標準解讀

《NY/T 678-2003 豬偽狂犬病免疫酶試驗方法》是一項針對豬偽狂犬?。ˋujeszky's disease）檢測的標準，由中華人民共和國農業(yè)部發(fā)布。該標準詳細描述了如何使用免疫酶技術來檢測豬血清中的偽狂犬病毒抗體或抗原，適用于疾病監(jiān)測、疫苗效果評估以及流行病學研究等領域。

根據此標準，試驗主要基于酶聯免疫吸附測定(ELISA)原理進行，這是一種高靈敏度和特異性的生物化學分析方法。整個過程包括樣品準備、包被板制備、加樣與孵育、清洗、顯色反應及結果判讀幾個步驟。其中，關鍵試劑如包被有特定抗原或抗體的微孔板、標記酶結合物、底物溶液等的選擇與正確使用對于保證測試準確性至關重要。

在操作過程中需要注意的是，所有涉及的實驗室設備都必須經過校準并處于良好工作狀態(tài)；同時，為了確保數據可靠性和重復性，實驗室內應建立嚴格的質量控制體系，并定期參加外部質量評價活動以驗證自身檢測能力。此外，工作人員需接受專業(yè)培訓，熟悉相關理論知識和技術規(guī)范，嚴格按照SOP執(zhí)行每一步驟。


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  • 2003-07-30 頒布
  • 2003-10-01 實施
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文檔簡介

犐犆犛１１．２２０

犅４１

中華人民共和國農業(yè)行業(yè)標準

犖犢／犜６７８—２００３

豬偽狂犬病免疫酶試驗方法

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２００３０７３０發(fā)布２００３１００１實施

中華人民共和國農業(yè)部發(fā)布

書

犖犢／犜６７８—２００３

前言

本標準的附錄Ａ是規(guī)范性附錄。

本標準由農業(yè)部畜牧獸醫(yī)局提出并歸口。

本標準起草單位：農業(yè)部獸醫(yī)診斷中心。

本標準主要起草人：王宏偉、吳清民、童光志、田克恭、陳西釗、蘇敬良、王傳彬。

Ⅰ

書

犖犢／犜６７８—２００３

豬偽狂犬病免疫酶試驗方法

１范圍

本標準規(guī)定了豬偽狂犬病Ｅ糖蛋白（ｇＥ，即ｇｐⅠ）酶聯免疫吸附試驗和免疫酶組織化學試驗方法。

本標準適用于檢測豬血清中的豬偽狂犬病病毒ｇＥ特異性抗體和組織中的豬偽狂犬病病毒抗原。

２犈糖蛋白酶聯免疫吸附試驗（犵犈犈犔犐犛犃）

２．１材料準備

２．１．１試劑

ａ）ＥＬＩＳＡ抗原包被板；

ｂ）標準陽性血清：偽狂犬病病毒ｇＥ單克隆抗體；

ｃ）標準陰性血清：無偽狂犬病病毒ｇＥ抗體的豬血清；

ｄ）酶結合物：辣根過氧化物酶（ＨＲＰ）標記的抗偽狂犬病病毒ｇＥ單克隆抗體；

ｅ）磷酸鹽緩沖液（ＰＢＳ）：配制見第Ａ．１章；

ｆ）洗滌液：配制見第Ａ．２章；

ｇ）樣品稀釋液：配制見第Ａ．３章；

ｈ）底物溶液：配制見第Ａ．５章；

ｉ）終止液：配制見第Ａ．６章。

２．１．２器材

ａ）酶聯檢測儀；

ｂ）微量加樣器，容量５０μＬ～２００μＬ；

ｃ）３７℃恒溫培養(yǎng)箱。

２．１．３樣品

采集被檢豬血液，分離血清，血清應新鮮、透明、不溶血、無污染，密裝于滅菌小瓶內，４℃或－３０℃保

存或立即送檢。試驗前將被檢血清統(tǒng)一編號，并用樣品稀釋液作２倍稀釋。

２．２操作方法

２．２．１取出包被板，并將樣品位置準確記錄在記錄單上。

２．２．２向Ａ１、Ａ２、Ａ３孔中分別加入１００μＬ未經稀釋的陰性對照血清，Ａ４、Ａ５、Ａ６孔中分別加入

１００μＬ未經稀釋的陽性對照血清，其他各孔加入１００μＬ稀釋好的待檢樣品。

２．２．３置室溫１ｈ。

２．２．４棄去孔內液體，再在紗布或吸水紙上拍干。

２．２．５用洗滌液將反應板洗滌（３～５）次，每次洗滌后均棄去孔內液體。最后一次洗滌后，除凈孔內液

體，拍干。

２．２．６每孔加入１００μＬ酶結合物溶液，室溫下作用２０ｍｉｎ。

２．２．７重復２．２．４和２．２．５。

２．２．８各孔加入１００μＬ底物液。

２．２．９室溫放置１５ｍｉｎ。

２．２．１０各孔加入５０μＬ終止液，立即用酶標儀于６５０ｎ

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