動物冠狀病毒的研究進展,動物學(xué)論文

動物冠狀病毒的研究進展,動物學(xué)論文內(nèi)容摘要：冠狀病毒(Coronavirus)在自然界中普遍存在,其宿主廣泛,可感染哺乳動物和鳥類,是一種嚴(yán)重危害人類健康和畜牧業(yè)發(fā)展的病原微生物。本文主要介紹了已經(jīng)知道動物冠狀病毒的分類、基因組構(gòu)造、常見的幾種動物冠狀病毒及其診斷與防治技術(shù),并對動物冠狀病毒與最新發(fā)現(xiàn)的新型冠狀病毒SARS-CoV-2進行了比擬,旨在更好的了解和認(rèn)識冠狀病毒及其危害,為防控冠狀病毒引起的相關(guān)感染提供借鑒。本文關(guān)鍵詞語：動物冠狀病毒,SARS-CoV-2,動物學(xué),防治冠狀病毒在分類上屬于冠狀病毒科，冠狀病毒屬，是一種有囊膜的單股正鏈RNA病毒，因其囊膜外表纖突規(guī)則地排列成皇冠狀，故被命名為冠狀病毒。冠狀病毒〔Coronavirus〕在自然界中廣泛存在，且極易發(fā)生基因重組和變異，導(dǎo)致新亞型或新的冠狀病毒不斷出現(xiàn)，危害極大。2022年底我們國家武漢多人出現(xiàn)不明原因肺炎，2020年1月疫情大規(guī)模爆發(fā)，當(dāng)前肺炎疫情已蔓延至全球多個國家和地區(qū)，引起各界廣泛關(guān)注。經(jīng)測序鑒定發(fā)現(xiàn)引起肺炎的病原是一種新型的能感染人的冠狀病毒，WHO在2020年2月11日將本次新型冠狀病毒感染引起的肺炎命名為COVID-19(CoronaVirusDisease2022〕；同時，國際病毒分類委員會將新型冠狀病毒命名為SARS-CoV-2(SevereAcuteRespiratorySyndromeCoronavirus2〕?？v觀整個冠狀病毒家族，其宿主廣泛，主要感染哺乳動物和鳥類，動物為冠狀病毒及其重組提供了持久的源泉；對病毒起源進行分析不難發(fā)現(xiàn)，很多新病毒其實是舊病毒打破了物種屏障，從一種動物感染到另一種動物，擁有了跨物種傳播的能力。針對當(dāng)前SARS-CoV-2流行的形勢，本文主要對動物冠狀病毒的分類、基因組構(gòu)造、常見的動物冠狀病毒及其診斷與防治方面進行綜述，并對人與動物冠狀病毒的特征進行扼要比擬，旨在更好的認(rèn)識和了解動物冠狀病毒與新型SARS-CoV-2。1冠狀病毒的分類根據(jù)遺傳特性和血清學(xué)的差異，可將冠狀病毒進一步分成四類：冠狀病毒〔-CoVs〕、冠狀病毒〔-CoVs〕、冠狀病毒〔-CoVs〕和冠狀病毒〔-CoVs〕。和冠狀病毒主要宿主為哺乳動物，華而不實，-CoVs主要包括人冠狀病毒229E(HCoV-229E〕、人冠狀病毒NL63(HCoV-NL63〕、豬傳染性胃腸炎病毒〔TGEV〕、豬流行性腹瀉冠狀病毒〔PEDV〕、犬冠狀病毒〔Caninecoronavirus,CCoV〕和貓冠狀病毒〔FeCoV〕等。冠狀病毒主要包括人冠狀病毒HKU1(HCoV-HKU1〕、人冠狀病毒OC43(HCoV-OC43〕、嚴(yán)重急性呼吸綜合征病毒〔SARS-CoV〕、中東呼吸綜合征相關(guān)冠狀病毒〔MERS-CoV〕、鼠肝炎病毒〔MHV〕、豬血凝性腦脊髓炎病毒〔PHEV〕等。冠狀病毒主要宿主是鳥類，主要包括禽傳染性支氣管炎病毒〔IBV〕和火雞藍冠病病毒〔TCoV〕等。冠狀病毒主要感染哺乳動物和鳥類，主要包括豬冠狀病毒〔PDCoV〕、亞洲豹貓冠狀病毒〔ALCCoV〕、野鴨冠狀病毒〔WiCoV〕、鵝口瘡冠狀病毒〔ThCoV〕和麻雀冠狀病毒〔SPCoV〕等。大部分冠狀病毒只對禽畜有致病性，能感染人的冠狀病毒主要集中在和屬，華而不實又以屬對人的危害最大，最近爆發(fā)的SARS-CoV-2也屬于屬冠狀病毒。2基因組構(gòu)造冠狀病毒是當(dāng)前發(fā)現(xiàn)的所有RNA病毒中基因組最大的病毒，大小在27-32kb之間。