儀器分析實驗

儀器分析實驗漆紅蘭honglanqi@8202儀器分析實驗組成：共6個實驗，分6個大組光3個實驗（紫外-可見、熒光、原子吸收）紫外分光光度法測定蛋白質含量（2組）熒光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的含量（2組）原子吸收光譜法測定鈣最佳實驗條件的選擇（1組）電1個實驗循環(huán)伏安法測定亞鐵氰化鉀（2組）色譜2個實驗（氣相色譜、液相色譜）苯、甲苯、乙苯混合物的分離與定量分析（1組）反相色譜法測定樣品中尼泊金甲酯的含量（1組）儀器參觀1個實驗（1組，附加）pH計的使用（2組，附加）注意事項：實驗預習報告（檢查、記錄數(shù)據(jù)、簽字）實驗報告（數(shù)據(jù)記錄和處理）實驗服、實驗室衛(wèi)生、實驗室安全和路途安全實驗小組（6組，輪流實驗，6周）儀器分析定性分析定量分析方法的評價指標

一、標準曲線二、靈敏度三、精密度四、檢出限五、準確度一、標準曲線1.標準曲線

標準曲線又稱校準曲線，是被測物質的濃度或量與儀器響應信號的關系曲線，用標準溶液或標準物質繪制。2.標準曲線的繪制標準曲線是依據(jù)一系列被測物質的標準溶液濃度（或含量）和其響應信號測量值來繪制的。只要在與校準曲線的相同的實驗條件下測得樣品溶液的峰電流，即可在校準曲線上求得樣品溶液中被測物質的濃度C。3.線性范圍校準曲線的直線部分所對應的被測物質的濃度或量的范圍叫作該方法測定這種物質的線性范圍。一般說來，好的分析方法應有較寬的線性范圍。圖1-1伏安法校準曲線曲線的橫坐標是試液的濃度C縱坐標是峰電流這種線性關系可以用一元線性回歸法求出b叫回歸系數(shù)即回歸直線斜率，也就是方法的靈敏度。r叫相關系數(shù)，表示線性關系的好壞。r值在+1.0000與-1.0000之間。當越接近1，則y與x之間的線性關系就越好。二、靈敏度（Sensitivity）

被測物質單位濃度或單位質量的變化引起響應信號值變化的程度，稱為方法的靈敏度，用S表示。根據(jù)國際純粹與應用化學聯(lián)合會（簡稱IUPAC）的規(guī)定，靈敏度是指在測定濃度范圍中標準曲線的斜率。在分析化學中使用的許多標準曲線都是線性的，一般是通過測量一系列標準溶液來求得，可用下式表示：式中：dc

和dm

分別為被測物質的濃度和質量的變化量，dx為響應信號的變化量。標準曲線的斜率越大，方法的靈敏度就越高。三、精密度(precision)

使用同一方法，對同一試樣進行多次測定所得結果的一致程度（重復性和再現(xiàn)性）。重復性同一分析人員在同一條件下平行測定結果的精密度又稱重復性。再現(xiàn)性不同實驗室所得測定結果的精密度又稱再現(xiàn)性。精密度常用測定結果的標準偏差s或相對標準偏差量度。

