第九章農(nóng)藥生物測(cè)定

第九章農(nóng)藥的生物測(cè)定

一、生物測(cè)定的基本原理和內(nèi)容

概念農(nóng)藥生物測(cè)定是指用活體生物對(duì)農(nóng)藥的毒效、毒性進(jìn)行的測(cè)定評(píng)價(jià)。是測(cè)定藥劑有無(wú)生物活性的基本方法。農(nóng)藥生物測(cè)定與室內(nèi)毒力測(cè)定一般沒(méi)有嚴(yán)格區(qū)別，多半是指在室內(nèi)進(jìn)行的測(cè)定。包括利用標(biāo)準(zhǔn)供試生物對(duì)農(nóng)藥有效成分含量的測(cè)定農(nóng)藥在室內(nèi)外對(duì)病蟲(chóng)草藥的測(cè)定農(nóng)藥在動(dòng)、植物體內(nèi)殘留量的測(cè)定對(duì)病蟲(chóng)草抗藥性的測(cè)定。生物測(cè)定的基本原理利用生物體對(duì)農(nóng)藥的反應(yīng)性質(zhì)和程度來(lái)鑒別和測(cè)定農(nóng)藥的生物活性及其相關(guān)性，即對(duì)昆蟲(chóng)、病原菌雜草及高等動(dòng)物毒性、作用方式、作用程度，用以比較毒力或藥效。主要研究?jī)?nèi)容主要研究?jī)?nèi)容綜合其在農(nóng)藥研究和植物化學(xué)保護(hù)應(yīng)用中的作用，生物測(cè)定包括：室內(nèi)毒力測(cè)定、田間藥效試驗(yàn)和微量毒物的定量生物分析。A室內(nèi)毒力測(cè)定1、活性化合物的篩選（初篩/復(fù)篩），主要研究大量化合物的活性篩選。2、有害生物的抗性研究研究農(nóng)藥的作用機(jī)理及生理效應(yīng)，以及農(nóng)藥對(duì)植物的生理作用等。3、測(cè)定農(nóng)藥的有效含量及殘留量。4、研究農(nóng)藥理化性質(zhì)和劑型與毒效的關(guān)系。5、農(nóng)藥復(fù)配的共毒系數(shù)測(cè)定。B田間藥效試驗(yàn)田間藥效試驗(yàn)是在自然或一定的人為控制條件下進(jìn)行的生物測(cè)定，是一種綜合評(píng)價(jià)藥劑使用價(jià)值的試驗(yàn)方法。是一種新化合物能否成為農(nóng)藥的關(guān)鍵性階段。田間藥效試驗(yàn)可分為：小區(qū)試驗(yàn)大區(qū)試驗(yàn)大面積示范試驗(yàn)其中小區(qū)和大區(qū)藥效試驗(yàn)都是在有限的范圍和面積內(nèi)進(jìn)行的，有一定的局限性，通常還要進(jìn)行大面積示范試驗(yàn)以取得驗(yàn)證并迅速推廣。田間藥效試驗(yàn)包括以下內(nèi)容（1）農(nóng)藥品種比較試驗(yàn)（2）不同劑型比較試驗(yàn)（3）農(nóng)藥應(yīng)用技術(shù)試驗(yàn)（4）農(nóng)藥（劑型）的理化特征與藥效的關(guān)系（5）對(duì)寄主植物的藥害及對(duì)生物群落的影響，尤其是對(duì)害蟲(chóng)天敵的影響試驗(yàn)。二、試驗(yàn)設(shè)計(jì)原則和步驟

（一）試驗(yàn)設(shè)計(jì)原則1．相對(duì)控制環(huán)境條件（1）室內(nèi)生物測(cè)定多屬單因子試驗(yàn)。如：控制施藥劑量，靶標(biāo)生物的死亡率，控制試驗(yàn)的溫濕度條件等。（2）田間試驗(yàn)多因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)于大面積的試驗(yàn)區(qū)難以形成人工控制的條件，僅能對(duì)土肥、病蟲(chóng)分布、長(zhǎng)勢(shì)等進(jìn)行小區(qū)控制。加強(qiáng)田間管理，盡可能避免與試驗(yàn)無(wú)關(guān)因素的影響2．設(shè)立對(duì)照，消除試驗(yàn)中的偶然誤差在農(nóng)藥試驗(yàn)中通常所設(shè)的對(duì)照有：（1）空白對(duì)照（2）溶劑和乳化劑試驗(yàn)（3）標(biāo)準(zhǔn)藥劑試驗(yàn)3．各處理設(shè)立重復(fù)，減少誤差從生物統(tǒng)計(jì)的理論上講，重復(fù)次數(shù)越多，其平均值就越接近真實(shí)值，試驗(yàn)結(jié)果也越可靠，但工作量太大。通常在生物測(cè)定中，每處理設(shè)3～5個(gè)重復(fù)，每重復(fù)采樣數(shù)因測(cè)定對(duì)象而定：如某種殺蟲(chóng)劑對(duì)小菜蛾的毒力測(cè)定，每處理可用30～50頭3齡幼蟲(chóng)。4．統(tǒng)計(jì)分析試驗(yàn)結(jié)果運(yùn)用生物統(tǒng)計(jì)分析原理，總結(jié)歸納實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，化繁為簡(jiǎn)，找出規(guī)律，科學(xué)地反映出農(nóng)藥與病蟲(chóng)害間的內(nèi)在聯(lián)系，給出結(jié)果。主要用顯著性測(cè)定（方差分析，t值或F值測(cè)定）。（二）設(shè)計(jì)步驟1．選擇合適的試驗(yàn)對(duì)象2．確定藥劑的用量（濃度）及用法（點(diǎn)滴、浸漬、噴霧、藥膜等）3．確定試驗(yàn)結(jié)果的觀察方法，如LD50、ED50、LC50等指標(biāo)4．確定試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案5．試驗(yàn)的實(shí)施試驗(yàn)結(jié)果的生物統(tǒng)計(jì)分析第二節(jié)殺蟲(chóng)劑室內(nèi)毒力測(cè)定殺蟲(chóng)劑的室內(nèi)毒力測(cè)定是不斷地開(kāi)發(fā)新的有效殺蟲(chóng)劑，改善和提高現(xiàn)有殺蟲(chóng)劑的使用效果，減少環(huán)境污染的必要手段。測(cè)定所得結(jié)果是安全、合理、經(jīng)濟(jì)、有效的使用殺蟲(chóng)劑的依據(jù)；可有效監(jiān)測(cè)害蟲(chóng)的抗性動(dòng)態(tài)，有利于克服害蟲(chóng)抗藥性以及保持自然環(huán)境的生態(tài)平衡。主要的研究?jī)?nèi)容包括：（1）測(cè)定殺蟲(chóng)劑對(duì)昆蟲(chóng)的效力。（2）

