化學(xué)分析方法驗證課件

化學(xué)分析方法驗證化學(xué)分許方法驗證成功的前提能夠研究建立一個有水準的分析方法的能力有化學(xué)分析方法驗證的知識和水平化學(xué)分許方法驗證成功的前提有水平，經(jīng)過培訓(xùn)的實施人員儀器性能已經(jīng)得到確認（校準，驗證，校準在有效期內(nèi)）可靠的對照品（法定機構(gòu)提供的或有水平自己建立的）質(zhì)量可靠的實驗試劑什么時候分析方法需驗證符合下列情形之一的，應(yīng)對檢驗方法進行驗證：1.建立或采用新的檢驗方法2.分析對象或檢驗方法變更了3.采用中國藥典未收載的檢驗方法4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗證的檢驗方法什么時候分析方法需驗證（續(xù)）對不需要進行驗證的的檢驗方法，應(yīng)進行方法確認，以保證檢驗數(shù)據(jù)準確可靠。2005版藥典中分析方法驗證指導(dǎo)原則（附錄XIXA）只規(guī)定了項目和基本方法而沒有合格標準，ICH和USP類似。方法學(xué)驗證對分析方法的科學(xué)性，準確性和可行性進行驗證，充分表明分析方法符合測試項目的目的和求。需要驗證的檢測項目1.鑒別目的在與判定被分析物是目標化合物而非其他物質(zhì)。共存，相似的化合物要分開。要考察其他成分和輔料的干擾，空白試驗一定要成陰性。需要驗證的檢測項目2.雜質(zhì)檢查主要用于控制住成分以外的雜質(zhì)，如有機雜質(zhì)，無機雜質(zhì)。限度檢查定量檢查需要驗證的檢測項目限度檢查各種無機離子檢查等定量檢查定量測定：干燥失重，水分，有關(guān)物質(zhì)，殘留溶劑及其他特定檢測項目等。驗證內(nèi)容準確度精密度（重復(fù)性，中檢精密度和重現(xiàn)性）專屬性檢測線（LOD）定量限（LOQ）線性范圍耐用性準確度定量方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，用回收率%表示。原料藥已知純度的對照品或供試品已知準確度的另一種方法比較制劑配置回收試驗法加樣回收試驗法已知準確度的另一方法比較雜質(zhì)準確度對于中藥a.以經(jīng)典方法的測定值作為真值，建立方法的測定數(shù)據(jù)與之比較（該法適用于化學(xué)單體藥物）b.以加入對照品測定的回收率表示，一般有空白回收（制劑空白）和加樣回收的測定方法（中藥材，復(fù)方制劑等）準確度試驗方法：規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用九次測定結(jié)果評價，如制備高，中，低三個不同濃度樣品各測三次。準確度試驗方法（中藥）同一樣品，制備相同濃度的6份供試品（樣品取樣量減半，以1：1比例加入對照品）同一樣品，制備三個濃度的供試品，每個濃度分別制備三份供試液，對照品的加入方式有三種方式。對照品的加入方式取相同量樣品9份（一般為樣品取樣量的一半），設(shè)計三個濃度，按不同比例加入對照品。中間濃度一般按1；1比例加入，低，高濃度可選0.5：1，1.5：1的比例，加入對照品的量要適當，保證供試品溶液的濃度（或量）在考察的線性范圍內(nèi)。取3種不同量的樣品個三份，每個取樣量分別按1：1比例加入對照品，中間濃度已選定正常濃度，其他兩個濃度可以結(jié)合范圍測定項目選擇低，高濃度。按表示量計算得組分，可參訂化學(xué)藥品測定方法，取9份樣品，按0.8：1，1：1，1：1.2的比例加入對照品（樣品取樣量減半）精密度重復(fù)性：在相同條件下，有同一個分析人員測定所得結(jié)果的精密度

在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果評價，如制備不同濃度樣品各測三次把被測濃度當做100%，至少測6次進行評價中間精密度：同一實驗室，不同時間有不同的分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度（三人三機）重現(xiàn)性：不同實驗室，不同分析人員測定結(jié)果的精密度。以SD，RSD表示。