四、檢出限（DetectionLimit）

某一方法在給定的置信水平上可以檢出被測物質的最小濃度或最小質量稱為這種方法對該物質的檢出限，以濃度表示的稱為相對檢出限，以質量表示的稱為絕對檢出限。檢出限是一個定性概念，只表明此濃度或量的響應信號可以與空白信號相區(qū)別。在檢出限附近不能進行定量分析。對于光學分析方法，可以與空白信號區(qū)別的最小信號XL。以下式確定式中Xb為空白信號的平均值，sb為空白信號的標準偏差，k為根椐一定的置信水平確定的系數(shù)，IUPAC(國際純粹及應用化學聯(lián)合會)建議k值取3。能產(chǎn)生響應信號為XL-Xb的被測物質的濃度或量就是方法對該物質的檢出限，用DL表示。式中S是方法的靈敏度。1位有效數(shù)字檢出限與靈敏度關系靈敏度高，精密度好，檢出限低靈敏度是分析信號隨被測物質含量變化的大小，與儀器信號的放大倍數(shù)有關檢出限與空白信號波動或儀器噪音相關，具有明確的統(tǒng)計學含義。檢出限是方法靈敏度和精密度的綜合指標五、準確度(Accuracy)樣品含量的測定值與樣品含量真實值(亦稱真值)相符合的程度稱為準確度。準確度常用相對誤差量度。式中x為樣品含量的測定值，μ為樣品含量的真值。準確度是分析過程中系統(tǒng)誤差和隨機誤差的綜合反映，它決定著分析結果的可靠程度。方法有較好的精密度且消除了系統(tǒng)誤差后，才有較好的準確度。“3S+2A”，即Sensitivity（靈敏度），Selectivity（選擇性），Speediness（速度）,Accuracy（準確度）,Automation（自動化程度）IUPAC建議將精密度、準確度和檢出限三個指標作為分析方法的主要評價指標?！?S+2A”用某伏安分析新分析法測定試樣中的鉛離子濃度，獲得如下數(shù)據(jù)：鉛離子濃度(mg/mL)0.0000.0020.0050.0100.0200.0300.040峰電流平均值（nA）1.4800.0420.0520.0760.1640.2280.312鉛離子濃度(mg/mL)0.0600.1000.1400.1800.2200.2600.300峰電流平均值（nA）0.4520.7321.0141.2881.4421.4801.500說明：空白溶液測定10次，標準偏差s為0.024(mg/mL，這個值要自己會計算),標準溶液測定次數(shù)為3次。（1）試繪制標準曲線；（2）寫出標準曲線的一元線性回歸方程，確定其線性范圍和該方法的靈敏度；3）試計算該方法的檢出限。解：（1）利用實驗所得數(shù)據(jù)在Excel軟件表中按濃度為A列和峰電流平均值為B列制表。使用Excel軟件繪制標準曲線，見圖。（2）使用Excel軟件繪制線性標準曲線，見圖1-3。由圖1-3確定一元線性回歸方程為I(nA)=6.915c+0.036(c單位為mg/mL),相關系數(shù)平方值為0.9997，線性范圍為0.02~0.22mg/mL，方法在線性范圍內的靈敏度為6.915nA/mg/mL。

線性標準曲線圖（3）計算該方法的檢出限為：（mg/mL）定量分析方法標準曲線法標準加入法歸一化法（色譜）紫外-可見吸收光譜法又稱紫外-可見分光光度法，是以溶液中物質的分子或離子對紫外和可見光譜區(qū)輻射能的選擇性吸收為基礎而建立起來的一類分析方法。紫外光：10-400nm可見光：400-780nm，可被人們的眼睛所感覺特點：帶光譜分子光譜應用：定性分析-最大吸收波長定量分析-朗伯-比爾定律（標準曲線法和標準加入法）定性分析原理吸收曲線：吸收峰的數(shù)目、位置、相對強度以及吸收峰的形狀

根據(jù)朗伯－比耳定律：A=εbc，當入射光波長λ及光程b一定時，在一定濃度范圍內，有色物質的吸光度A與該物質的濃度c成正比。

標準曲線法：只要繪出以吸光度A為縱坐標，濃度c為橫坐標的標準曲線，測出試液的吸光度，就可以由標準曲線查得對應的濃度值，即未知樣的含量。

定量分析原理儀器組成部件各種類型的紫外-可見分光光度計，如下圖所示，從總體上來說是由五個部分組成，即光源、單色器、吸收池、檢測器和信號顯示記錄裝置。光源檢測器信號顯示記錄裝置吸收池單色器紫外分光光度法測定蛋白質含量實驗目的學習紫外分光光度法測定蛋白質含量的原理。掌握紫外分光光度法測定蛋白質含量的實驗技術。掌握TU-1901紫外-可見分光光度計的使用方法并了解此儀器的主要構造。定性、定量（標準曲線法）

