第十二章臨床血液檢驗(yàn)

2023/2/71學(xué)習(xí)情境十三血液常規(guī)檢查實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)就是運(yùn)用物理學(xué)、化學(xué)和生物學(xué)等實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法，對病畜的血液、尿液、糞便、體液（如胃液、腦脊髓液、胸腹腔穿刺液）、組織細(xì)胞及病理產(chǎn)物，在實(shí)驗(yàn)室特定的設(shè)備和條件下，測定其物理性狀，分析其化學(xué)成分，或借助于顯微鏡觀察其有形成分的方法，以獲取反映機(jī)體功能狀態(tài)，病理變化或病因等客觀資料，配合臨床資料進(jìn)行綜合分析。實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)是一種復(fù)雜而細(xì)致的工作，為了得到正確的結(jié)果，必須遵守嚴(yán)格的操作規(guī)程和次序。采取的樣本必須有代表性，檢驗(yàn)所用的試劑與器材，應(yīng)符合要求，并定期進(jìn)行檢查和校正。要注意消毒工作，污染的器皿應(yīng)先消毒后洗滌，以防傳染性物質(zhì)的擴(kuò)散。血液檢驗(yàn)?zāi)蛞簷z驗(yàn)糞便檢驗(yàn)瘤胃液的檢驗(yàn)穿刺液的檢驗(yàn)常見毒物的檢驗(yàn)第一節(jié)血液檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)是臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中應(yīng)用最廣，對輔助診斷最有價值，最常用的基本內(nèi)容之一。血液是由血漿和血細(xì)胞兩部分組成，是通過循環(huán)系統(tǒng)與全身各個組織器官密切聯(lián)系，參與機(jī)體呼吸、運(yùn)輸、防御，調(diào)節(jié)生理，維持正常新陳代謝和內(nèi)外環(huán)境平衡的。血液全血血漿血清血液學(xué)檢查血細(xì)胞計(jì)數(shù)分類與形態(tài)檢查血漿生理和病理檢驗(yàn)內(nèi)分泌激素生化與免疫學(xué)檢查臨床血液學(xué)檢查內(nèi)容物理學(xué)檢查：借助物理學(xué)方法測定其物理特性，如凝血時間、紅細(xì)胞脆性、紅細(xì)胞沉降率、紅細(xì)胞壓積?；瘜W(xué)檢驗(yàn)：即用定性或定量的化學(xué)分析方法，檢測被檢標(biāo)本各種化學(xué)成分方面的變化，如血紅蛋白的檢查。顯微鏡檢查：檢查其血細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量的變化，如紅細(xì)胞，白細(xì)胞，血小板等。一、血液的采集與血涂片的制作血液樣本的采取與抗凝血液樣本的采取

采血的部位和方法，根據(jù)檢驗(yàn)的項(xiàng)目、所需血量和動物種類的不同，可分為毛細(xì)血管采血、靜脈采血和心臟采血。毛細(xì)血管采血法

適用于采血量少，血液不加抗凝劑而且直接在現(xiàn)場檢驗(yàn)的項(xiàng)目。如涂血片，血紅蛋白測定、血細(xì)胞計(jì)數(shù)等。馬、牛可在耳尖部，豬，羊，兔等在耳背邊緣小靜脈，雞則在冠或肉髯。

采血前先剪毛，酒精棉球消毒，待酒精揮發(fā)后，用消毒的干燥的針頭迅速刺入2-3mm深，讓血液自然流出，且勿擠壓以免混入過多組織液。流出的第一滴血，可用于制作血片，然后用干棉球擦去局部的剩余血液，用流出的第二滴血液作紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白測定，若利用第三滴血時，仍要將第二滴血擦干，否則流出的血不能形成滴狀，不易吸取。靜脈采血法馬、牛、羊可由頸靜脈采血。豬可選用前腔靜脈采血；雞可由翼下靜脈采血，即用細(xì)針頭刺入翼下靜脈后，任血液自行流出并接入試管中。犬、貓可于小腿外側(cè)跖背外側(cè)靜脈或前臂內(nèi)側(cè)皮下靜脈采血。局部剪毛消毒，用止血帶扎住采血部上端，使靜脈怒張，用消毒、干燥的注射器接上針頭，針頭斜上面刺入靜脈采血，待抽至所需量后，先放松止血帶，再用消毒棉球按住傷口，拔出針頭。除去針頭，將血液緩緩注入清潔的試管內(nèi)。需抗凝血液時，試管內(nèi)加抗凝劑，并立即混勻，以免凝固。心臟采血法多用于兔、雞及實(shí)驗(yàn)動物需多量血液時，雞可由胸腔入口處向心臟刺入由于心腔壓力較靜脈高，血液自然涌入注射器，兔及雞亦可在左側(cè)胸部第1、2肋間，心搏動明顯處，針頭與胸壁呈垂直方向緩緩刺入。

