蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)服務(wù)

2D電泳及質(zhì)譜判定技術(shù)服務(wù)生工帶您走進(jìn)蛋白質(zhì)組學(xué)時代實(shí)驗(yàn)原理：1、雙向凝膠電泳是將不一樣種類的蛋白質(zhì)依據(jù)等電點(diǎn)和分子量差異進(jìn)行高分辨率分別的剖析方法。

成功的二維電泳能夠?qū)?000到3000種蛋白質(zhì)進(jìn)行分別，是當(dāng)前獨(dú)一的同時能分別成千上萬種蛋白質(zhì)的工具。經(jīng)過對蛋白質(zhì)雙向電泳的圖譜掃描，用有關(guān)軟件（ImageMaster等）進(jìn)行圖譜差異剖析，找到差異點(diǎn)。而后把差異點(diǎn)切出，進(jìn)行脫色、酶解。最后樣品進(jìn)入質(zhì)譜測試，獲取質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)文件。經(jīng)過搜庫可獲取差異蛋白質(zhì)的詳盡信息。2、ABI4800串連質(zhì)譜（MALDI-TOF-TOF-MS）是當(dāng)前對SDS膠上的蛋白條帶和2D膠上差異點(diǎn)蛋白，切取并經(jīng)過酶解后進(jìn)行判定最常用的質(zhì)譜，它在肽指紋圖譜(一級質(zhì)譜)的基礎(chǔ)上選擇強(qiáng)度最大的10個峰進(jìn)前進(jìn)行二級質(zhì)譜，對肽段碎片的分子量精準(zhǔn)測定，再將一級和二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)整歸并使用GPS3.6（AppliedBiosystems）和Mascot2.1(MatrixScience)對證譜數(shù)據(jù)進(jìn)行剖析和蛋白判定。其供給的專一性信息豐富，關(guān)于數(shù)據(jù)庫的檢索，特別是對數(shù)據(jù)量豐富、冗余信息多的數(shù)據(jù)庫的檢索，其判定結(jié)果比肽指紋圖譜靠譜的多，該ABI4800也能夠不經(jīng)過酶解直接對蛋白進(jìn)行分子量精準(zhǔn)測定。經(jīng)典蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略主要步驟：1、樣品制備（蛋白提?。褐饕参?、動物細(xì)胞或組織等的破裂、離心以及定量。2、第一直IEF等電聚焦實(shí)驗(yàn)。3、第二向SDS實(shí)驗(yàn)。4、硝酸銀染色或考馬斯亮藍(lán)染色。5、圖像剖析及數(shù)據(jù)辦理。6、供給雙向電泳的正式實(shí)驗(yàn)報告。7、選用感興趣的蛋白點(diǎn)進(jìn)行酶解。8、對酶解后蛋白進(jìn)行質(zhì)譜技術(shù)剖析（Maldi-Tof-Tof/MS）。9、供給質(zhì)譜的正式實(shí)驗(yàn)報告。所需儀器：IPG-PhorIIIGERubySE600ImageScannerMaldi-Tof-Tof實(shí)例剖析：內(nèi)皮細(xì)胞引誘前后蛋白變化量及差異蛋白剖析供給結(jié)果：蛋白定量信息一份預(yù)實(shí)驗(yàn)報告一份膠圖掃描結(jié)果圖片（預(yù)實(shí)驗(yàn)+正式試驗(yàn)）ImageMaster軟件剖析報告（差異點(diǎn)列表、差異點(diǎn)對應(yīng)地點(diǎn)圖、組內(nèi)差異點(diǎn)強(qiáng)度柱狀圖及組內(nèi)差異點(diǎn)強(qiáng)度列表）正實(shí)驗(yàn)報告一份Maldi-Tof-Tof/MS判定報告（成功率、庫信息、蛋白查庫結(jié)果等）樣品要求：3、樣品需為可溶的固體蛋白或液體蛋白溶液，建議液體蛋白溶解系統(tǒng)為8M尿素/4％CHAPS/40mMTris/65mMDTT。如溶解于其余緩沖液系統(tǒng)中，請應(yīng)供給緩沖液成分。4、單次硝酸銀染色供給蛋白量不小于0.3mg；單次考馬斯亮藍(lán)染色供給蛋白量不小于1mg；總蛋白量不小于2mg。