本實驗采用紫外分光光度法測定蛋白質含量。蛋白質中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，因此，蛋白質具有吸收紫外光的性質，其最大吸收峰位于280nm附近（不同的蛋白質吸收波長略有差別）。在最大吸收波長處，吸光度與蛋白質溶液的濃度的關系服從朗伯-比耳定律。280nm275nm實驗原理實驗預習預習紫外分光光度法測定蛋白質含量的原理。預習紫外分光光度法測定蛋白質含量的實驗步驟。了解TU-1901紫外-可見分光光度計的主要構造。TU-1901紫外-可見分光光度計，比色管，吸量管標準蛋白質溶液：3.00mg.mL-1溶液0.9%NaCl溶液，待測蛋白質溶液（牛血清白蛋白）儀器與試劑1.啟動計算機，打開主機電源開關，啟動工作站并初始化儀器。2.在工作界面上選擇測量項目（光譜掃描，光度測量），本實驗選擇光度測量，設置測量條件（測量波長等）。3.將空白放入測量池中，點擊START掃描空白，點擊ZERO校零。4.標準曲線的制作?；静僮鲗嶒灢襟E1.吸收曲線的繪制和最大吸收波長的選擇：

用吸量管分別吸取1.0mL3.00mg.mL-1標準蛋白質溶液于10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀釋至刻度，搖勻。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液為參比，在190-400nm區(qū)間，掃描獲得吸收曲線。選擇最大吸收波長。2.標準曲線的制作

：

用吸量管分別吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL3.00mg.mL-1標準蛋白質溶液于5只10mL比色管中，用0.9%NaCl溶液稀釋至刻度，搖勻。用1cm石英比色皿，以0.9%NaCl溶液為參比，在280nm（選定波長下）處分別測定各標準溶液的吸光度A280，記錄所得讀數(shù)。3.樣品測定：取待測蛋白質溶液3mL，按上述方法測定280nm處的吸光度。平行測定三份。繪制吸收曲線。以蛋白質濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線。3.根據(jù)樣品溶液的吸光度，從標準曲線上查出待測蛋白質的濃度。數(shù)據(jù)處理分子發(fā)光分析法分子發(fā)光分析法包括分子熒光分析法，磷光分析法、化學發(fā)光分析法和生物發(fā)光分析法。實驗原理熒光分析法

常溫下，處于基態(tài)的分子吸收一定的紫外可見光的輻射能成為激發(fā)態(tài)分子，激發(fā)態(tài)分子通過無輻射躍遷至第一激發(fā)態(tài)的最低振動能級，再以輻射躍遷的形式回到基態(tài)，發(fā)出比吸收光波長長的光而產(chǎn)生熒光。在稀溶液中，熒光強度IF與物質的濃度c有以下的關系：當實驗條件一定時，熒光強度與熒光物質的濃度成線性關系：這是熒光光譜法定量分析的理論依據(jù)。a.與紫外-可見分光度法比較，熒光分析法具有更高的靈敏度。b.選擇性好。熒光法既能依據(jù)發(fā)射光譜，又能依據(jù)吸收光譜來鑒定物質。c.所需試樣量少、操作方法簡便。熒光分析法的特點激發(fā)光譜：固定測量波長(選最大發(fā)射波長)，化合物發(fā)射的熒光強度與照射光波長的關系曲線。激發(fā)光譜曲線的最高處，處于激發(fā)態(tài)的分子最多，熒光強度最大。發(fā)射光譜：固定激發(fā)光波長(選最大激發(fā)波長),化合物發(fā)射的熒光強度與發(fā)射光波長關系曲線。固定發(fā)射光波長進行激發(fā)光波長掃描，找出最大激發(fā)光波長，然后固定激發(fā)光波長進行熒光發(fā)射波長掃描，找出最大熒光發(fā)射波長。激發(fā)光波長和發(fā)射熒光波長的選擇是本實驗的關鍵。熒光光譜激發(fā)光譜發(fā)射光譜熒光分析儀器