篩選新農(nóng)藥及探索新化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與毒效關(guān)系的規(guī)律（即構(gòu)效關(guān)系的研究，較多地運(yùn)用于計(jì)算機(jī)輔助開(kāi)發(fā)新農(nóng)藥的過(guò)程）。如溴氰菊酯有8種異構(gòu)體，但只有右旋順式體對(duì)昆蟲(chóng)的毒效最高。六六六的8種異構(gòu)體中，也只有丙體666的毒效最高。（3）研究殺蟲(chóng)劑的理化性狀與毒效的關(guān)系及鑒定加工劑型的質(zhì)量。（4）研究目標(biāo)昆蟲(chóng)的生理狀態(tài)及外界條件與藥效的關(guān)系。（5）測(cè)定不同殺蟲(chóng)劑混用的效力以及尋找增效劑等。一、標(biāo)準(zhǔn)試蟲(chóng)的飼養(yǎng)殺蟲(chóng)藥劑的室內(nèi)毒力測(cè)定，需要蟲(chóng)態(tài)、齡期、營(yíng)養(yǎng)及生活力狀況良好和發(fā)育一致的大量昆蟲(chóng)作材料。而從田間采集的昆蟲(chóng)生理生化狀態(tài)（蟲(chóng)齡、抗性水平等）往往差異較大，測(cè)得的結(jié)果誤差很大，不符合試驗(yàn)要求。因此，必須在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)大量飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)化的試蟲(chóng)。常用的室內(nèi)飼養(yǎng)的試驗(yàn)昆蟲(chóng)種類(lèi)很多，可根據(jù)不同的試驗(yàn)?zāi)康模x擇不同的蟲(chóng)種進(jìn)行飼養(yǎng)。昆蟲(chóng)的室內(nèi)飼養(yǎng)的環(huán)境應(yīng)盡量滿(mǎn)足該試蟲(chóng)的最適發(fā)育溫度、濕度、光照等條件。飼養(yǎng)的飼料可分為天然飼料和人工飼料。一般以人工飼養(yǎng)來(lái)代替天然飼料，以便長(zhǎng)期長(zhǎng)期穩(wěn)定的供給昆蟲(chóng)飼養(yǎng)的需要。棉鈴蟲(chóng)的飼養(yǎng)棉鈴蟲(chóng)（HelicoverpaarmigeraH.）屬鱗翅目夜蛾科。食性雜，可長(zhǎng)年飼養(yǎng)。但因幼蟲(chóng)在三齡期以后有相互殘殺習(xí)性，須單頭飼養(yǎng)。連續(xù)大量飼養(yǎng)可采用人工飼養(yǎng)。（1）人工飼料配方A．含大豆粉和玉米粉的飼料（a）飼料組成熟大豆粉（g）20.0玉米粉（g）30.0

大麥粉（g）30.0抗壞血酸b）0

干酵母（g）8.0瓊脂（g）3.5

苯甲酸鈉（g）0.8棉油（ml）0.536％醋酸（ml）6.010％甲醛（ml）1.0

水（ml）200（b）配制方法大豆粉蒸熟。將甲醛、棉油和苯甲酸鈉放在占總水量10％的水中，再加入玉米粉等其他成分?jǐn)嚢瑁患恿硗?0％的熱水，以溶解瓊脂，冷至70℃時(shí)與上述組分混合攪拌；飼料均勻平鋪在瓷盤(pán)上，厚度0.5—1.0cm，冷卻后切成重5g左右小塊，分裝于養(yǎng)蟲(chóng)管中備用。B．含棉葉粉的飼料（a）飼料組成干棉葉粉（g）7.0尼泊金（g）0.25熟豆粉（g）7.5瓊脂（g）1.5多維葡萄糖（g）1.9自來(lái)水（mL）600