整個冠狀病毒家族的構(gòu)造類似，其基因組5端含有一個甲基化帽構(gòu)造，3端含有一個polyA尾。在基因組5端包含一個復(fù)制酶基因ORF1ab，約占整個基因組的2/3，主要編碼病毒的非構(gòu)造蛋白〔nsp〕；其余1/3靠近3端的基因主要編碼病毒的構(gòu)造蛋白。冠狀病毒基因組被包裹在由核衣殼蛋白〔nucleocapsidprotein,N〕構(gòu)成的螺旋衣殼內(nèi)，其外進一步被囊膜包裝呈球狀，外表有規(guī)則排列的纖突。囊膜由至少3種構(gòu)造蛋白組成：纖突蛋白〔Spike,S〕、膜蛋白〔Membrane,M〕和包膜蛋白〔Envelop,E〕。S、M、E和N蛋白是產(chǎn)生一個完好病毒粒子構(gòu)造所必須的四個病毒蛋白。另外還有一些屬冠狀病毒編碼一種與包膜相關(guān)的構(gòu)造蛋白血凝素酯酶蛋白〔hemagglutinin-esteraseprotein,HE〕?；蚪M構(gòu)造的差異是冠狀病毒分成不同類群的根據(jù)，針對差異的基因構(gòu)造設(shè)計檢測試劑盒能夠有效的鑒別不同的冠狀病毒，例如當(dāng)前獲批的SARS-CoV-2檢測試劑盒是針對特異性較高的ORF1ab、N蛋白和E蛋白區(qū)域設(shè)計的。2.1纖突蛋白〔S)S蛋白是冠狀病毒構(gòu)造蛋白中最大的蛋白，是一種伸出病毒囊膜16-21nm的球棒狀跨膜糖蛋白[1]，主要作用是介導(dǎo)冠狀病毒附著在宿主細胞外表受體上，使病毒和宿主細胞膜發(fā)生融合，促進病毒進入宿主細胞。S蛋白構(gòu)造主要包括S1和S2兩個亞基，S1主要介入病毒對宿主細胞的辨別，S2主要負(fù)責(zé)介導(dǎo)膜融合。固然S2亞基不主要介入與宿主細胞受體的結(jié)合，但S1和S2之間的互相作用可能協(xié)同決定病毒對宿主的嗜性[2,3]。蝙蝠冠狀病毒HKU4與MERS-CoV的S蛋白能與人的細胞外表受體DPP4結(jié)合，但由于HKU4不能被人的相關(guān)蛋白酶激活，因而不能進入細胞質(zhì)內(nèi)；而MERS-CoV的S蛋白相對于HKU4包含兩個突變，使其能被人的蛋白酶酶切，進而進入細胞；這種差異被以為可能是導(dǎo)致MERS-CoV成為人畜共患病的原因之一[4]。另外有人發(fā)現(xiàn)PEDV、TGEV、IBV、CCoV等多種冠狀病毒S1蛋白的表示出能夠誘導(dǎo)細胞凋亡信號，導(dǎo)致細胞死亡[5]。這表示清楚S1蛋白是阻斷冠狀病毒釋放和傳播的一個潛在靶點。2.2膜蛋白〔M)M蛋白是一種跨膜蛋白，在病毒粒子中含量最豐富，決定了病毒包膜的形狀。它在CoV組裝中扮演著的中心組織者的角色，與其它主要的構(gòu)造蛋白互相作用。M蛋白之間的互相作用是構(gòu)成包膜的主要驅(qū)動力，但僅靠M-M的作用力缺乏以構(gòu)成病毒粒子[6];M蛋白與S蛋白之間的互相作用對于病毒粒子的組裝并不是必須的，但對S蛋白運輸?shù)郊毎麅?nèi)質(zhì)網(wǎng)-高爾基體中間體〔ERGIC〕并摻入到新病毒中非常關(guān)鍵[7];M蛋白與N蛋白互相作用使核衣殼以及病毒粒子內(nèi)部構(gòu)造穩(wěn)定，并促進了病毒的組裝[7,8];M蛋白和E蛋白共同構(gòu)成病毒包膜，它們的互相作用促進了病毒樣顆?！睼LPs〕的產(chǎn)生和釋放[9]。一般以為，病毒與細胞的互相作用是由S蛋白介導(dǎo)的，但最近的一項研究顯示，M蛋白在病毒早期感染入侵細胞階段也發(fā)揮著重要作用：HCoV-NL63可通過M蛋白介導(dǎo)與粘附因子硫酸乙酰肝素蛋白多糖的互相作用入侵細胞，并且這種作用不依靠S蛋白[10]。2.3核衣殼蛋白〔N)N蛋白是一種磷酸化蛋白，主要作用是與病毒基因組結(jié)合構(gòu)成核衣殼，保衛(wèi)基因組以確保病毒及時進行復(fù)制和擴散。在病毒組裝經(jīng)過中，N蛋白與M膜蛋白互相作用，對提高病毒在宿主中的轉(zhuǎn)錄和組裝效率有重要作用。