常用的熒光分析儀器由激發(fā)光源、單色器、液槽、檢測器和顯示記錄器五部分構成，如下圖所示：熒光分析儀器與分光光度計比較主要差別有兩點：a.熒光分析儀器采用垂直測量方式，以消除透射光的影響；b.熒光分析儀器有兩個單色器，能夠獲得單色性較好的激發(fā)光并消除其它雜散光干擾。液槽顯示器單色器檢測器I0IIf光源單色器a.光源：在熒光計中常用鹵鎢燈作光源；熒光分度計常采用高壓汞燈或氙弧燈做光源。b.單色器：熒光計的單色器是濾光片，只能用于定量分析；熒光分光光度計采用兩個光柵單色器，可獲得激發(fā)光譜和熒光光譜。c.檢測器：熒光計采用光電管作檢測器；熒光分光光度計采用光電倍增管作檢測器。儀器部件熒光分光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的含量實驗目的學習熒光分光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的分析原理。掌握熒光分光光度計的操作技術和測定多維葡萄糖粉中維生素B2的方法。定性、定量（標準曲線法）

維生素B2（又叫核黃素，VB2）是橘黃色無臭的針狀結晶，其結構式為：維生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有機溶劑，在中性或酸性溶液中穩(wěn)定，光照易分解，對熱穩(wěn)定。多維葡萄糖粉中維生素B2含量的測定

維生素B2溶液在430～440nm藍光的照射下，發(fā)出綠色熒光，其峰值波長為525nm。VB2的熒光在pH=6～7時最強，在pH=11時消失。維生素B2在堿性溶液中經(jīng)光線照射會發(fā)生分解而轉化為光黃素，光黃素的熒光比核黃素的熒光強的多，故測VB2的熒光時溶液要控制在酸性范圍內，且在避光條件下進行。多維葡萄糖中含有維生素B1、B2、C、D2及葡萄糖，其中維生素C和葡萄糖在水溶液中不發(fā)熒光，維生素B1本身無熒光，在堿性溶液中用鐵氰化鉀氧化后才產(chǎn)生熒光，維生素D2用二氯乙酸處理后才有熒光，他們都不干擾維生素B2的測定。實驗預習預習熒光分光光度法測定多維葡萄糖粉中維生素B2的分析原理。了解熒光激發(fā)光譜和發(fā)射光譜。了解熒光光度計的操作步驟和測定多維葡萄糖粉中維生素B2的方法。970CRT熒光光度計（上海分析儀器總廠）5mL吸量管1只，2mL吸量管1只，50mL容量瓶7只10.0μg·mL-1VB2標準溶液（置陰暗處保存），冰乙酸（AR），多維葡萄糖粉試樣儀器與試劑1.打開氙燈，再打開主機，然后打開計算機啟動工作站并初始化儀器。2.儀器初始化完畢后，在工作界面上選擇測量項目，設置適當?shù)膬x器參數(shù)：激發(fā)波長=440nm（選擇），發(fā)射波長=540nm（選擇）。3.樣品測定。4.退出主程序，關閉計算機，先關主機，最后關氙燈?；静僮?.標準系列溶液的配制及標準溶液熒光強度的測定：在六個干凈的50mL容量瓶中，分別吸取0.50、1.00、1.50，2.00、2.50和3.00mLVB2標準溶液，各加入2.00mL冰乙酸，稀釋至刻度，搖勻。任取一份溶液，繪制激發(fā)光譜和發(fā)射光譜曲線，選擇最大激發(fā)波長和最大發(fā)射波長。在選定的條件下，從稀到濃測量系列標準溶液的熒光強度。2.未知試樣的測定:

稱取0.15-0.20g多維葡萄糖粉試樣,用少量水溶解后轉入50mL容量瓶中，加2.00mL冰乙酸，稀釋至刻度，搖勻。用測定標準系列時相同的條件，測量其熒光強度。實驗步驟1.用標準系列溶液的熒光強度繪制標準工作曲線。2.根據(jù)待測液的熒光強度，從標準工作曲線上求得其濃度，計算出試樣中VB2含量。數(shù)據(jù)處理1.試解釋熒光光度法較吸收光度法靈敏度高的原因。2.本實驗為何在酸性溶液中測定維生素B2？注意事項和問題原子吸收光譜法原子吸收光譜法(AtomicAbsorptionSpectrometry，AAS)是根據(jù)物質的基態(tài)原子蒸氣對特征輻射的吸收作用來進行元素定量分析的方法。1.特點(1)檢出限低，10-10～10-14g；

(2)準確度高，1%～5%；

(3)選擇性高，一般情況下共存元素不干擾；

(4)應用廣，可測定70多個元素（各種樣品中）；2.缺點：難熔元素、非金屬元素測定困難，不能進行多元素同時測定。

原子吸收光譜儀（原子吸收分光光度計）主要由銳線光源、原子化器、分光系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和電源同步調制系統(tǒng)五部分組成。

原子吸收光譜法測定鈣最佳實驗條件的選擇實驗目的學習原子吸收光譜法最佳實驗條件選擇的方法。掌握火焰原子吸收分光光度計的使用方法。定量（條件選擇）

在原子吸收測定中，實驗條件的選擇直接影響到測定的靈敏度、準確度、精密度和方法的選擇性。本實驗通過對一系列實驗條件（包括燃氣的流量比、燈電流、單色器通帶寬度以及燃燒器高度和位置）等的選擇和優(yōu)化，選定測定鈣的最佳實驗條件。

助燃比不同，火焰的溫度和性質不同，因而元素的原子化程度不同。通常固定空氣流量，改變燃氣流量來改變助燃比。在不同助燃比時測定吸光度，吸光度最大的助燃比為最佳助燃比。實驗原理燃氣、助燃氣的流量比火焰的種類燃助比火焰的性質火焰狀態(tài)應用范圍富燃火焰約1：3還原性層次模糊呈亮黃色易氧化而形成難解離氧化物的元素化學計量火焰約1：4中性層次清楚藍色透明大多數(shù)元素皆適用貧燃火焰約1：6氧化性火焰發(fā)暗高度縮小金屬和不易氧化的元素乙炔-空氣火焰的種類

燈電流的選擇要從靈敏度和穩(wěn)定性兩方面來考慮。燈電流過大，易產(chǎn)生自吸作用，多普勒效應增強，譜線變寬，測定靈敏度降低，工作曲線彎曲，燈的壽命減小。燈電流低，譜線變寬小，測定靈敏度高，但是燈電流過低，發(fā)光強度減弱，陰極發(fā)光不穩(wěn)定，因而譜線信躁比降低。一般的原則是在保證穩(wěn)定和適當?shù)墓鈴娸敵龅那闆r下，盡可能選擇較低的燈電流。燈電流

通帶寬度的選擇以能將吸收線和鄰近線分開為原則。通帶較窄，靈敏度較高，但躁聲較大，信躁比不一定高。對許多元素來說，為了得到最大信躁比、較高的靈敏度以及較寬的校正曲線，要求有0.2nm通帶寬度。