抗壞血酸（g）1.9酵母片（粉）（g）4.5（b）配制方法將黃豆粉置高壓滅菌鍋內(nèi)，經(jīng)30分鐘滅菌（15磅壓力），取出涼干備用。把酵母片研成粉末，置紫外線燈下滅菌30分鐘。將瓊脂放入200ml水中加熱熔化，再加入400ml水、熟豆粉、多維葡萄糖、抗壞血酸、尼泊金、干制棉葉粉，充分拌勻后，分裝于指形管中，每管10g左右。（2）飼養(yǎng)方法將初孵幼蟲(chóng)移入裝有人工飼料的指形管中，每管１頭，管口蓋上棉布，用橡皮筋扎好。幼蟲(chóng)在內(nèi)取食，直至老熟，勿須再換飼料。幼蟲(chóng)進(jìn)入預(yù)蛹期，即轉(zhuǎn)移到盛有無(wú)菌細(xì)土的養(yǎng)蟲(chóng)缸內(nèi)，泥土必須保持濕潤(rùn)，以利入土化蛹和蛹的存活。成蟲(chóng)羽化后，雌雄配對(duì)，放入馬燈罩中，罩內(nèi)放一個(gè)內(nèi)有10％蜂蜜液的小瓶，瓶中插入一束上粗下細(xì)的脫脂棉條，以便蛾子從棉條上吸取蜜液。馬燈罩下鋪上紗布，并用橡皮筋扎好。蛾子在罩內(nèi)交尾產(chǎn)卵，每日將產(chǎn)于紗布上的卵連同紗布取下，并換新紗布和蜜液。有卵紗布放入養(yǎng)蟲(chóng)缸中的飼料上，缸口糊白紙，以防幼蟲(chóng)外逃?；蛴煤诓紝⒏卓诜庾?，布上壓玻璃板，缸下部對(duì)著光源，孵化的幼蟲(chóng)可很快到飼料上取食。（3）飼養(yǎng)條件養(yǎng)蟲(chóng)室溫度保持26～28℃，相對(duì)濕度60％～70％，10小時(shí)/天光照。幼蟲(chóng)歷期22天左右。二、供試?yán)ハx(chóng)的準(zhǔn)備為了使毒力測(cè)定的結(jié)果可靠穩(wěn)定，除了嚴(yán)格控制每次試驗(yàn)過(guò)程中的條件外，殺蟲(chóng)劑毒力測(cè)定要求所用試蟲(chóng)群體質(zhì)量的均勻一致，除飼養(yǎng)的試蟲(chóng)外，從野外采集的田間試蟲(chóng)，應(yīng)進(jìn)行分離和嚴(yán)格挑選，如蟲(chóng)期、齡期、性別等，使之達(dá)到群體質(zhì)量均勻，盡可能地減少試驗(yàn)誤差，保證獲得滿(mǎn)意的結(jié)果。移蟲(chóng)前應(yīng)該凈手及消毒，避免藥劑或有害病菌污染蟲(chóng)體；操作時(shí)要細(xì)心，不要碰傷蟲(chóng)體。1移取試蟲(chóng)的方法毒力測(cè)定時(shí)，首先應(yīng)將試蟲(chóng)從飼養(yǎng)缸（籠）中快速移出，且不能損傷蟲(chóng)體。根據(jù)毒力測(cè)定所用的昆蟲(chóng)種類(lèi)、個(gè)體大小、生活習(xí)性和特點(diǎn)不同，以及移取的工具和方法的差異可分為機(jī)械法，化學(xué)法和趨光法。1.1機(jī)械法對(duì)于菜青蟲(chóng)、斜紋夜娥等活動(dòng)能力不大或有假死性的試蟲(chóng)，可采用最簡(jiǎn)單的取蟲(chóng)工具，如鑷子來(lái)移取。而一些體型小、體軟或易碰傷的試蟲(chóng)，如蚜蟲(chóng)、紅蜘蛛、小菜蛾等，可用毛筆移取。一些活動(dòng)能力不大、微小或易受機(jī)械傷害的目標(biāo)昆蟲(chóng)（如雜擬谷盜、米象、蚜蟲(chóng)和蟲(chóng)卵等）。此類(lèi)試蟲(chóng)用上述方法移取困難，費(fèi)時(shí)或易造成傷害，可用真空或喉管空氣注射吸蟲(chóng)法移取，既方便又快速。1.2麻醉法移取飛翔或活動(dòng)能力強(qiáng)的試蟲(chóng)時(shí)，常采用麻醉法處理，以達(dá)到試蟲(chóng)混勻移取的要求。但是麻醉處理對(duì)昆蟲(chóng)的生理狀態(tài)有一定影響，因而要注意麻醉時(shí)間，以免對(duì)試蟲(chóng)造成傷害。1.2.1二氧化碳法用CO2或CO2與空氣（3：1）混合氣體麻醉法，可用于大多數(shù)試蟲(chóng)?？稍谝粋€(gè)密閉容器里放入試蟲(chóng)，然后通入二氧化碳即可進(jìn)行麻醉。1.2.2揮發(fā)蒸氣法在密閉廣口玻璃容器（如干燥器）中，放入三氯甲烷與酒精（1：1）、三氯甲烷與乙醚（1：1）、乙醚與酒精（1：1）或乙醚等藥品，進(jìn)行麻醉。麻醉時(shí)間隨各種試蟲(chóng)群體對(duì)麻醉劑的敏感性和所要求的麻醉程度不同而定，如家蠅的麻醉時(shí)間一般在4min以?xún)?nèi)。1.2.3乙醚低溫麻醉法用試管扣試蟲(chóng)，再用棉花蘸少許乙醚并把乙醚擠干后，封住管口，然后把麻醉的試蟲(chóng)倒放在墊有冰塊的器皿上，以保持蟲(chóng)體在冷凍狀態(tài)，便于操作處理。此法具有麻醉時(shí)間短、見(jiàn)效快和無(wú)死亡等優(yōu)點(diǎn)，此法使用于家蠅等飛翔能力強(qiáng)的試蟲(chóng)。1.2.4冷凍法適用于蜚螃、家蠅等試蟲(chóng)。一般分兩步進(jìn)行，先將試蟲(chóng)置于5℃條件下冷凍10min，然后移至0℃條件下冷凍2－3min取出。這樣冷凍的效果較好，對(duì)試蟲(chóng)的生活力無(wú)不良影響。該法所需時(shí)間較長(zhǎng)、需要冷凍設(shè)備；在室溫20℃以上時(shí)，經(jīng)低溫麻醉的試蟲(chóng)，恢復(fù)較快，不便對(duì)試蟲(chóng)進(jìn)行分離操作。此外，冷凍處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，對(duì)試蟲(chóng)的生理狀態(tài)和抗藥力均有一定程度的影響，在使用時(shí)要注意掌握時(shí)間。1.3趨光法用強(qiáng)光照射時(shí)，家蠅、果蠅等試蟲(chóng)會(huì)向光源群集，利用昆蟲(chóng)的這種趨光性來(lái)移取試蟲(chóng)。如家蠅成蟲(chóng)，家蠅從飼養(yǎng)籠中向著陽(yáng)光或燈光飛到移取籠中。該法移取的試蟲(chóng)均勻性較差，先移出的試蟲(chóng)多為生活力較強(qiáng)的個(gè)體，且易造成蟲(chóng)體損傷或飛逃。三、殺蟲(chóng)劑毒力的表示方法毒力即是農(nóng)藥的毒性程度。常用的殺蟲(chóng)劑毒力表示方式：致死中量(MedianLethalDose)，即殺死供試?yán)ハx(chóng)群體半數(shù)個(gè)體所需要的劑量，常以LD50表示；致死中濃度(MedianLathalConcentration)，即殺死供試?yán)ハx(chóng)群體一半個(gè)體所需要的藥劑濃度，以LC50表示；致死中時(shí)(MedianLethalTime)或擊倒中時(shí)(MedianKnockdownTime),即殺死或擊倒供試?yán)ハx(chóng)群體一半個(gè)體所需的時(shí)間，單位示分鐘，記做LT50或KT50。同時(shí)，在不同藥劑間毒力比較時(shí)，還常常使用LD95或LC95來(lái)描述殺蟲(chóng)劑毒力,即殺死昆蟲(chóng)群體95％的個(gè)體所需的藥劑劑量或濃度。四、殺蟲(chóng)劑毒力測(cè)定的常見(jiàn)方法

殺蟲(chóng)劑對(duì)不同種類(lèi)的害蟲(chóng)毒力程度各異，且致毒的方式也不一樣，毒力測(cè)定的方法也很多，根據(jù)殺蟲(chóng)劑的作用方式可分為四種：胃毒作用、觸殺作用、內(nèi)吸作用和熏蒸作用的毒力測(cè)定。1．胃毒作用(stomachaction)的毒力測(cè)定利用害蟲(chóng)的貪食性，使殺蟲(chóng)劑隨食物一起被目標(biāo)昆蟲(chóng)吞食進(jìn)入消化道而發(fā)揮毒殺作用。常用的有葉片夾毒法、液滴飼喂法和口腔注射法三種（1）

