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文檔簡介

溶血性鏈球菌檢驗(yàn)革蘭氏陽性球菌檢樣處理增菌培養(yǎng)檢樣處理固體樣品：25g（電子天平）液體樣品：25mL（25mL吸量管）+

225mL生理鹽水（量筒），混勻。注意：液體樣品先用無菌NaOH或HCl調(diào)節(jié)PH至7.0。稀釋瓶或具塞廣口瓶增菌取上述混合液5mL（吸量管）

50mL葡萄糖肉浸液肉湯培養(yǎng)（于36℃±1℃培養(yǎng)24h）葡萄糖肉浸液肉湯培養(yǎng)

1.取已培養(yǎng)好的增菌液1環(huán)血平板劃線培養(yǎng)（于36℃±1℃培養(yǎng)24h）葡萄糖肉浸液肉湯（陽性）血平板平板劃線示意圖開始處開始處

2.取有典型菌落的陽性血平板（在放陽性物品處）灰白色，半透明或不透明，表面光滑，周圍有透明圈血平板劃線（分純）血平板涂布貼桿菌肽試紙（2~3片）革蘭氏染色典型菌落（同一菌落）于36℃±1℃培養(yǎng)18~24h于36℃±1℃培養(yǎng)18~24h在無菌室中固定，到微生物實(shí)訓(xùn)室染色革蘭氏染色步驟：涂片——火焰固定——結(jié)晶紫初染——水洗——碘液媒染——乙醇脫色——水洗——吸干——番紅或沙黃復(fù)染——水洗——干燥——鏡檢涂片：在載玻片中央滴一滴生理鹽水，用無菌操作法挑取菌種于生理鹽水中，調(diào)勻并涂成薄膜。注意：生理鹽水不宜過多；涂片必須均勻?；鹧婀潭ǎ狠d玻片通過火焰1~2次固定，不可過熱，以載玻片不燙手背為宜。結(jié)晶紫初染：涂片置于水平位置。涂片薄膜上加結(jié)晶紫1滴，染色1min。水洗：用自來水沖洗至沖下的水無色為止。碘液媒染：加碘液媒染1min，然后用水沖洗至沖下的水呈無色為止。乙醇脫色：用吸水紙將載玻片上的水吸凈，用95%的乙醇滴于涂片薄膜上，滴洗至流出的乙醇不出現(xiàn)紫色為止，大約需要20~30s。立即用自來水沖洗乙醇約30s，用吸水紙吸干水分。番紅或沙黃復(fù)染：在涂片薄膜上滴加番紅1滴，染色1~2min。水洗：用水沖洗至沖下的水呈無色為止。干燥：于室溫下自然干燥。觀察：干燥后，于涂片薄膜上滴香柏油1滴，置油鏡下觀察。結(jié)果:

革蘭氏陽性菌——紫色；

革蘭氏陰性菌——紅色。桿菌肽敏感試驗(yàn)結(jié)果：試紙周圍有抑菌帶出現(xiàn)為陽性血平板純化結(jié)果：

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