除此之外，N蛋白還通過病毒基因組5和3末端互相作用介入基因組環(huán)化和負(fù)鏈RNA的合成經(jīng)過[11]。氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，N蛋白具有三個不同的高度保守的構(gòu)造域：N末端構(gòu)造域〔NTD/domain1〕、C末端構(gòu)造域〔CTD/domain3〕以及一個無序的連接區(qū)域〔linkerregion,LKR〕。有研究對IBV的N蛋白進行定點突變，發(fā)現(xiàn)NTD在RNA結(jié)合和病毒感染細胞經(jīng)過中至關(guān)重要[12];CTD在、和屬冠狀病毒中的序列都較保守，這講明該構(gòu)造域在不同冠狀病毒的構(gòu)造和功能上存在共性[13]。LKR將NTD和CTD分隔開，因其富含絲氨酸和精氨酸殘基所以又被稱為SR構(gòu)造域〔SR-domain〕，該構(gòu)造域主要介入了細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及RNA結(jié)合經(jīng)過[14]。2.4包膜蛋白〔E)E蛋白是病毒包膜的組成成分，在病毒粒子中含量較少，在復(fù)制周期中，E蛋白在宿主細胞內(nèi)大量表示出，但最終只要小部分被整合到病毒包膜中[15]。E蛋白在細胞內(nèi)主要定位到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和ERGIC，介入CoV組裝和出芽[16]。有研究表示清楚，缺乏E蛋白的重組冠狀病毒病毒滴度顯著降低、病毒成熟經(jīng)過遭到阻礙，這講明E蛋白在病毒構(gòu)成和成熟經(jīng)過中起著重要作用[17,18]。2.5血凝素酯酶蛋白〔HE)在一些冠狀病毒中還存在著另一種構(gòu)造蛋白血凝素酯酶蛋白，分子量大小為120kD-140kD。氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，冠狀病毒HE蛋白與丙型流感同源，因而揣測冠狀病毒的HE蛋白是由基因組與丙型流感重組產(chǎn)生。當(dāng)前對HE蛋白的研究較少，主要以為其在病毒吸附宿主細胞經(jīng)過中起作用。HE蛋白作為血凝素能結(jié)合細胞外表的唾液酸，且具有乙酰酯酶活性，被以為能夠促進S蛋白介導(dǎo)的病毒入侵和傳播經(jīng)過[19]。3幾種重要的動物冠狀病毒動物冠狀病毒的主要宿主是與人類生活息息相關(guān)的經(jīng)濟動物，包括豬、雞、鴨、牛等，以及常見的寵物品種貓、狗等，因而了解動物冠狀病毒的流行情況和基本特性有助于相關(guān)防控工作的開展，對人類生活健康發(fā)展有著積極意義。當(dāng)前發(fā)現(xiàn)的動物冠狀病毒存在較多重組變異，但一般都只對本自然宿主有致病性，對人不致病，且較少出現(xiàn)跨物種傳播情況。3.1傳染性支氣管炎病毒〔IBV)冠狀病毒最早于1937年由Beaudetie和Hadson在雞身上分離出來，他們成功在雞胚中培養(yǎng)了IBV。隨后在加拿大、英國、意大利、比利時日本和印度等國家和地區(qū)都出現(xiàn)了IBV感染病例，對養(yǎng)雞業(yè)造成了很大的損失；我們國家最早于1972年初次報道在廣東分離出IBV毒株。在20世紀(jì)80年代前，由于使用了Mass型疫苗，我們國家對于IBV的防控效果比擬理想，但在90年代后新基因型的IBV毒株不斷出現(xiàn)，華而不實QX型毒株流行較為廣泛。對我們國家西南地區(qū)8株QX型IBV進行序列分析發(fā)現(xiàn)，8株IBV存在抗原變異和致病性差異[20]。IBV只感染禽類，雞是IBV的主要自然宿主。感染IBV后會導(dǎo)致雞傳染性支氣管炎〔IB),1～4周齡的幼雞極易感染且死亡高，感染IBV的雛雞死亡率一般在25%到30%之間，但由于宿主、病毒或環(huán)境等因素的影響，死亡率可能會增加到80%；隨著雞年齡的增長，對IBV的抵抗力會逐步加強。