葉片夾毒法（sandwichmethod）此法適用于植食性、取食量大的咀嚼式口器的昆蟲(chóng)，如鱗翅目幼蟲(chóng)、蝗蟲(chóng)、玉米螟等。基本過(guò)程是用兩張葉片，中間均勻地涂上一定量的藥劑飼喂目標(biāo)昆蟲(chóng)，然后由被吞服的葉片面積推算出吞服的藥量。此法最大的優(yōu)點(diǎn)是可以減少目標(biāo)昆蟲(chóng)與藥劑的接觸，避免發(fā)生觸殺作用，操作方便，結(jié)果比較精確，仍然是目前較理想的胃毒劑毒力測(cè)定方法。但是準(zhǔn)備夾毒葉片、計(jì)算吞服面積等需大量的人力物力，每次處理的樣品不能太多。a.夾毒葉片的準(zhǔn)備將采回的植物葉片用水洗凈，待表面水分揮發(fā)后，用打孔器制成2cm直徑的圓葉片，其中一片的一面定量涂（噴）上藥劑，另一片則涂上淀粉糊（或面粉糊），小心地將兩片葉片對(duì)合制成夾毒葉片。將夾毒葉片按不同劑量飼喂已知體重的目標(biāo)昆蟲(chóng)。葉片被食后，將剩余葉片移置于有方格紙的玻片上，在放大鏡下計(jì)算所吞食葉的面積。b.飼喂方法為保證試蟲(chóng)有較大的取食量，在飼喂前應(yīng)饑餓5~8小時(shí)。將試蟲(chóng)逐一稱(chēng)重編號(hào)，單獨(dú)飼喂，取食一段時(shí)間后取出葉片，根據(jù)取食面積計(jì)算取食量。（取食時(shí)間一般為10分~2小時(shí)）單位體重目標(biāo)昆蟲(chóng)吞食藥量可按下式計(jì)算：c．結(jié)果記錄昆蟲(chóng)取食后放入干凈的容器中，放入新鮮的葉片，在24~72小時(shí)后檢查死亡率d．計(jì)算致死中量

（2）

液滴飼喂法（feedingofmeasureddrops）不宜用夾毒葉片法測(cè)定殺蟲(chóng)劑對(duì)舐吸式口器昆蟲(chóng)的毒力，如家蠅、果蠅、蜜蜂等昆蟲(chóng)喜食糖液，可將一定的殺蟲(chóng)劑加入到糖液中，用微量注射器形成一定大小的液滴（0.001~0.01ml），直接喂試蟲(chóng)；或?qū)⑿纬傻囊旱畏旁诓Ａ?，讓家蠅等目?biāo)昆蟲(chóng)自行舐食，試蟲(chóng)在舐食前后都稱(chēng)重，以確定其取食量。目標(biāo)昆蟲(chóng)經(jīng)藥劑處理后，移入清潔干燥的器皿中，置于27℃的條件下定期觀察反應(yīng)情況，計(jì)算死亡率，求出致死中量（方法同前）。（3）