火焰的部位不同，其溫度和還原氣氛不同，因而被測元素基態(tài)原子的濃度隨火焰高度的不同而不同。在實驗中通過改變燃燒器高度并測定吸光度，以吸光度最大時的燃燒器高度為最佳燃燒器高度。單色器通帶寬度燃燒器高度實驗預習預習原子吸收光譜法最佳實驗條件選擇的方法。了解火焰原子吸收分光光度計的原理和使用方法。TAS-986型原子吸收分光光度計乙炔鋼瓶，空氣壓縮機鈣空心陰極燈100.0μg/mL鈣離子儲備液儀器和試劑1.溶液的配制：5.00μg/mL鈣離子標準溶液。準確移取100.0μg/mL鈣離子標準溶液5.00mL于100mL容量瓶中，用水稀釋至標線，搖勻。2.最佳實驗條件的選擇：(1)燃氣流量的選擇改變乙炔流量為1.2、1.5、1.8、2.0L/min，在每一乙炔流量下測定5.00μg/mL鈣離子標準溶液的吸光度。作吸光度-乙炔流量曲線，曲線上最大吸光度所對應的燃氣流量即為最佳燃氣流量。實驗步驟(2)燈電流的選擇在選定的最佳助燃比及燃燒器高度條件下，分別在燈電流為1、1.5、2、2.5mA時噴霧5.00μg/mL鈣標準溶液，測量吸光度，并觀察不同燈電流的穩(wěn)定性。讀數(shù)穩(wěn)定及大的吸光度所對應的燈電流即為最佳燈電流。(3)狹縫寬度的選擇在上述選定的實驗條件下，將狹縫寬度分別置于0.1nm、0.2nm、0.4nm處，噴霧5.00μg/mL鈣標準溶液，測量吸光度。選擇不引起吸光度減小的最大狹縫為最佳狹縫寬度。(4)測量結束后用高純水沖洗原子化器2min，先關乙炔氣再關空氣。(5)退出工作站，關閉計算機，關閉Tas986電源開關。1.繪制吸光度-乙炔流量曲線，曲線上最大吸光度所對應的燃氣量即為最佳條件。2.繪制吸光度-燈電流曲線，讀數(shù)穩(wěn)定且大的吸光度所對應的燈電流即為最佳燈電流。3.繪制吸光度-狹縫寬度曲線，吸光度最大處的狹縫寬度為最佳條件。4.綜合上述條件，得出測鈣的最佳實驗條件。數(shù)據(jù)處理循環(huán)伏安法測定亞鐵氰化鉀實驗目的學習固體電極表面的處理方法。掌握循環(huán)伏安儀的使用技術。了解掃描速率和濃度對循環(huán)伏安圖的影響。定性、定量（電流濃度定量關系的驗證及其方法應用）鐵氰化鉀離子-亞鐵氰化鉀離子氧化還原電對的標準電極電位實驗原理電極電位與電極表面活度的Nernst方程峰電流與電極表面活度的Cotroll方程

在一定掃描速率下，從起始電位（-0.2V）正向掃描到轉折電位（+0.8V）期間，溶液中[Fe(CN)6]4-被氧化生成[Fe(CN)6]3-，產(chǎn)生氧化電流；當負向掃描從轉折電位（+0.8V）變到原起始電位（-0.2V）期間，在指示電極表面生成的[Fe(CN)6]3-被還原生成[Fe(CN)6]4-，產(chǎn)生還原電流。i—E曲線循環(huán)伏安法

為了使液相傳質過程只受擴散控制，應在加入電解質和溶液處于靜止下進行電解。實驗前電極表面要處理干凈。在0.10mol·L-1NaCl溶液中[Fe(CN)6]的擴散系數(shù)為0.63×10-5cm·s-1；電子轉移速率大，為可逆體系（1.0mol·L-1NaCl溶液中，25℃時，標準反應速率常數(shù)為5.2×10-2cm·s-1）。實驗注意事項圖形解析從循環(huán)伏安圖上讀取以下數(shù)據(jù)計算作圖并驗證以下公式應用電極過程可逆性計算電極面積、擴散系數(shù)等電化學參數(shù)表面過程實驗預習預習循環(huán)伏安法的原理。預習循環(huán)伏安儀的使用技術。了解掃描速率和濃度對循環(huán)伏安圖的影響。學習計算電極面積的方法。CHI電化學分析系統(tǒng)；鉑盤電極；鉑柱電極，飽和甘汞電極；電解池大多電解池以玻璃制造（偶有石英），可以根據(jù)需要加工設計成各種形狀儀器儀器與試劑試劑0.50mol·L-1K4[Fe(CN)6];1.0mol·L-1NaCl飽和甘汞電極電解池實驗步驟1.指示電極的預處理：鉑電極用Al2O3粉末（粒徑0.05μm）將電極表面拋光，然后用蒸餾水清洗。3.不同濃度K4[Fe(CN)6]溶液的循環(huán)伏安圖:分別作0.010mol·L-1、0.020mol·L-1、0.040mol·L-1、0.060mol·L1、0.080mol·L-1的K4[Fe(CN)6]溶液（均含支持電解質NaCl濃度為0.10mol·L-1）循環(huán)伏安圖，掃速為50mV·s-1。4.不同掃描速率K4[Fe(CN)6]溶液的循環(huán)伏安圖:在0.040mol·L-1K4[Fe(CN)6]溶液中，以10mV·s-1、20mV·s-1、30mV·s-1、50mV·s-1、80mV·s-1、100mV·s-1，在-0.2至+0.8V電位范圍內掃描，分別記錄循環(huán)伏安圖。1.從K4[Fe(CN)6]溶液的循環(huán)伏安圖上，讀取ipa、