5、用于一次制備型樣品，動物組織或菌體的新鮮樣本一直不小于8500mg；采集細(xì)胞數(shù)目不小于1×10；植物或真菌樣品濕重不小于2g；6、為防止蛋白樣品降解，客戶所寄的蛋白樣本最好為凍干品，若為溶液蛋白，則需低溫保留，血液血漿樣品應(yīng)貯于4℃保留，其余液體蛋白溶液貯于-20℃保留。（外處客戶如需進(jìn)行樣品郵遞請使用干冰）7、如樣品中含有雜質(zhì)比如核酸、脂類、多糖、色素類等或需其余特別要求比如濃縮、透析等請?zhí)嵩缫姼?。我們將依?jù)具體狀況對實(shí)驗(yàn)方案做出相應(yīng)調(diào)整。服務(wù)價錢：服務(wù)名稱價錢樣品制備500-1100元/樣蛋白定量200元預(yù)實(shí)驗(yàn)及正式試驗(yàn)1500元/塊IEF及2DE（13cm）制備實(shí)驗(yàn)1500元SDS（7cm）600元/塊圖像剖析辦理800元切膠500元SDSGel2DGel銀染串連質(zhì)譜考染串連質(zhì)譜串連質(zhì)譜判定（詢價）直接分子量測定PMF（肽指紋圖譜）常有問題剖析：1．等電聚焦為何電壓上不去？主假如提取的蛋白樣品中離子含量過高，經(jīng)過適合改正蛋白提取方法比方采納除鹽試劑盒、濾膜過濾或許丙酮積淀等方法可以獲取較好的成效。2．雙向電泳圖譜的橫條紋與等電聚焦有什么關(guān)系？等電聚焦不完整或許聚焦過分都會惹起雙向電泳圖譜中橫條紋的產(chǎn)生，不一樣的是等電聚焦不完整致使的橫條紋較模糊且較粗，而等電聚焦過分形成的橫條紋則較為清楚和渺小。適合的等電聚焦時間的設(shè)置需要依據(jù)膠條長度、PH范圍以及上樣量等因素綜合考慮。3．質(zhì)譜判定取膠點(diǎn)該怎樣??？有什么注意事項(xiàng)？取點(diǎn)時將0.2ml的槍頭前端剪去一段，用該槍頭將凝膠戳取下來并轉(zhuǎn)移至0.5ml離心管中，用水將膠粒頻頻吸打沖刷兩至三次，最后吸干離心管中全部水分后封蓋保留并做好標(biāo)志。離心管最好用入口離心管；水最好用去離子水；取點(diǎn)時最好帶上口罩與手套，免得角蛋白污染。針對特別小的蛋白點(diǎn)，槍頭孔徑可能會比蛋白點(diǎn)面積大，取點(diǎn)時把該蛋白點(diǎn)的邊上空白部分也一同取一些下來也不重要，只有膠圖上清楚可見的蛋白點(diǎn)，其含量就足夠用于質(zhì)譜判定，因此只需取一次蛋白點(diǎn)就能夠了，不需要把幾張膠上的蛋白點(diǎn)取了放在一同進(jìn)行判定，同時注意不要把膠點(diǎn)弄得太碎，條件同意的話能夠多取一次膠點(diǎn)的重復(fù)以做好備份。4．蛋白凝膠能否能夠長久保留？對證譜判定有何影響？假如保留時間超出一個月，能夠放入-20℃或許-80℃冰箱，假如小于一個月，則能夠常溫保持，基本不會影響后續(xù)質(zhì)譜判定成效。5．凝膠掃描以及圖像剖析的基本因素是什么？染色后的凝膠用ImageScanner掃描儀進(jìn)行掃描，掃描模式為灰度模式，光密度值為300dpi。使用ImageMaster2D6.0軟件對圖像進(jìn)行剖析，主要操作包含凝膠蛋白點(diǎn)檢測、圖像背景扣除、蛋白點(diǎn)灰度值標(biāo)準(zhǔn)化、不一樣凝膠間蛋白點(diǎn)般配，并依據(jù)般配結(jié)果計算差異表達(dá)倍數(shù)，選擇差異表達(dá)的蛋白點(diǎn)用于質(zhì)譜剖析6．關(guān)于Mascot網(wǎng)站沒有全基因組數(shù)據(jù)的物種該怎樣進(jìn)行蛋白的判定？關(guān)于已經(jīng)宣布全基因組序列但未在Mascot列出的物種，能夠在獲取全序列后進(jìn)行多種生物當(dāng)?shù)亟◣觳⑦M(jìn)行當(dāng)?shù)貦z索；關(guān)于未進(jìn)行全基因組測序的物種，能夠采納近緣物種的數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，大大提升了質(zhì)譜判定的效率和成功率。7．在雙向電泳凝膠不一樣地點(diǎn)的多個蛋白點(diǎn)判定出同一個蛋白是什么原由？蛋白翻譯后修飾、蛋白提取及電泳過程中的人為修飾和蛋白降解等多種原由都有可能使得同一個蛋白的不一樣修飾種類或許不同碎片出此刻凝膠的不一樣地點(diǎn)，表現(xiàn)為多個蛋白點(diǎn)判定結(jié)果同樣。8．MALDI-TOF-T