口腔注射法適用于個(gè)體較大的咀嚼式口器的昆蟲(chóng)，但該法從口腔注入藥液時(shí)易刺破口腔內(nèi)軟組織，技術(shù)難以掌握，故目前很少使用。2．觸殺作用（contactaction）的毒力測(cè)定通過(guò)昆蟲(chóng)體壁進(jìn)入蟲(chóng)體而致死的殺蟲(chóng)劑稱(chēng)為觸殺劑。在測(cè)定藥劑的觸殺毒力時(shí)，應(yīng)盡量避免藥劑從口器或氣孔進(jìn)入蟲(chóng)體。常用的有直接和間接兩種方法：2.1直接滴加2.1.1點(diǎn)滴法（Topicalapplication）點(diǎn)滴法是將一定濃度的藥液點(diǎn)滴于蟲(chóng)體上的某一部位，如幼蟲(chóng)的前胸背片上，溶劑迅速揮發(fā)，藥劑在體壁形成藥膜而侵入體內(nèi)。此法是殺蟲(chóng)劑觸殺毒力測(cè)定中使用最普遍的方法。除了螨類(lèi)及小型昆蟲(chóng)外，可應(yīng)用于大多數(shù)目標(biāo)昆蟲(chóng)的觸殺毒力測(cè)定，如二化螟、玉米螟、菜青蟲(chóng)、黏蟲(chóng)等。但是點(diǎn)滴法不能處理大批量的目標(biāo)昆蟲(chóng)，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性在很大程度上取決于試蟲(chóng)本身的生理狀態(tài)。因此，試驗(yàn)時(shí)須選用生理狀態(tài)一致的目標(biāo)昆蟲(chóng)，否則會(huì)大大影響其準(zhǔn)確性。其次是點(diǎn)滴部位、滴點(diǎn)大小以及目標(biāo)昆蟲(chóng)處理前的麻醉方式等都有影響，操作技術(shù)難掌握。且需專(zhuān)門(mén)的點(diǎn)滴設(shè)備，如千分尺微品點(diǎn)滴器、電動(dòng)（不動(dòng)）微量點(diǎn)滴器、手動(dòng)微量點(diǎn)滴器、毛細(xì)管微量點(diǎn)滴器(圖)和微量進(jìn)樣器等。所以，點(diǎn)滴法測(cè)殺蟲(chóng)劑毒力時(shí)應(yīng)注意選擇適宜的溶劑配制藥液，應(yīng)蟲(chóng)而異確定點(diǎn)滴的藥量及部位，控制環(huán)境條件及時(shí)飼喂，適時(shí)檢查結(jié)果。在正式試驗(yàn)前，可設(shè)計(jì)一個(gè)預(yù)備試驗(yàn)，明確需設(shè)藥劑的最佳濃度梯度，使每一個(gè)處理的試蟲(chóng)死亡率在10—90％之間，這需用大量試蟲(chóng)。而該濃度范圍并非先知，因此在正式測(cè)定前必須進(jìn)行預(yù)備試驗(yàn)，一般可將待出藥劑設(shè)三個(gè)濃度，其梯度間差可適當(dāng)加大，如按10、100及1000ppm配制藥液，每一濃度處理試蟲(chóng)10—20頭，不設(shè)重復(fù)，其他條件同正式測(cè)定。根據(jù)預(yù)備試驗(yàn)中藥劑濃度與死亡率的相關(guān)現(xiàn)象再正式設(shè)計(jì)試驗(yàn)。測(cè)定實(shí)例點(diǎn)滴法測(cè)定毒死蜱對(duì)小菜蛾的毒力測(cè)定①試蟲(chóng)準(zhǔn)備：用毛筆仔細(xì)地將3齡期小菜蛾幼蟲(chóng)從甘藍(lán)葉上挑下，置于一片事先準(zhǔn)備好的園葉片上（直徑5cm）。②配制藥劑：用丙酮將毒死蜱原藥（新安化工，含量97.5％）稀釋成2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625微克/微升等5種濃度，每濃度取3毫升裝在小瓶中。③點(diǎn)滴對(duì)照組小菜蛾：用手動(dòng)微量點(diǎn)滴器（上海昆蟲(chóng)研究所制）0.1微升，將針頭對(duì)準(zhǔn)小菜蛾背部，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)手柄，丙酮即在幼蟲(chóng)上展布。注意針頭不能壓在幼蟲(chóng)身上，否則極易傷害蟲(chóng)體。④從低濃度開(kāi)始點(diǎn)滴毒死蜱丙酮溶液。每點(diǎn)滴完一個(gè)濃度，用下一個(gè)濃度的藥液洗點(diǎn)滴器數(shù)次，再開(kāi)始點(diǎn)滴。⑤處理完24小時(shí)后檢查死亡率。用毛筆輕觸幼蟲(chóng)，無(wú)假死現(xiàn)象，或蟲(chóng)體翻轉(zhuǎn)視作死亡。2.1.2噴霧（噴粉）法噴霧（噴粉）是使殺蟲(chóng)劑直接附著于昆蟲(chóng)體表，通過(guò)表皮侵入昆蟲(chóng)體內(nèi)致毒。為了試蟲(chóng)個(gè)體間所接受的藥量一直，除了試蟲(chóng)本身的因素外，還跟所采用的噴霧裝置有關(guān)，目前有很多相關(guān)的設(shè)備被使用。如Potter噴霧器，適合于鱗翅目幼蟲(chóng)、飛翔昆蟲(chóng)蠅等的毒力測(cè)定；E.J.Gerberg設(shè)計(jì)的氣霧風(fēng)道則尤其適用于蚊子、家蠅、蜚蠊等衛(wèi)生害蟲(chóng)的毒力測(cè)定。其優(yōu)點(diǎn)在于簡(jiǎn)單易行，實(shí)驗(yàn)操作較接近于田間的實(shí)際情況，是目前最為常用的觸殺性殺蟲(chóng)劑毒力測(cè)定的方法。噴霧（噴粉）法的基本操作于點(diǎn)滴法相似。2.2藥膜法（間接法）藥膜法的基本原理是將一定量的殺蟲(chóng)藥劑施于物體表面，形成一個(gè)均勻的藥膜，然后放人一定數(shù)量的供試目標(biāo)昆蟲(chóng)，讓其爬行接觸一定時(shí)間后，再移至正常的環(huán)境條件下，于規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察試蟲(chóng)的中毒死亡反應(yīng)，計(jì)算擊倒率或死亡率。藥膜法的優(yōu)點(diǎn)是比較接近實(shí)際防治情況，方法簡(jiǎn)單，操作方便，應(yīng)用范圍廣，幾乎一切爬行的昆蟲(chóng)都適用，而且結(jié)果比較準(zhǔn)確，是目前常用的一種方法。但藥膜法有一定的局限性，當(dāng)昆蟲(chóng)的足部表皮是殺蟲(chóng)藥劑穿透的主要部位時(shí)，采用藥膜法測(cè)得的毒效就偏高，如家蠅用藥膜法測(cè)得的毒效高干點(diǎn)滴法。對(duì)于某些目標(biāo)昆蟲(chóng)，足部表皮不是殺蟲(chóng)劑穿透的主要部位或不能穿透的，采用此法測(cè)得的結(jié)果就偏低。其次是昆蟲(chóng)的活動(dòng)、習(xí)性對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響較大，藥膜法測(cè)得的結(jié)果不能用準(zhǔn)確的劑量表示，即不能表示單位昆蟲(chóng)體重接受的藥量，只能用單位面積的藥量來(lái)表示，而單位面積的藥量并不等于藥劑進(jìn)人蟲(chóng)體的劑量，相對(duì)較難定量。2.2.1濾紙藥膜法液體藥劑采用此法較好。方法是將直徑為9cm的濾紙懸空平放，用移液管吸取0.8ml的丙酮藥液．從濾紙邊緣逐漸向內(nèi)滴加，使丙酮藥液均勻分布在濾紙上。也可用噴霧法向?yàn)V紙噴霧。用2張經(jīng)過(guò)藥劑同樣處理過(guò)的濾紙，放人培養(yǎng)皿底和皿蓋各1張，使藥膜相對(duì)。（圖8）最好在培養(yǎng)皿內(nèi)側(cè)壁涂上拒避劑，避免昆蟲(chóng)進(jìn)人無(wú)藥的側(cè)避。隨即放入目標(biāo)昆蟲(chóng)，任其爬行接觸一定時(shí)間（30～60min）后，再將目標(biāo)昆蟲(chóng)移出放入干凈的器皿內(nèi)，置于正常環(huán)境條件下，定時(shí)觀察試蟲(chóng)的擊倒率。2.2.2容器藥膜法采用干燥的三角瓶或其他容器，放人一定量的丙酮藥液（0.3～0.5ml），然后均勻地轉(zhuǎn)動(dòng)容器，使藥液在容器中形成一層藥膜，待藥液干燥后（或丙酮揮發(fā)后），放人定量的目標(biāo)昆蟲(chóng)，任其爬行接觸一定時(shí)間（40～60min）后，再將試蟲(chóng)移至正常環(huán)境條件下，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)觀察試蟲(chóng)擊倒中毒反應(yīng)。2.2.3蠟紙粉膜法將蠟紙裁成一定面積的紙片，把藥粉撒在蠟紙的正面中央，兩手執(zhí)紙邊使藥粉在中間來(lái)回移動(dòng)數(shù)次，均勻地分布在一定范圍內(nèi)，倒去多余的藥，再輕輕彈動(dòng)背面1～2次，即成蠟紙粉膜，然后稱(chēng)重，計(jì)算單位面積藥量。放人一定數(shù)量的目標(biāo)昆蟲(chóng)于粉膜上，用直徑為9.0cm的培養(yǎng)皿蓋扣在藥膜上，待試蟲(chóng)爬行接觸一定時(shí)間后，取出移至正常環(huán)境中，定時(shí)觀察試蟲(chóng)擊倒中毒反應(yīng)。殺菌劑的生物測(cè)定方法根據(jù)殺菌劑生物測(cè)定方法的基本原理，可將其歸納為三大基本類(lèi)型：離體法活體法組織篩選法1離體法離體法是利用藥劑和病原菌直接接觸，以測(cè)定藥劑殺菌作用的方法。此測(cè)定體系不包括寄主植物。常見(jiàn)的離體測(cè)定方法有：孢子萌發(fā)法、生長(zhǎng)速率法、瓊脂擴(kuò)散法、瓊脂稀釋法、對(duì)持培養(yǎng)法、菌絲干重法、定氮法等。離體法具有操作簡(jiǎn)單，條件比較容易控制，試驗(yàn)材料易于獲得，測(cè)定所需的時(shí)間周期短等優(yōu)點(diǎn)。在一定程度上反應(yīng)了藥劑的生物活性，但此法最大的缺點(diǎn)是可能使一些具有防病作用的化合物漏篩。例如，以抑制孢子萌發(fā)作為指標(biāo)的殺菌劑生物活性測(cè)定，會(huì)使許多現(xiàn)代的殺菌劑被判斷為沒(méi)有活性，因?yàn)檫@些藥劑對(duì)孢子萌發(fā)沒(méi)有抑制作用。如三環(huán)唑，離體測(cè)定時(shí)對(duì)菌體沒(méi)有活性，但是可能會(huì)抑制真菌侵入寄主所需的黑色素等物質(zhì)的合成。另外，還有一些是調(diào)節(jié)、誘導(dǎo)植物抗病性的藥劑，如果只用離體法測(cè)定它們的活性，這些藥劑就有可能被漏篩。2活體法人們已逐漸認(rèn)識(shí)到離體實(shí)驗(yàn)方法存在很多不足之處。于是采用“活體優(yōu)先”的原則來(lái)進(jìn)行生物測(cè)定。實(shí)際上，幾乎所有的農(nóng)用殺菌劑，都是在病原菌與寄主共存的情況下發(fā)揮藥效。不言而喻，在以實(shí)驗(yàn)為目的進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，最好是在病原菌與寄主共存的條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。同時(shí)人們對(duì)生物測(cè)定進(jìn)行了大量的研究，孢子、菌絲的獲得和培養(yǎng)，接種方法，施藥方法，病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)等方面技術(shù)的進(jìn)一步成熟，為活體生物測(cè)定創(chuàng)造了條件，促進(jìn)了活體生物測(cè)定技術(shù)的發(fā)展?；铙w法測(cè)定是在殺菌劑、病原物和寄主共存的條件下進(jìn)行的，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果與田間效果具有很高的相關(guān)性，對(duì)生產(chǎn)實(shí)際有較大的參考價(jià)值。常用的方法有：種子殺菌劑藥效測(cè)定、幼苗接種實(shí)驗(yàn)方法、葉片接種實(shí)驗(yàn)方法，果實(shí)防腐劑生物測(cè)定、定殖法等?，F(xiàn)在研究開(kāi)發(fā)農(nóng)藥，平均10萬(wàn)個(gè)化合物中才能篩選出1個(gè)有前途的化合物。如果將大量的化合物完全采用活體法進(jìn)行篩選，事實(shí)上很難實(shí)現(xiàn)，因?yàn)榛铙w測(cè)定需要的寄主多，占用空間大，測(cè)定周期長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)條件難以控制，這樣將會(huì)耗費(fèi)更多的人力、物力和財(cái)力，當(dāng)然更談不上效率。為此，人們將實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)化，建立了“組織篩選法”。3組織篩選法組織篩選法是利用植物部分組織、器官或替代物作為實(shí)驗(yàn)材料評(píng)價(jià)化合物殺菌活性的方法，是一種介于活體和離體的方法。由于它既具有離體的快速、簡(jiǎn)便和微量等優(yōu)點(diǎn)，又具有與活體植株效果相關(guān)性高的特點(diǎn)。因此，近年來(lái)備受重視，以植物葉片、根、莖等組織為實(shí)驗(yàn)材料，適于多種病害殺菌劑的生物測(cè)定。目前比較成熟的組織篩選法有：適用于水稻紋枯病、蔬菜菌核病的“蠶豆葉片法”適用于稻瘟病的“葉鞘內(nèi)側(cè)接種法”適用于玉米彎孢霉葉斑病的“玉米葉段法”用來(lái)觀察藥劑對(duì)真菌各生長(zhǎng)階段作用的“洋蔥鱗片法”針對(duì)黃瓜灰霉病新藥劑篩選的“子葉篩選法”適用于霜霉病的“葉片漂浮法”適用于稻白葉枯病的“噴菌法”針對(duì)細(xì)菌性白菜軟腐病的“蘿卜塊根法”適用于柑橘樹(shù)脂病的“離體葉片法”適用于抗病毒劑篩選的“局部病斑法”及“葉片漂浮法”不管是離體法、活體法還是組織篩選法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，要針對(duì)病菌的侵染特點(diǎn)加以選擇，必要時(shí)還要結(jié)合使用，綜合各種方法的優(yōu)勢(shì)。如日本三共農(nóng)藥研究所在采用活體法篩選出有效的化合物后，往往又采用離體的方法來(lái)尋找毒力更強(qiáng)的化合物，這是一種活體－離體－活體的篩選模式。實(shí)驗(yàn)殺菌劑的生物測(cè)定--生長(zhǎng)速率法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)并掌握殺菌劑的生物測(cè)定方法之一--生長(zhǎng)速率法二、實(shí)驗(yàn)原理生長(zhǎng)速率法是殺菌劑毒力測(cè)定的常規(guī)方法之一，適用于不長(zhǎng)孢子而菌絲生長(zhǎng)較快的真菌，是通過(guò)菌落生長(zhǎng)的速度快慢來(lái)衡量藥劑的毒力大小生長(zhǎng)速率法又叫含毒介質(zhì)法，它是將供試藥劑與培養(yǎng)基混合，以培養(yǎng)基上菌落的生長(zhǎng)速度來(lái)衡量化合物的毒力大小。一般多用于那些不產(chǎn)孢子或孢子量少而菌絲較密的真菌菌落生長(zhǎng)速率的表示方法菌落達(dá)到一個(gè)給定的大小所需要的時(shí)間（天或小時(shí)）在單位時(shí)間內(nèi)菌落直徑的大小生長(zhǎng)速率法常用的菌種棉花枯萎病菌（Fusariumoxysporium）蘋(píng)果腐爛病菌（Valsamali）小麥紋枯病菌（Rhzoctoniasolani