ipc、、

的值。2.分別以ipa、

ipc對K4[Fe(CN)6]溶液的濃度作圖，說明峰電流與濃度的關系。3.分別以ipa

、ipc對v1/2作圖，說明峰電流與掃描速率間的關系。4.計算ipa/

ipc的值、值和值；說明K3[Fe(CN)6]在KCl溶液中電極過程的可逆性。數(shù)據(jù)處理1.實驗前電極表面要處理干凈。2.掃描過程保持溶液靜止。3.設計一測定擴散系數(shù)的電化學方法。注意事項和問題分離與分析技術

色譜法是一種分離技術。試樣混合物的分離過程也就是試樣中各組分在稱之為色譜分離柱中的兩相間不斷進行著的分配過程。其中的一相固定不動，稱為固定相；另一相是攜帶試樣混合物流過此固定相的流體（氣體或液體），稱為流動相。

氣相色譜：流動相為氣體（稱為載氣）；按固定相的不同又分為：氣固色譜和氣液色譜液相色譜：流動相為液體（稱為淋洗液）。按固定相的不同分為：液固色譜和液液色譜。氣相色譜法的特點（1）分離效率高：復雜混合物，有機同系物、異構體。手性異構體。（2）靈敏度高：可以檢測出μg.g-1(10-6)級甚至ng.g-1(10-9)級的物質量.（3）分析速度快：一般在幾分鐘或幾十分鐘內可以完成一個試樣的分析。（4）應用范圍廣：適用于沸點低于400℃的各種有機或無機試樣的分析。不足之處：不適用于高沸點、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定物質的分析。被分離組分的定性較為困難。氣相色譜流程1-載氣鋼瓶；2-減壓閥；3-凈化干燥管；4-針形閥；5-流量計;6-壓力表；4-針形閥；5-流量計;6-壓力表；9-熱導檢測器；10-放大器；11-溫度控制器；12-記錄儀；1.載氣系統(tǒng)：包括氣源、凈化干燥管和載氣流速控制;2.進樣系統(tǒng)：進樣器及氣化室；3.色譜柱：填充柱（填充固定相）或毛細管柱（內壁涂有固定液）；4.檢測器：可連接各種檢測器，以熱導檢測器或氫火焰檢測器最為常見；5.記錄系統(tǒng)：放大器、記錄儀或數(shù)據(jù)處理儀；6.溫度控制系統(tǒng)：柱室、氣化室的溫度控制。高效液相色譜是20世紀70年代初發(fā)展起來的一種新型分離分析技術。他是在經(jīng)典液相色譜的基礎上，引入氣相色譜理論，在技術上采用高壓輸壓泵、梯度洗脫技術、新型高效填充劑及各種高靈敏度監(jiān)測器。高效液相色譜與氣相色譜比較，可供選擇的流動相種類較多，從有機溶劑到水溶劑，既能用純溶劑又可用二元或多元混合溶劑，并可任意調配比例，通過改變溶劑極性或強度繼而改變色譜柱效能、分離選擇性和組分的容量因子，最后實現(xiàn)改善色譜系統(tǒng)分離度的目的。高效液相色譜1.分析速度快。2.分離效率高。3.靈敏度高、易于實現(xiàn)操作自動化。4.適用于高沸點、熱不穩(wěn)定有機及生化試樣的高效分離分析方法。高效液相色譜法的特點高效液相色譜儀流程示意圖進樣裝置