IB一年四季流行，在冬春季節(jié)感染較為嚴(yán)重；有研究表示清楚，大部分IBV毒株在56℃、15分鐘或45℃、90分鐘條件下會失去感染力，在-30℃環(huán)境下可保持多年活性。3.2豬傳染性胃腸炎病毒〔TGEV)TGEV最早于1946年在美國被報道并分離，隨后歐亞多國都相繼報道了TGEV的流行情況，而我們國家則是在1958年初次發(fā)現(xiàn)該病。當(dāng)前TGEV已經(jīng)成為全球性的豬群傳染疾病，因其對養(yǎng)豬業(yè)造成極大危害，被世界動物衛(wèi)生組織列入了B類傳染病。1999年許井君等[21]人對大慶地區(qū)某豬場的TGEV流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該病呈流行性發(fā)生，且?guī)缀跛胸i都發(fā)病，10日齡以內(nèi)的仔豬死亡率極高，可達100%。賀會利等[22]人調(diào)查了2021-2021年廣西地區(qū)規(guī)?；i場主要病毒性傳染病的流行情況，發(fā)現(xiàn)TGEV的陽性率為10.87%，且近三年感染率呈現(xiàn)上升趨勢。TGEV主要感染不同日齡和品種的豬，患病豬主要異常感覺和狀態(tài)為嘔吐、腹瀉和脫水，2周齡以內(nèi)的仔豬發(fā)病率和死亡率較高，同時也能感染貓、狗、狐貍等動物但不致??；感染后存活超過6至8天的仔豬能夠恢復(fù)，但經(jīng)常出現(xiàn)發(fā)育不良的情況，且這些恢復(fù)的豬能夠?qū)GE傳播到未感染的豬身上數(shù)周[23]。豬傳染性胃炎〔TGE〕的發(fā)生和流行有明顯的季節(jié)性特征，每年11月至次年4月發(fā)病率最高，夏季發(fā)病較少，這可能與TGEV不耐熱但低溫條件下較穩(wěn)定的理化特性有關(guān)。3.3豬流行性腹瀉病毒〔PEDV)當(dāng)前對養(yǎng)豬業(yè)影響較大的冠狀病毒病主要是PEDV和TGEV，十分是PEDV近年來在亞洲和歐美都造成了宏大的經(jīng)濟損失，2020-2021年美國每年因PEDV造成的損失為9-18億美元。事實上，PEDV早在1978年就已經(jīng)被鑒定出來，但之后幾十年相關(guān)的病情逐步減少。然而2018年P(guān)EDV又卷土重來，我們國家出現(xiàn)了PEDV的變異株并迅速在全國流行，所有年齡段的豬都遭到PEDV的損害，80%-100%的仔豬發(fā)病并造成了50%-90%的死亡率，對我們國家養(yǎng)豬業(yè)造成了宏大打擊[24]。近年來的數(shù)據(jù)顯示，PEDV也是我們國家豬腹瀉病的主要病因。當(dāng)前，PEDV基因II型中的高致病性流行變異株是我們國家優(yōu)勢毒株，而基因I型，如SD-M、AH-M、SQ2020和SC1402毒株出現(xiàn)較少[25]。感染PEDV的豬群可導(dǎo)致豬流行性腹瀉〔PED〕，其臨床異常感覺和狀態(tài)與TGE類似，但PED在豬群中的傳播速度較慢，一般在4-5周內(nèi)傳遍整個豬場?；疾∽胸i異常感覺和狀態(tài)較嚴(yán)重且死亡率高，而成年豬大多無異常感覺和狀態(tài)。PED的流行也有一定的季節(jié)性特征，其多發(fā)生在冬季，夏季也有一些報道。3.4豬冠狀病毒〔PDCoV)PDCoV是2020年發(fā)現(xiàn)的一種新型動物冠狀病毒，由Woo等人在香港發(fā)現(xiàn)。后續(xù)有研究收集了2007-2018年的豬臨床樣品，發(fā)現(xiàn)PDCoV的陽性率為10.1%[26]。在2004年的一份豬腹瀉樣品中檢測到了PDCoV的病毒RNA[27]，這些證據(jù)講明PDCoV在我們發(fā)現(xiàn)之前就已經(jīng)在豬群中存在了很長一段時間。