）葡萄白腐病菌（Coniothyriumdiplodiella）小麥全蝕病菌（Gaeumannomycesgraminis）辣椒疫霉病菌（Phytophthoracapsici）三、試劑和儀器設(shè)備高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)、酒精燈、接種針、紗布、吸管、消毒培養(yǎng)皿、打孔器、無(wú)菌小燒杯PDA培養(yǎng)基病原菌（蘋(píng)果腐爛病菌）供試殺菌劑(多菌靈)四、實(shí)驗(yàn)步驟將培養(yǎng)基加熱溶化，冷卻至45-50℃，加入供試藥液制成含藥液的培養(yǎng)基，并分別倒入培養(yǎng)皿中冷卻以無(wú)菌操作手續(xù)，用打孔器打取圓形菌塊后用接種針挑至培養(yǎng)皿中央，然后將培養(yǎng)皿置于培養(yǎng)箱（27℃）中培養(yǎng)即可于處理后不同時(shí)間觀察測(cè)定菌絲的生長(zhǎng)情況五、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及其處理純生長(zhǎng)量=菌落平均直徑-菌餅直徑抑菌率（%）=[(對(duì)照菌落純生長(zhǎng)量-處理菌落純生長(zhǎng)量/對(duì)照純生長(zhǎng)量]×100%藥劑濃度（mg/L）濃度對(duì)數(shù)菌落直徑（mm）抑制（%）機(jī)率值ⅠⅡⅢⅣ平均50%多菌靈對(duì)蘋(píng)果腐爛病菌的抑制作用(生長(zhǎng)速率法)六、問(wèn)題討論根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較各種供試藥劑之間對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用除草劑生物測(cè)定方法除草劑的生物測(cè)定廣義的包括了實(shí)驗(yàn)室、溫室和大田三個(gè)試驗(yàn)層次,而狹義的僅主要指前兩者,后者則為田間藥效評(píng)價(jià)。除草劑生物測(cè)定應(yīng)用的范圍(1)除草活性的確定。新合成的化學(xué)除草劑要判定其是否對(duì)雜草有活性,就必須采用生物測(cè)定的方法。(2)殺草譜的確定。新的除草劑對(duì)哪些種類(lèi)的雜草有明顯的作用,必須通過(guò)生物測(cè)定來(lái)確定。(3)最佳用藥濃度和用藥時(shí)期的確定。除草劑對(duì)特定雜草的生長(zhǎng)抑制是在適當(dāng)?shù)膭┝肯潞吞囟ǖ纳L(zhǎng)時(shí)期,如果用藥量和用藥時(shí)期不當(dāng),就起不到預(yù)期的效果,還會(huì)造成經(jīng)濟(jì)損失。因此對(duì)特定的雜草,最佳的用藥濃度和時(shí)期非常重要。(4)對(duì)作物安全性的研究。包括兩方面含義,一是對(duì)當(dāng)茬作物的安全性,也就是除草劑的選擇性。二是對(duì)后茬作物的安全性,即是否存在殘留藥害。

