WS/T 230-2002臨床診斷中聚合酶鏈反應(PCR)技術的應用

C50WS中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準WS/T230-2002臨床診斷中聚合酶鏈反應（PCR）技術的應用Guidelinesforuseofpolymerasechainreaction（PCR）techniqueinclinicaldiagnosis2002-04-20發(fā)布2002-07-01實施中華人民共和國衛(wèi)生部發(fā)布

WS/T230-2002合酶鏈反應（polymerasechainreaction，PCR）是一種在體外特異性擴增靶DNA序列的技術。其基本過程為模板雙鏈DNA的變性、引物與模板DNA的退火和在DNA聚合酶引導下的鏈延伸反應三個階段的多次循環(huán)。每一次循環(huán)后的擴增產(chǎn)物均可作為下一輪循環(huán)的模板，理論上.擴增產(chǎn)物量呈指數(shù)形式上升，即經(jīng)個循環(huán)后，產(chǎn)物量增加到2倍。PCR操作簡單，短時間內(nèi)在體外可獲得數(shù)百萬個特異靶DNA序列的烤貝·為臨床疾病的診斷、治療監(jiān)測和預后評估提供了一種極有幫助的實驗室輔助手段。本標準的附錄A、附錄B都是標準的附錄。本標準從2002年7月1日起實施本標準由衛(wèi)生部醫(yī)政司提出。本標準由北京大學人民醫(yī)院肝病研究所負責起草。本標準主要起草人：陶其敏、全文斌、范濤。本標準由衛(wèi)生部委托衛(wèi)生部臨床檢驗中心負責解釋

中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準臨床診斷中聚合酶鏈反應（PCR）技術的應用WS/T230-2002GuidelinesforuseofpolymerasechainreactionCPCR）techniqueinclinicaldiagnosis1范圍本標準規(guī)定了臨床診斷中聚合酶鏈反應(PCR)技術的應用準則。本標準適用于各級、各類的醫(yī)療、衛(wèi)生、保健機構應用PCR技術進行臨床診斷2定義本標準采用下列定義。2.1！引物primer與待擴增靶DNA片段兩端互補的鼻核音酸，其本質是單鏈DNA(ssDNA）在DNA聚合酶的作用下能進行延伸，從而合成新的互補鏈。2.2模板tcmplate侍擴增的靶DNA或RNA鏈，包括人類基因組DNA、質粒DNA、唑苗體DNA、CDNA和mRNA、擴增后的DNA產(chǎn)物等幾乎所有形式的DNA或RNA。2.3變性denaturationDNA或RNA由雙鏈轉變?yōu)閱捂湢顟B(tài)，加熱、提高PH或加人甲酰胺、原等試劑都可使雙鏈DNA或RNA發(fā)生變性。2.4退火annealing引物與互補的核音酸序列在合適的溫度下通過氫鍵形式相互結合的過程。2.5延伸extension在合適的條件下，由DNA聚合酶(如：Taq酶)催化引導引物DNA鏈延伸的合成過程2.6污染contamination由來源于非待測樣品的核酸所引起的一個樣品、一系列樣品或試劑的非特異性擴增或擴增后在產(chǎn)物分析過程中造成的樣品之間的污染，污染通常引起假陽性結果。2.7遺留污染Carry-overcontamination同一類靶序列上一次PCR擴增產(chǎn)物對以后擴增反應的后續(xù)污染。2.8內(nèi)對照internalcontrol在同一反應混合物體系中與待測靶核酸同時進行擴增反應的已知對照物。2.9TaqDNA聚合酶TaqDNApolymerase一種耐熱的DNA聚合酶,最初是從美國黃石國家公園溫泉中存在的水生棲熱菌（Therorsq"alir)中分離獲得，Taa醇最適活性溫度在70℃～80℃,能