流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進樣裝置，其結構如圖所示：

紫外光度檢測器（UV）：最小檢測量10-9g·mL-1，對流量和溫度的波動不敏感，可用于梯度洗脫。最常用的檢測器。定性方法：1.利用純物質定性的方法

利用保留值定性：通過對比試樣中具有與純物質相同保留值的色譜峰，來確定試樣中是否含有該物質及在色譜圖中位置。不適用于不同儀器上獲得的數(shù)據(jù)之間的對比。

利用加入法定性：將純物質加入到試樣中，觀察各組分色譜峰的相對變化。2.利用文獻保留值定性常用的幾種定量方法

（1）歸一化法：若試樣中含有n個組分，且各組分均能洗出色譜峰，則其中某個組分的質量可按下式計算

特點及要求：歸一化法簡便、準確；進樣量的準確性和操作條件的變動對測定結果影響不大；僅適用于試樣中所有組分全出峰的情況。

（3）外標法外標法也稱為標準曲線法。特點及要求：外標法不使用校正因子，準確性較高;

操作條件變化對結果準確性影響較大;

對進樣量的準確性控制要求較高，適用于大批量試樣的快速分析。實驗目的掌握氣相色譜法分離多組分混合物的方法。練習用歸一化法定量測定混合物中各組分的含量。苯、甲苯、乙苯混合物的分離和定量分析定性、定量（歸一化法）定量方法：歸一化法：若試樣中含有n個組分，且各組分均能洗出色譜峰，則其中某個組分的質量可按下式計算。了解氣相色譜儀的基本結構及操作步驟。掌握利用歸一化法分析混合物中各組分含量的方法。實驗預習1.色譜儀:氣相色譜儀，熱導池檢測器，微量注射器（10mL）2.色譜柱：2m×5mm3.固定相:15%鄰苯二甲酸二壬酯；102白色擔體60~80目，載氣：氮氣4.苯、甲苯、乙苯。三組分混合標準溶液：苯、甲苯、乙苯重量比為：1：1：2。三組分混合樣品。儀器與試劑基本操作1.打開電腦主機，再打開氣相色譜的模塊，啟動工作站并初始化儀器。2.開機調試，按下列參考色譜條件將儀器調至所需工作狀態(tài)。氣化室溫度：150柱溫：100檢測器溫度：200

3.運行程序，清洗色譜柱，直至基線平穩(wěn)，然后進樣，進行測定。4.測定結束后，依次用純水、100%甲醇洗滌20分鐘，退出主程序，關閉計算機。定性分析：儀器穩(wěn)定后，用10mL注射器進2.0mL混合樣品和5mL空氣，記錄色譜圖（I）。在完全相同的條件下，分別進苯、甲苯、乙苯純試劑，每次進樣2mL試劑，記錄色譜圖（II），測定校正因子?；旌衔锏亩窟M2.0mL三組分混合樣品，記錄色譜圖（IV）。實驗步驟數(shù)據(jù)處理1.準確測量色譜圖I~IV各峰的保留時間tR和死時間t0,比較個純是基于混合物中各峰的保留值，確定各峰是什么物質。2.計算甲苯和乙苯的校正保留時間和對苯的保留值。3.測量各峰的峰面積，以苯為標準，求出其余兩組分的相對重量校正因子（重量校正因子的文獻值為：苯：0.780，甲苯：0.794，乙苯：0.818）4.采用歸一化法求出混合物中各組分的百分含量。相對校正因子未知液中甲苯的含量進樣量準確與否是否會影響歸一化法的分析結果？2.能否從理論上揭示本實驗的出峰順序?3.進樣器要充分洗滌。注意事項和問題實驗目的了解高效液相色譜儀的基本結構及基本操作。了解反相色