(5)除草劑復(fù)配后聯(lián)合效果的判別。除草劑復(fù)配后聯(lián)合作用效果的判別一般采用生物測(cè)定的方法。(6)環(huán)境條件對(duì)除草劑活性的影響。這些環(huán)境條件包括溫度、光照、土壤濕度等。(7)除草劑在水體、土壤中的殘留活性和在土壤中的淋溶性。

(8)抗藥性和耐藥性雜草的鑒定。除以上提到的應(yīng)用范圍外,只要和除草劑活性相關(guān)的研究都可以采用生物測(cè)定的方法。供試的生物除草劑生物測(cè)定的供試生物以植物為主,也可以是其他生物。植物中根據(jù)測(cè)定目的不同可以選擇作物和雜草。具體選用哪種植物,應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)需要來(lái)確定。如測(cè)定除草劑對(duì)特定作物和雜草的生物活性,即以這些植物為材料。如果需要測(cè)定土壤或水體中除草劑的殘留活性,則需要進(jìn)行敏感植物的篩選,經(jīng)過(guò)預(yù)備實(shí)驗(yàn)后才能確定選用哪種植物。供試植物的選擇應(yīng)遵循如下原則(1)供試植物的來(lái)源充分(2)供試植物個(gè)體一致(3)在一定的劑量范圍內(nèi),供試植物對(duì)除草劑的反應(yīng)隨著劑量的增加而有規(guī)律的提高(4)在環(huán)境條件相同或相似的條件下,這種成比例的傷害關(guān)系是可以重現(xiàn)的。生物測(cè)定的材料與相應(yīng)程序常規(guī)生物測(cè)定一般是利用生物活體作靶標(biāo),通過(guò)觀察除草劑對(duì)靶標(biāo)生物的生長(zhǎng)發(fā)育、形態(tài)特征、生理生化等方面的反應(yīng)來(lái)判斷除草劑的生物活性。除草劑的作用方式很多,如抑制光合作用、呼吸作用、細(xì)胞分裂,干擾蛋白質(zhì)、脂類(lèi)、葉綠素等的生物合成以及生長(zhǎng)的激素控制等,因此在進(jìn)行除草劑生物測(cè)定時(shí),應(yīng)根據(jù)除草劑的不同作用方式選擇不同的靶標(biāo)生物和相應(yīng)的測(cè)定方法。測(cè)定方法整株水平測(cè)定組織或器官水平測(cè)定細(xì)胞或細(xì)胞器水平測(cè)定酶水平測(cè)定整株水平測(cè)定一般是在溫室用盆缽、培養(yǎng)皿或小杯如玻璃杯或一次性塑料杯培養(yǎng)供試的指示植物,根據(jù)不同要求用供試除草劑處理,待藥害癥狀明顯后進(jìn)行觀察評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)的指標(biāo)包括出苗率、株高、地上部重量和地下部重量等,還可對(duì)植物受害癥狀進(jìn)行分級(jí),再計(jì)算綜合藥害指數(shù)。植株個(gè)體大的供試材料用大盆缽培養(yǎng),采用測(cè)定株高或重量的方法以及分級(jí)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)都可以取得好的結(jié)果。組織或器官水平測(cè)定小杯法可以采用惰性材料沙子、蛭石或玻璃珠,也可以是土壤。測(cè)定的指標(biāo)可以是主根長(zhǎng)或地上部鮮重或株高,具體采用哪種指標(biāo)應(yīng)根據(jù)預(yù)備實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)分析后選擇穩(wěn)定性和相關(guān)性較好,以及容易測(cè)定的指標(biāo)。應(yīng)用較多的是主根長(zhǎng)生測(cè)法。例如利用玉米或油菜主根長(zhǎng)法測(cè)定磺酰脲類(lèi)除草劑的殘留活性。在利用種子作為生測(cè)材料時(shí),供試的種子一定要有較高的發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì),否則會(huì)影響測(cè)定結(jié)果,造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可靠。細(xì)胞或細(xì)胞器水平測(cè)定一般是針對(duì)特定作用機(jī)制的除草劑,常用的細(xì)胞器有葉綠體和線粒體。根據(jù)葉綠體和線粒體中一些特定的生理生化反應(yīng)測(cè)定生理指標(biāo)。在離體線粒體條件下,用瓦氏呼吸裝置測(cè)定氧的吸收和磷氧比,從而確定呼吸作用抑制劑活性。酶水平測(cè)定因?yàn)椴莞熟⒆饔糜诜枷阕灏被岷铣蛇^(guò)程中的一種重要酶—EPSP合成酶,導(dǎo)致莽草酸積累,因此測(cè)定植物體內(nèi)莽草酸的累積量可以得知草甘膦活性的大小?；酋ｋ孱?lèi)除草劑抑制乙酰乳酸合成酶活性,因此可以用乙酰乳酸合成酶活性的變化測(cè)定植物對(duì)磺酰脲類(lèi)除草劑的敏感程度。農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)是在田間進(jìn)行的農(nóng)藥對(duì)有害生物施藥效果的試驗(yàn)，這是確定新的農(nóng)藥品種能否在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上大面積推廣應(yīng)用很重要的方法。田間藥效試驗(yàn)可分為小區(qū)、大區(qū)與大面積示范等幾種。這是在自然條件下研究比較幾種不同的農(nóng)藥，采用幾種不同的即時(shí)條件和要求，從中鑒定出最有效、最有經(jīng)濟(jì)效果的農(nóng)藥品種，同時(shí)確定其大田使用范圍、防治對(duì)象、最低有效使用劑量、濃度及其他技術(shù)條件等。一般農(nóng)藥經(jīng)室內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明有效，需先進(jìn)行小區(qū)試驗(yàn)，獲得較好試驗(yàn)結(jié)果的項(xiàng)目，再進(jìn)行大區(qū)試驗(yàn)。在正式推廣之前，常常還要進(jìn)行大面積示范，以便取得廣泛經(jīng)驗(yàn)。進(jìn)行農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)之前，必須制定試驗(yàn)計(jì)劃和方案，明確試驗(yàn)的目的、要求、方法以及各項(xiàng)技術(shù)措施的規(guī)格要求，以便試驗(yàn)的各項(xiàng)工作按計(jì)劃進(jìn)行，也便于在進(jìn)行過(guò)程中檢查執(zhí)行情況，保證試驗(yàn)任務(wù)的完成。田間試驗(yàn)設(shè)計(jì)的主要目的是減少試驗(yàn)誤差，提高試驗(yàn)的精確度，使試驗(yàn)人員能從試驗(yàn)結(jié)果中獲得無(wú)偏差的處理平均值及試驗(yàn)誤差的估計(jì)值，從而能進(jìn)行正確而有效的比較。在藥效試驗(yàn)中要減少試驗(yàn)誤差，就必須對(duì)試驗(yàn)誤差來(lái)源，通過(guò)試驗(yàn)設(shè)計(jì)加以克服。在試驗(yàn)過(guò)程中如何減少試驗(yàn)誤差應(yīng)注意以下幾個(gè)方面：