2020年，美國俄亥俄州爆發(fā)了大規(guī)模的仔豬腹瀉，造成了很大的經(jīng)濟損失，經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)主要是由PDCoV引起；同年，韓國和加拿大也初次在豬群中檢測到了PDCoV。當(dāng)前，PDCoV已經(jīng)蔓延至世界多個國家和地區(qū)，對養(yǎng)殖業(yè)造成了極大的危害。PDCoV主要感染各年齡段的豬，但在體外具有感染廣泛物種來源細胞系的能力，可在雞和小牛中增殖，另外在自然條件下，Egberink等人檢測了137份貓血清，發(fā)現(xiàn)有2份樣品呈PDCoV陽性[28]。與PEDV感染類似，PDCoV感染也會引起嚴(yán)重急性萎縮性腸炎，并伴有短時的病毒血癥，導(dǎo)致豬群嚴(yán)重腹瀉或嘔吐，由此引起的脫水是哺乳仔豬的潛在死亡原因。宋亞兵等[29]人對春夏秋冬四季共420份豬腹瀉樣品進行檢測，發(fā)現(xiàn)冬春兩季PDCoV的陽性檢出率較高，由此揣測這兩個季節(jié)是這一傳染病的高發(fā)季節(jié)。3.5豬腸道a冠狀病毒〔PEAV)近年來，新型動物冠狀病毒不斷出如今人們的視野中，2021年在我們國家廣東某豬場又發(fā)現(xiàn)了一種新的冠狀病毒豬腸道冠狀病毒〔PEAV)[30]，感染該病毒的新生仔豬出現(xiàn)水樣腹瀉、嘔吐、脫水等異常感覺和狀態(tài)，5日齡下面仔豬死亡率高達90%，但8日齡以上仔豬死亡率降至5%[31]。張帆帆等[25]人收集了廣東、福建、江西、湖南、浙江2020-2021年的豬腹瀉樣本，發(fā)現(xiàn)僅在福建省2021年的樣本中檢測到了PEAV，陽性率為10.29%。對PEAV的序列進行分析，發(fā)現(xiàn)這種新型病毒與蝙蝠腸道冠狀病毒HKU2的核苷酸同源性約為95%，但不與TGEV、PEDV和PDCoV產(chǎn)生抗體穿插反響。有研究通過Bayesian分析了PEAV的起源和進化歷史，揣測PEAV出如今約90年前，可能在豬群中已經(jīng)存在了幾十年[32]。PEAV與PEDV類似，兩者都能引起新生仔豬腹瀉異常感覺和狀態(tài)并導(dǎo)致死亡，但PEAV臨床發(fā)病時間較PEDV晚，死亡率稍低。3.6犬冠狀病毒〔CCoV)CCoV是引起犬冠狀病毒病的主要病原，犬作為人類最普遍的寵物種類之一，與人密切接觸，因而研究CCoV對公共衛(wèi)生健康有著重要的意義。CCoV最早由Binn等人于1974年初次報道，隨后多個國家和地區(qū)都相繼報道了該病毒的流行，我們國家則是在1985年由徐漢坤等人初次報道了CCoV的流行。根據(jù)S蛋白的氨基酸序列以及能否存在特異的ORF-3基因，CCoV分進一步為Ⅰ型〔CCoV-Ⅰ〕和Ⅱ型〔CCoV-Ⅱ〕，不同地區(qū)兩種血清型的流行情況不同，當(dāng)前CCoV-Ⅱ是大部分地區(qū)的主要流行基因型，少部分地區(qū)流行CCoV-Ⅰ。Tomomi等人收集了日本2018年至2020年間101只犬的直腸拭子樣本，發(fā)現(xiàn)CCoV感染犬標(biāo)本中CCoV-Ⅰ和CCoV-Ⅱ的檢出率分別為88.9%和7.4%[33]。在我們國家，CCoV-Ⅱ是主要流行基因型，王玉燕等人采集了2003至2004年81份健康犬的糞便樣本，沒有檢測出CCoV-Ⅰ，CCoV-Ⅱ的檢出率為86.4%[34];wang等人對東北地區(qū)2020至2021年的201份犬腹瀉糞便進行檢測，結(jié)果顯示CCoV的陽性率為28.36%，陽性樣本中CCoV-Ⅰ和CCoV-Ⅱ分別占15.79%和84.21%[35]。CCoV的宿主范圍較廣，除了能夠感染不同年齡品種的犬以外，還能感染豬、貓、大熊貓等動物。研究表示清楚，在遺傳學(xué)上CCoV-Ⅰ與FeCoV聯(lián)絡(luò)密切，而CCoV-Ⅱ則與TGEV的序列類似度高。