羽毛出現(xiàn)，胚胎的肋骨、肺、胃、肝明顯。

9.第9天，胚胎長2cm，開始角質(zhì)化，尿囊?guī)缀醢鼑麄€胚胎。雞胚在孵育過程中的發(fā)育10.第10天，胚胎長2.1cm，尿囊絨毛膜在卵的小端合攏，腳趾明顯，整個背部、頸部和大腿有羽毛乳頭。

11.第11天，胚胎長2.5cm，眼臉幾乎達于瞳孔，頭部和翅上長出羽毛，腺胃可清楚區(qū)別出來。

12.第12天，胚胎長3.57cm，啄上分出鼻孔，全身復有長的絨毛，腎臟開始工作。

13.第13天，胚胎長4.34cm，頭上復有絨毛，在眼的周圍也長出羽毛芽。

14.第14天，胚胎長4.47cm，完全復有絨毛，胚胎以橫著的位置改變?yōu)榕c長軸平行，頭向氣室。

15.第15天，胚胎長5.83cm，眼瞳蓋住眼睛，脛部及腳趾上鱗片形成。

16.第16天，胚胎長6.2cm，頭上的冠和肉垂已很明顯。

17.第17天，胚胎長6.5cm，啄上的鼻孔已經(jīng)形成，羊水和尿囊液已開始減少。

18.第18天，胚胎長7.0cm，脛部及腳被鱗片復蓋，眼睛睜開，羊水和尿囊液明顯地消失，啄已朝向氣室。

19.第19天，胚胎長7.3cm，剩余的卵黃，自肚臍處入體腔內(nèi)，尿囊動脈、靜脈退化萎縮，胚胎頭向蛋的鈍端，啄穿入氣室開始呼吸，頭夾左右翼下，兩腿彎曲朝向頭部，以便于破殼時掙扎有力，胚胎頭部肌肉特別發(fā)達，便于幫助破殼，驗蛋時看到殼內(nèi)胚胎呈黑色，除看到胚動外，還可在氣室下看到粗的血管。貼耳細聽，有時可聽到雛雞的叫聲。

20.第20天，胚胎長80cm，開始破殼，尿囊萎縮，雛雞可見，在殼內(nèi)有叫聲。

21.第21天，雛雞孵出。第一天：

狀區(qū)經(jīng)過24小時的孵育，胚盤變大變厚，明區(qū)和暗區(qū)同時增大，在卵黃上可見到橢圓形的盾稱為胚盾，是未來的胚區(qū)。未受精蛋

種蛋中通常被稱為“卵黃”的部分，實際上只是一個細胞，即雌性生殖細胞或卵子。卵黃絕大部分是營養(yǎng)物質(zhì)，細胞核和大部分細胞質(zhì)集中為一個不規(guī)則的小白點，浮于卵黃上面和卵黃膜的下面，如圖中箭頭所示。這種蛋雖經(jīng)孵化但不能發(fā)育，稱未受精蛋。受精蛋

雞的卵子在輸卵管的漏斗部與精子相遇而受精，受精卵在母體內(nèi)滯留期間不斷分裂，到種蛋產(chǎn)出體外時已分裂成一團細胞，此時為胚胎發(fā)育的囊胚期。從正面看囊胚像覆蓋在卵黃表面的圓盤，中央為明區(qū)，邊緣為暗區(qū)，通常稱為胚盤。第二天：胚盤已擴展一倍并被紅色的血管圍成櫻桃形或橢圓形，這些血管即胚胎的卵黃囊循環(huán)的邊緣血管----緣竇。胚盤中心有一變曲的透明體----胚胎，透明體中可見一搏動著的小紅點，即原始心臟。第三天：由孵化的第一天開始，蛋白中的水分通過半透性卵黃膜向卵黃中移動，使卵黃中水分含量大增，新進來的水分并不與卵黃液全仙融合而主要存在于胚區(qū)。胚胎與伸展的卵黃囊血管形似蚊子，白殼種蛋通過照視可見蚊狀的血管區(qū)，俗稱“蚊蟲珠”。第四天：

