NY/T 553-2002禽支原體病診斷技術(shù)

ICS.11.220B41NY中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY/T553-2002禽支原體病診斷技術(shù)DiagnostictechniquesforavianmycoplasmosisCmycoplasmagallisepticum2002-08-27發(fā)布2002-12-01實施中華人民共和國農(nóng)業(yè)部發(fā)布

NY/T553—2002禽支原體?。╝vianmycoplasmosis）又稱雞敗血支原體（mycoplasmgalliscpticum.簡稱MC），常引起雞的慢性呼吸道疾病。MG也可感染火雞，引起傳染性突炎。世界動物衛(wèi)生組織worldOrganizationforAnimalHealth(英）.OfficelnternationaldesEpizooties(法），IE將本病例B類動物疫病，我國將其列為二類疫病。本標準規(guī)定的方法與（)E《診斷試驗與疫苗標準手冊》推薦相應(yīng)方法一致。本標準的附錄A為規(guī)范性附錄。本標準由農(nóng)業(yè)部畜牧魯醫(yī)局提出本標準由全國動物檢疫標準化技術(shù)委員會歸門，本標準起草單位：農(nóng)業(yè)部動物檢疫所。本標準起草人：鄲福生、尹燕博、蔣正軍、孫淑芳、陸明哲、龔振華。

NY/T553—2002禽支原體病診斷技術(shù)本標準規(guī)定了禽支原體(MG)分離鑒定和快速血消凝集試驗(RSA)的技術(shù)要求本標準適用于雞和火雞及其產(chǎn)品MG的檢測。禽支原體的分商和鑒定2.1材料準備2.1.1培養(yǎng)基制備見附錄A(規(guī)范性附歡)。2.1.2免抗MG附性血清和抗免熒光抗體結(jié)合物2.2分商2.2.1采樣活禽從鼻腔、食管、氣管、泄殖腔和交合器中取樣。死禽從鼻腔、眶下突、氣管或氣囊采樣.也可吸取眶下突和關(guān)節(jié)滲出物或結(jié)膜囊內(nèi)沖洗物。對于雞豚從卵黃囊內(nèi)衣面、口咽和氣囊采樣。2.2.2樣品的處理采樣后應(yīng)盡快培養(yǎng)。如須運輸，小塊組織貿(mào)于支原體培養(yǎng)基中.執(zhí)子在培養(yǎng)基中用力攪拌數(shù)次，將培養(yǎng)基運回實驗室盡快培養(yǎng)。2.2.3接種將樣品0.2ml.接種于1.8ml.支原體液體培養(yǎng)基中，依次10倍稀釋至10.密封.37（培養(yǎng)。同時將樣品接種于支原體固體培養(yǎng)基中，置于含5%～10%二氧化碳((（)。)培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。2.2.3.1每天檢查液體培養(yǎng)基酸堿度，一旦發(fā)現(xiàn)pH值變化，立即接種于固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。若培養(yǎng)基酸堿度沒有變化，每隔3d～5d盲傳一代，共傳3代，培養(yǎng)10d后接種于固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。2.2.3.2因體培芥基上若有菌落生長，用低倍顯微鏡觀察菌落.可見中央突起呈荷包蛋樣(有時不典型）而進一步作血清學鑒定。2.3鑒定2.3.1用間接光抗體試驗(IFA)鑒定MG。取1.0cm～1.5m的瓊脂塊，苗著面朝上置于載玻片上，第一塊載玻片上放一塊待檢分離物、一塊已知MG菌落(S。或R株)、塊已知其他支原體菌落，第二塊載玻片上放一塊待檢分離物。2.3.2第一塊載玻片上每塊瓊脂塊上加一滴適當稀釋的兔抗MG血清，第二塊載玻片上瓊脂塊上加一滴正常免血清。2.3.3瓊脂塊在濕盒中室溫條件下反應(yīng)30min后，分別放到含有磷酸鹽緩沖液(PBS)(pH7.2)的不同器血中，沖洗10min，共沖洗2次。2.3.4將瓊脂塊放回原玻片，吸水紙吸取過多的水分，每塊瓊脂加上稀釋好的抗免熒光抗體結(jié)合物，反應(yīng)、洗滌同前，最后將瓊脂塊放回玻片，吸干多余水分后于人射式熒光顯微鏡下檢查結(jié)果。2.4結(jié)果判定菌落呈現(xiàn)亮綠色熒光時為陽性反應(yīng)，若僅有暗淡的菌落輪魔,與