感染CCoV的犬主要異常感覺和狀態(tài)為急性胃腸炎，臨床表現(xiàn)主要是嘔吐、腹瀉、厭食等，對我們國家養(yǎng)犬業(yè)危害較大。CCoV一年四季均可發(fā)生和流行，夏季相對少發(fā)。4診斷與防治動物冠狀病毒對我們國家畜禽業(yè)發(fā)展危害極大，動物感染病毒后主要引起不同嚴(yán)重程度的呼吸道、胃腸道、肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)等疾病[36]，嚴(yán)重?fù)p害經(jīng)濟動物的生產(chǎn)效率；且由于易重組變異以及常潛伏于動物體的特點，動物冠狀病毒在一定程度上威脅著人類的健康發(fā)展，因而，做好對動物冠狀病毒的診斷和防控是非常必要的。在診斷病原方面，一般先根據(jù)疾病的流行特點以及患病動物的臨床異常感覺和狀態(tài)進行初步診斷，但部分冠狀病毒，如TGEV、PEDV和PDCoV等豬腸道冠狀病毒感染引起的臨床異常感覺和狀態(tài)非常類似且存在混合感染，因而需要進行進一步的實驗室檢測對病毒進行鑒定。動物冠狀病毒實驗室檢測方式方法主要采用抗原檢測和抗體檢測相結(jié)合的方式方法。傳統(tǒng)抗原檢測方式方法是將待檢病毒分離出來后在細胞中進行培養(yǎng)，通過觀察細胞生長狀況判定病毒種類，診斷疾病；但是這種方式方法耗時長效率不高，加上部分冠狀病毒分離困難，可能會延誤疾病的防控，因而還需要結(jié)合其他方式方法進行檢測。有條件的實驗室能夠使用電鏡直接觀察病毒粒子形態(tài)進行判定，這種方式方法較為便捷快速，但由于待檢樣品中可能存在和冠狀病毒類似的粒子，因而需要進一步進行免疫電鏡檢測；另外若樣品中的病毒粒子含量較少也會影響電鏡觀察的檢出率。血清學(xué)檢測主要包括病毒中和試驗和間接酶聯(lián)免疫吸附試驗〔ELISA〕方式方法。前者主要利用已經(jīng)知道特異性抗體檢測未知病毒，能較快速檢出病原體且能區(qū)分病毒的血清型，但缺點是抗體較昂貴，不利于較大規(guī)模的診斷工作；而ELISA方式方法相對經(jīng)濟成本低，且操作簡便，反響更靈敏，更適用于現(xiàn)場檢測以及疫苗接種或接觸后監(jiān)測抗體反響。另外，近年來分子生物學(xué)發(fā)展迅速，分子檢測技術(shù)也在動物冠狀病毒診斷中得到應(yīng)用。常用分子檢測方式方法有RT-PCR、巢式RT-PCR、實時熒光定量PCR、限制性片段長度多態(tài)性〔RFLP〕和基因組測序等，由于該技術(shù)高靈敏度和高時效的特點，這種方式方法幾乎取代了傳統(tǒng)血清學(xué)和病毒培養(yǎng)方式方法。但是若病毒RNA難以提取或已經(jīng)降解時，就需要使用血清學(xué)檢測進行診斷。在動物冠狀病毒病的治療方面，當(dāng)前市面上的藥物療效有限。新的藥物開發(fā)主要基于下面幾個方向：阻斷病毒入侵宿主細胞、抑制病毒在宿主細胞內(nèi)的增殖以及提高宿主的抗病毒能力等。Sirin等人針對FIPV的3CL蛋白酶研發(fā)了幾種化合物，發(fā)現(xiàn)化合物毛殼色菌素，粘酸和stubomycin具有抗病毒活性，抑制了FIPV的復(fù)制[37]。干擾素是機體抵抗病毒產(chǎn)生天然免疫反響中重要的調(diào)節(jié)因子，具有廣譜抗病毒和免疫調(diào)節(jié)的作用。趙永旭等人在初生仔豬臨床防治的實驗中發(fā)現(xiàn)，口服rIFN-對PED有較好的防治效果，仔豬存活率達50%-70%，母豬和仔豬聯(lián)合使用優(yōu)于單獨使用，但是對嚴(yán)重病例的治療效果不佳[38]。另外還有一些RNA干擾劑、蛋白抑制劑、自噬誘導(dǎo)劑等也是抗冠狀病毒藥物研究的熱門，將來相信會有更多的作用靶點被發(fā)現(xiàn)。另一方面，考慮到動物冠狀病毒感染情況和致病性的特點以及經(jīng)濟動物效益的因素，當(dāng)前對這種病毒的控制是以防為主，防大于治。