1.試驗(yàn)地的選擇

選擇有代表性的試驗(yàn)地是使土壤差異減少至最少限度的一個(gè)重要措施，對(duì)提高試驗(yàn)準(zhǔn)確度有很大作用。選擇試驗(yàn)地要考慮到：a、試驗(yàn)地的地勢(shì)應(yīng)平坦，肥力水平均勻一致。b、試驗(yàn)地的作物生長(zhǎng)整齊、樹(shù)勢(shì)一致，而且防治對(duì)象常年發(fā)生較重且為害程度比較均勻，且每小區(qū)的害蟲(chóng)蟲(chóng)口密度和病害的發(fā)病情況大致相同。特別是殺菌劑試驗(yàn)，要選擇高度感染供試對(duì)象病害的品種進(jìn)行試驗(yàn)。c、試驗(yàn)地的田間管理水平相對(duì)一致，并符合當(dāng)?shù)氐膶?shí)際情況。d、試驗(yàn)地應(yīng)選擇離房屋、道路、水塘稍遠(yuǎn)的開(kāi)闊農(nóng)田，以保證人、畜安全和免受外來(lái)因素的偶然影響。e、試驗(yàn)地周?chē)詈梅N植相同的作物，以免試驗(yàn)地孤立而易遭受其它因素為害。2.試驗(yàn)藥劑處理供試農(nóng)藥和對(duì)照農(nóng)藥的劑型和含量要合乎規(guī)格，無(wú)變質(zhì)、失效現(xiàn)象，并有詳細(xì)的標(biāo)簽和說(shuō)明書(shū)，標(biāo)明生產(chǎn)廠家、出廠日期等。評(píng)價(jià)一種農(nóng)藥產(chǎn)品不同劑量的藥效試驗(yàn)，至少要有供試產(chǎn)品的3個(gè)濃度梯度、1個(gè)常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥的常用濃度和1個(gè)空白對(duì)照等5個(gè)處理。如供試的農(nóng)藥產(chǎn)品是混配制劑，而且各個(gè)單劑已登記過(guò)，除設(shè)混劑本身3個(gè)濃度梯度和1個(gè)空白對(duì)照外，還應(yīng)設(shè)混劑中各個(gè)單劑的常規(guī)處理濃度，共6個(gè)處理。3.設(shè)置重復(fù)次數(shù)

試驗(yàn)設(shè)置重復(fù)次數(shù)越多，試驗(yàn)誤差越少。但在實(shí)際應(yīng)用中，并不是重復(fù)次數(shù)越多就越好。因?yàn)槎嘤谝欢ǖ闹貜?fù)次數(shù)，誤差的減少很慢，而人力、物力的花費(fèi)也大大增加，是不值得的。重復(fù)次數(shù)的多少，一般應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)所要求的精確度、試驗(yàn)地土壤差異的大小、供試作物的數(shù)量、試驗(yàn)地面積、小區(qū)的大小等具體決定。對(duì)試驗(yàn)精確度要求高、試驗(yàn)地土壤差異大、小區(qū)面積小的試驗(yàn)，重復(fù)次數(shù)可多些，否則可少些。通常情況下，要求把試驗(yàn)誤差的自由度控制在10以上，即（處理數(shù)-1）*（重復(fù)數(shù)-1）>10。一般每個(gè)處理的重復(fù)次數(shù)以3-5次為宜。大區(qū)試驗(yàn)和大面積示范可不設(shè)重復(fù)。4.采用隨機(jī)區(qū)組排列

為使各種偶然因素作用于每小區(qū)機(jī)會(huì)均等，那么在每重復(fù)內(nèi)設(shè)置的各種處理只有用“隨機(jī)排列”才能符合這種要求，反映實(shí)際誤差。例如某種藥劑藥效好壞究竟是由于其所在小區(qū)病、蟲(chóng)密度不均勻，還是藥劑本身的原因，就不容易判別了。為了解決這一問(wèn)題，可將試驗(yàn)地按重復(fù)次數(shù)劃分為數(shù)量相同的區(qū)組（即重復(fù)），再將每一區(qū)組按處理數(shù)目劃分小區(qū)（包含藥劑處理和對(duì)照區(qū)），然后將每種藥劑在區(qū)組中隨機(jī)排列，即每種藥劑在區(qū)組中僅出現(xiàn)一次。用隨機(jī)區(qū)組和重復(fù)組合，試驗(yàn)就能提供無(wú)偏的試驗(yàn)誤差估計(jì)值。5.小區(qū)面積與形狀

小區(qū)面積的大小和形狀對(duì)于減少土壤差異的影響和提高試驗(yàn)的精確度是相當(dāng)重要的。小區(qū)面積的大小，應(yīng)根據(jù)土壤條件、作物種類(lèi)、病蟲(chóng)草害的生物學(xué)特性和試驗(yàn)?zāi)康亩?。一般要求：a、差異較大的田塊，小區(qū)面積宜大一些。b、凡植株高大、株行距較大的作物，單位面積上株數(shù)較少的作物，種植密度小的作物小區(qū)面積可大些，反之可小些。c、活動(dòng)性強(qiáng)的害蟲(chóng)，小區(qū)面積宜大些；活動(dòng)性較差的如蚜蟲(chóng)等，小區(qū)面積可小些。d、測(cè)產(chǎn)的試驗(yàn)，小區(qū)面積宜大些，否則可小些。e、田間藥效試驗(yàn)的小區(qū)面積一般為15-50m2，果樹(shù)每小區(qū)不少于3株。產(chǎn)量試驗(yàn)至少為25m2。小區(qū)的形狀一般以長(zhǎng)方形尤其是狹長(zhǎng)形為好，采用狹長(zhǎng)小區(qū)能較全面地包括不同肥力的土壤，相應(yīng)減少小區(qū)間的土壤差異，提高精確度，其試