專屬性專屬性只有其他成分（雜質(zhì)，降解物，輔料等）可能存在情況下采用的方法能準確測定出被測物的特性，能反映該方法在有共存物時對供試液準確而專屬的測定能力，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時是否受相互干擾程度的度量。專屬性通常是通過分析含有加了雜質(zhì)，降解產(chǎn)物，有關(guān)化學(xué)物質(zhì)或安慰劑成分的樣品，將所獲的分析結(jié)果與未加前述成分之樣品的測試結(jié)果進行比較，兩組測試結(jié)果只差即為專屬性。專屬性含量測定和雜志測定色譜法和其他方法：附帶表性圖譜說明專屬性表明各組分的位置，分離度是否符合要求雜質(zhì)或輔料可獲得的情況下，試樣中可加入雜志或輔料，考察測試結(jié)果是否受干擾對于雜質(zhì)測定也可相試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察雜質(zhì)間是否得到分離色譜峰純度試驗（二極管陣列，其他檢測器，質(zhì)譜）專屬性破壞性試驗高溫，高濕，光照，酸破壞，堿破壞，氧化破壞注意觀察降解產(chǎn)物生成情況，分離度是否符合要求注意掌握破壞條件，應(yīng)使主成分峰保留大約90%檢測線和定量限試驗時應(yīng)注意A：應(yīng)以實驗中得到的濃度分析，而不能靠推算。B:應(yīng)以定量濃度限為依據(jù)確定對照溶液濃度（一般擴大20—50倍）線性線性是指再設(shè)計范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比例關(guān)系的程度。線性應(yīng)在分析需要的范圍內(nèi)進行評價一般以最小二乘法處理數(shù)據(jù)求的回歸曲線的斜率來表示，必要時可對響應(yīng)信號進行數(shù)字轉(zhuǎn)換。數(shù)據(jù)要求：至少需要五個濃度考察線性，需提供相關(guān)系數(shù)，Y截距，應(yīng)列出回歸方程數(shù)和線性圖。范圍范圍是指達到一定精密度，準確度和線性條件下，測試方法是用的高，低限量濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性，準確度，精密度結(jié)果和要求確定。原料藥和制劑含量測定范圍為80%-120%制劑含量均勻度范圍為70%-130%雜質(zhì)測定應(yīng)為被測雜質(zhì)限度的-20%到+20%溶出度應(yīng)為測定范圍的-20%到+20%，釋放度因規(guī)定了限度范圍，應(yīng)為下限的-20%到上線的+20%，例如緩釋片1h<20%，7h>70%，則驗證范圍定為0-90%耐用性耐用性又稱粗放度，是指測試條件稍有變動時，結(jié)果不受影響的承受程度。失衡連試驗室和工作人員之間的正常情況下試驗結(jié)果重現(xiàn)性的尺度，如方法易受分析條件的影響，或要求苛刻，應(yīng)注明典型的變動包括：1.分析溶液的穩(wěn)定性用不同時間段的樣品和標準品溶液與新制的標準品溶液的對比結(jié)果來分析溶液的穩(wěn)定性2.提取方法，溶劑，次數(shù)，時間等耐用性3.液相色譜的典型變動：流動相PH（-0.5+0.5）流動相組成（有機相-0.5至+0.5）色譜柱(同一廠家三個批號，或兩個不同廠家（同固定相和填充物，尺寸）)溫度（20-25攝氏度）和流速（-10%至+10%）檢測波長（-5nm至+5nm）4.氣象色譜的典型變動：色譜住(同一廠家三個批號，或兩個不同廠家（同固定相和填充物，尺寸）)溫度流速

耐用性如果測試條件要求苛刻，則建議在方法中予以寫明。檢測項目和驗證內(nèi)容總結(jié)

中國藥典鑒別雜質(zhì)測定雜志限度測定含量溶出度等準確度-+-++精密度--重復(fù)性-+-++精密度—中間精密度-+-++專屬性+++++檢測限--+--定量限-+---線性-+-++范圍-+-++耐用性+++++分析方法驗證注意要點空白樣空白樣是指根據(jù)樣品的特性，配方和工藝過程，制備除了不含被測物外其他組成與樣品完全一致的模擬樣品預(yù)驗證預(yù)驗證是指在正式驗證前進行的試驗，目的是收集證據(jù)，已初步證實該檢驗方法可達到預(yù)期要求，同時確定各個項目單位可接受標準。含量測定方法驗證的可接受標準準確度各濃度下的平均回收率應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個回收率數(shù)據(jù)的相對標準差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。中藥一般應(yīng)滿足以下規(guī)定：回收率計算值在95%-105%范圍，相對標準偏差（RSD%）薄層掃描法<5%精密度1.重復(fù)性：6份供試液含量的相對標準差應(yīng)不大于2.0%2.中間精密度：相對標準差應(yīng)不大于2.0%含量測定方法驗證的可接受標準專屬性空白對照應(yīng)無干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完全分離，分離度不得小于2.0檢測限

定量限含量測定方法驗證的可接受標準線性回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于0.998，Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對標準差應(yīng)不大于2.0%。耐用性主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰的雜質(zhì)峰必須達到基線分離，各條件下的含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對標準差應(yīng)不大于2.0%分析方法的確認方法確認是一種簡化了的方法驗證，目的是為了確認藥典方法或其它已經(jīng)驗證的方法是否適用于實際使用的環(huán)境。各國藥典和行業(yè)法規(guī)收載的檢驗方法從外部引入的已經(jīng)檢驗的檢驗方法以往老產(chǎn)品的檢驗方法，原廠無力或無法進行方法傳遞。方法確認一般應(yīng)進行準確度，重復(fù)性，專屬性測試。分析方法傳遞分析方法傳遞（轉(zhuǎn)移）是指一方將已經(jīng)驗證的方法傳送（轉(zhuǎn)移）給另一方的過程。方法傳遞主要進行在不同的實驗室在一定時限內(nèi)對同一份樣品的重現(xiàn)性測試的結(jié)果比對。系統(tǒng)適用性試驗對一些儀器的測試方法，在進行方法驗證時，有必要將分析設(shè)備，電子儀器與實驗操作，被測試樣品等一起當做完整的系統(tǒng)進行評估。系統(tǒng)適用性便是對整個系統(tǒng)進行評估的指標。系統(tǒng)適用性試驗參數(shù)的設(shè)置需根據(jù)被驗證方法類型而定。系統(tǒng)適用性試驗含量測定方法可接受的標準主峰的峰面積的相對標準差應(yīng)不大于2.0%，主峰保留時間的相對標準差應(yīng)不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰與雜質(zhì)峰必須