疫苗接種是預(yù)防和控制動物冠狀病毒病最為有效的手段。當(dāng)前的疫苗主要包括滅活疫苗、弱毒疫苗和基因工程疫苗等，前兩者是當(dāng)下應(yīng)用最廣泛的兩種。滅活苗相對安全但免疫效果較差；而弱毒苗免疫原性好，免疫時期長，一般以為弱毒疫苗是針對冠狀病毒最有效的疫苗。然而弱毒苗也存在一些安全問題，比方毒力返強和散毒的風(fēng)險。有研究表示清楚，針對FIPV接種S蛋白疫苗會使病情加重[39]。另外，基因重組的傾向性可能使病毒在野外的進化和多樣性增加。為了減少重組的可能性，疫苗研發(fā)策略在不斷改良。有人提出對病毒非構(gòu)造蛋白nsp1和E蛋白進行大量突變，重新排列基因組的3端，修改轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列，或者使用突變率高的突變毒株來顯著降低病毒毒力[7]。除此之外，加強動物飼養(yǎng)管理也是做好冠狀病毒防控工作的重要一環(huán)。例如對畜禽進行合理密度養(yǎng)殖，及時清理糞便或其他污染物，對使用的器械水源等進行規(guī)律性殺菌或消毒，保持養(yǎng)殖環(huán)境的干凈、通風(fēng)、整潔，對出現(xiàn)患病或死亡的動物及時隔離或撲滅；這些措施都能有效降低病毒感染率。5SARS-CoV-2與動物冠狀病毒2020年1月30日，WHO公布將新型冠狀病毒肺炎疫情列入國際關(guān)注的突發(fā)公共衛(wèi)生事件。截止2020年2月26日，本次SARS-CoV-2疫情已經(jīng)在全球范圍內(nèi)造成7萬多人感染，超過2700人死亡〔編者注：截止2020年3月28日，全球確診感染累計超過65萬人，死亡人數(shù)超過3萬，約一個月時間增加了將近10倍〕，嚴(yán)重威脅全球公共衛(wèi)生健康。對于SARS-CoV-2的來源，由于其引起的肺炎異常感覺和狀態(tài)與SARS-CoV類似，因而最初人們將兩者進行了比擬。當(dāng)前的相關(guān)研究結(jié)果顯示，SARS-CoV-2與SARS-CoV的基因組類似度約為79.5%[40]，兩者都屬于SARS相關(guān)冠狀病毒，但SARS-CoV-2與SARS-CoV是兩個不同的病毒，SARS-CoV-2不是由SARS-CoV的進化或者變異而來，他們是屬于平行的關(guān)系；在病毒的傳播能力上SARS-CoV-2比SARS-CoV強，但毒力與SARS-CoV相比擬弱。除了研究與SARS-CoV的類似度，科研人員在SARS-CoV-2與其他動物冠狀病毒的親緣關(guān)系上也做了一些研究：王楷宬等人基于冠狀病毒的1ab基因保守區(qū)域?qū)ARS-CoV-2與已經(jīng)知道的禽源冠狀病毒的親緣關(guān)系進行研究，發(fā)現(xiàn)兩者的親緣關(guān)系較遠，可初步排除SARS-CoV-2來源于家禽冠狀病毒的可能[41]；中國動物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心對SARS-CoV-2與同為冠狀病毒屬的豬源冠狀病毒PHEV進行了基于全基因組的遺傳進化分析，結(jié)果表示清楚兩者的核苷酸同源性僅為54%[42]；另外，本實驗室對SARS-CoV-2與PEDV＿CV777、PEAV＿GDS04＿P12、PDCoV/CHGD/2021、TGEV＿Miller＿M6等豬源冠狀病毒的序列進行分析，發(fā)現(xiàn)兩者的基因組類似度在66.6%-68.6%，與CCoV＿CB/05的序列進行比對，類似度為68.5%，講明這些冠狀病毒與SARS-CoV-2的親緣關(guān)系都較遠，因而可以初步排除SARS-CoV-2來源于豬或犬冠狀病毒的可能。