卵黃體積繼續(xù)增大，顏色變淡，卵黃囊血管包圍卵黃近1/3，由于卵黃液化膨脹的壓力，使卵黃囊血管緊貼于內(nèi)殼膜，可與外界進行氣體交換。照蛋時卵黃不易轉(zhuǎn)動，胚與卵黃囊血管形似蜘蛛，俗稱“小蜘蛛”。尿囊是一個很小的水泡，眼睛開始沉積黑色素。第五天：胚胎被包圍在一個透明的水泡（羊膜）中，羊膜內(nèi)充滿羊水，胚體彎曲，眼睛黑色素大量沉積。卵黃囊已包圍1/2的卵黃，照蛋時可見到眼睛的影子，俗稱“單珠”或“黑眼”。肉眼已可見到尿囊，直徑6毫米左右。第六天：尿囊增長迅速，一天之內(nèi)增長了約4倍，尿囊血管系統(tǒng)迅速發(fā)育，已經(jīng)覆蓋羊膜與部分卵黃，但較卵黃囊血管細；卵黃囊血管分布在卵黃面積達2/3以上。胚體已初具翼和腿的外型，已眼睛黑色素更多，照蛋可見頭部與軀干部兩個小圓團，俗稱“雙珠”。第七天：卵黃體積達到最大程度，以后將逐漸縮小，卵黃囊雖然也增大，仍有1/4卵黃未被覆蓋；尿囊比第6天增長約兩倍；胎兒的外形已具備禽類的特點，頭和眼所占的比例相當大，前后肢分化明顯，胎兒的透明度開始降低，胚胎半沉半浮橫臥于羊水中。第八天：尿囊較第7天擴大了一倍，幾乎包圍了卵黃囊。從第4天到第8天是尿囊發(fā)育的第一階段，胚胎由卵黃囊呼吸轉(zhuǎn)化為尿囊呼吸。胎兒外形發(fā)育趨于完善，上喙白色，破殼齒明顯可見，胸腹腔尚未封閉，心、肝、胃都暴露于體腔外。羊水與尿囊液迅速增多。第九天：尿囊沿內(nèi)膜迅速向下端發(fā)展，包圍了胎兒和卵黃，并包圍部分蛋分白。胎兒皮膚透明度下降，皮膚表面出現(xiàn)排列整齊的小點，即羽毛原基。胸腹腔已封閉，心、肝、胃等器官已包入體腔。第十天：尿囊在胚胎的背面迅速向下端發(fā)展，將蛋白逐漸包圍起來。當孵化的第10天結(jié)束時，尿囊雖向小端逐漸包圍，但尚未合攏。羽毛原基遍及全身，翼和腿部羽毛的尖端已微露。胎兒的位置靠近氣室。第十一天：由于尿囊完全包圍了卵黃、胚體和蛋白、尿囊血管已在小端吻合，此時為孵化后的第10天零半天，照蛋檢驗將這一現(xiàn)象稱為“合攏”。從第8天到第11天是尿囊發(fā)育的第二階段。尿囊的合攏與否意義重大，只有合攏完善，才能保證胎兒吞食蛋白。第十二天：圖中尿囊在蛋白端尚有一小孔未合攏，對于12天的胚胎發(fā)育似乎嫌慢。由于個體差異，這種情形并不罕見，雞胚短羽已遍與爪已角質(zhì)化。蛋白呈淡黃褐色，粘稠，漿羊膜道形成。第十三天：將羊膜道是輸送蛋白至漿羊膜腔的細長通道。粘稠的蛋白由于尿囊的包圍和收縮，像擠牙膏一樣不斷進入將羊膜腔，與羊水混合，這種含有蛋白的羊水，稱為蛋白羊水，胎兒開始大量吞食蛋白羊水。第十四天：尿囊血管充分發(fā)育并緊貼殼膜，通過內(nèi)外殼膜、蛋殼排出二氧化碳和水蒸氣，吸進氧氣；尿囊液增加，主要集中于羊膜周圍，新陳代謝旺盛，胎兒增重迅速06-06-30蛋時尿囊血管很容易破裂。第十五天：尿囊所包圍的蛋白減少，照視胚蛋，小端發(fā)亮部位縮小，胚體與卵黃的黑影部分增多。胎兒的羽毛生長迅速，頸部羽毛長度達12毫米，身體各部羽毛生長整齊，脛、趾鱗片開始形成。第十六天：尿囊所包圍的蛋白進一小減少，尿囊液顏色變混，有少量尿酸鹽積由于吞食白、胚胎代謝產(chǎn)物增多，排泄的尿酸鹽貯存在尿囊中。胎兒體重繼續(xù)增大，羽毛加長變豐，頸部羽毛長度達15毫米。第十七天：這是煮熟的全胚，已剝?nèi)ツ蚰?。孵化?7天，蛋白基本上向羊膜腔輸送完畢，胎兒仍被蛋白的羊水包圍。小圖中為胎兒的新鮮肌胃，可見到胃內(nèi)的乳凝塊，本是透明的蛋白羊水，被吞食到胃中受到胃酸和消化酶的作用而變成乳凝塊。

胎兒由于從蛋白和卵黃中攝取了全價蛋白體重增加，外形和羽毛的發(fā)育，與出殼的雛雞差異不大。從孵化的第12天至17天是尿囊發(fā)育的第三階段，尿囊的合攏導致胎兒可以完全吞食蛋白。照視胚蛋，全部為胎兒和卵黃的黑影，俗稱“封閉