中科院武漢病毒研究所等團隊對SARS-CoV-2與其他蝙蝠冠狀病毒的序列進行了分析，發(fā)現(xiàn)SARS-CoV-2與蝙蝠冠狀病毒RaTG13的全基因組序列高度類似，其一致性為96.2%[40]；而在另一項溯源研究中也顯示SARS-CoV-2與蝙蝠SARS-likeCoV平行進化，且相比于SARS-CoV,SARS-CoV-2與蝙蝠冠狀病毒存在著更密切的親緣關(guān)系[43]。當(dāng)前的溯源工作還在進行中。由于武漢早期的肺炎患者大部分有華南海鮮市場接觸史，相關(guān)人員對該地區(qū)的585份樣本進行了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有33份樣品是SARS-CoV-2核酸陽性，且93.9%的陽性樣本來自存在野生動物交易的綜合市場區(qū)，因而起初揣測本次SARS-CoV-2很可能來源于野生動物。然而，中國科學(xué)院西雙版納熱帶植物園在ChinaXiv預(yù)發(fā)布平臺發(fā)表了一篇題為Decodingevolutionandtransmissionsofnovelpneumoniacoronavirususingthewholegenomicdata的研究論文〔http：///abs/202002.00033〕，其結(jié)果顯示華南海鮮市場并非病毒的起源地，SARS-CoV-2可能是其它地方傳入，這一結(jié)果為尋找病毒的來源以及其可能的中間宿主提供了新的思路。6瞻望近年來，不斷有新亞型或新的冠狀病毒出如今公眾視野中，并且常伴隨較大范圍的病情危害。當(dāng)下SARS-COV-2肺炎疫情已經(jīng)嚴(yán)重危害到中國乃至世界的發(fā)展，造成了宏大的損失。相關(guān)的溯源研究顯示該病毒可能來源于動物或潛伏在動物體內(nèi)，這使人們開場重新評估其他動物冠狀病毒對人類的潛在危害性。事實上，當(dāng)前的研究顯示人類生活中常見動物冠狀病毒對人類健康的危害不大，不必過于擔(dān)憂；而對于極有可能是SARS-CoV-2宿主的野生動物，人們則應(yīng)該避免接觸。另一方面，由于動物在冠狀病毒傳播經(jīng)過中是華而不實一個極其重要的生物條件，因而在相關(guān)疾病防控中動物是重點措施對象。做好動物冠狀病毒的防控工作不僅僅是畜禽業(yè)正常發(fā)展的保證，也是維護人類健康的需要。隨著各種生物技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用，我們對冠狀病毒各方面的情況都有了更深一步的認(rèn)識，這讓我們能夠更好的了解其致病機理并制定出有效的治療方案，也為今后處理相關(guān)的疾病事件提供了理論支持。以下為參考文獻[1]WICKRAMASINGHEIN,VANBEURDENSJ,WEERTSEA,etal.Theaviancoronavirusspikeprotein[J].VirusResearch,2020,194:37-48.[2]PROMKUNTODN,WICKRAMASINGHEIN,DEVRIEZEG,etal.ContributionsoftheS2spikeectodomaintoattachmentandhostrangeofinfectiousbronchitisvirus[J].VirusResearch,2020,177(2):127-137.[3]DEHAANCA,TELE,LIZ,etal.CooperativeinvolvementoftheS1andS2subunitsofthemurinecoronavirusspikeproteininreceptorbindingandextendedhostrange[J].JournalofVirology,2006,80(22):10909-10918.[4]YANGY,LIUC,DUL,etal.TwoMutationsWereCriticalforBat-to-HumanTransmissionofMiddleEastRespiratorySyndr