豬的前腔靜脈采血

馬的頸靜脈采血兔的耳靜脈采血血液的抗凝草酸鹽是常用的抗凝劑，每1.5-2.0mg可抗凝1.0ml血液，可用于血液常規(guī)檢驗(yàn)。因?qū)t細(xì)胞大小有影響，故不能用紅細(xì)胞壓積測定，如測定紅細(xì)胞壓積時，可用雙草酸鹽抗凝劑或乙二胺四乙酸二鈉。雙草酸鹽抗凝劑

草酸鉀0.8g草酸銨1.2g蒸餾水加至100ml溶解后吸取0.5ml，加入供采血試管或小瓶中，置干燥箱內(nèi)（溫度不超過80℃）烘干備用，可供5ml全血抗凝。血液檢驗(yàn)乙二胺四乙酸（EDTA

）鹽可適用于一般的血液學(xué)檢查，特別是血小板計(jì)數(shù)，但因?yàn)橛绊懷“寰奂桶准?xì)胞吞噬功能，不適合于血象及血小板功能檢查。（EDTA－Na2－H2O）每10mg可使5ml全血抗凝；或配成10%的溶液，每2滴可使5ml全血抗凝。（EDTA－K2－2H2O）1%溶液0.1ml可使5ml血液不凝固。全血細(xì)胞分析及血細(xì)胞比容測定。3.8%枸櫞酸鈉溶液每1ml可使4ml全血抗凝。常用于血沉、凝血因子和血小板功能檢查。因其毒性小又可作為血液保養(yǎng)液。但不適用于血液化學(xué)檢驗(yàn)。由于抗凝劑溶解緩慢，故只能配成溶液，不能用粉劑。血液檢驗(yàn)肝素肝素價格最貴，其優(yōu)點(diǎn)是抗凝作用強(qiáng)，不影響血細(xì)胞的體積，不致溶血等，可用于多種血液生物化學(xué)分析和紅細(xì)胞壓積測定。但過量的肝素可引起白細(xì)胞聚集和血小板減少，故不適用于白細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)，也不適用于血涂片檢查，因其在瑞氏染色時會出現(xiàn)藍(lán)色背景，更不能用于血液學(xué)一般檢查。肝素是生理性抗凝劑,廣泛存在于肺、肝、脾等幾乎所有的組織和細(xì)胞周圍，肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的顆粒中。它是一種含硫酸基團(tuán)的黏多糖?？鼓龣C(jī)制較為復(fù)雜，主要是加強(qiáng)抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶的作用，從而阻止凝血酶的形成，并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。通常用肝素粉劑配成1g/L水溶液。取0.5ml置小瓶內(nèi)，放于37～50℃中烘干后貯于冰箱內(nèi)保存。能使5ml血液不凝固，肝素抗凝劑應(yīng)及時使用，放置過久易失效。

如分離血清，應(yīng)將全血采集在試管中（不加抗凝劑），在室溫下或25-37℃溫水中斜置，血清析出后即可分離。血漿應(yīng)在抗凝血采集后離心分離。血液采集后應(yīng)盡快送檢和檢測。不能立即送檢的血樣，血片應(yīng)固定，抗凝血、血漿和血清應(yīng)冷藏。送檢血樣應(yīng)編號，并避免劇烈振搖。血液學(xué)檢查項(xiàng)目與血樣保存的期限見下表

血樣的處理檢查項(xiàng)目保存時間（h）檢查項(xiàng)目保存時間（h）白細(xì)胞計(jì)數(shù)2-3血紅蛋白含量48紅細(xì)胞計(jì)數(shù)24紅細(xì)胞壓積容量24血小板計(jì)數(shù)1紅細(xì)胞沉降速率2-3網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)2-3白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)1-2注意:懷疑傳染病時，采血應(yīng)防止到處流散，檢后殘余血液及所用器皿應(yīng)進(jìn)行消毒處理。紅細(xì)胞背景知識

紅細(xì)胞也稱紅血球，是血液中數(shù)量最多的一種血細(xì)胞，同時也是脊椎動物體內(nèi)通過血液運(yùn)送氧氣的最主要的媒介。在所有的脊椎動物及若干無脊椎動物，其血紅素包含在特定的細(xì)胞中來進(jìn)行其機(jī)能活動，這種血球稱為紅細(xì)胞。其它的血細(xì)胞，如白血球，則是免疫細(xì)胞。紅細(xì)胞中含有血紅蛋白，因而使血液呈紅色。血紅蛋白能和空氣中的氧結(jié)合，因此紅細(xì)胞能通過血紅蛋白將吸入肺泡中的氧運(yùn)送給組織，而組織中新陳代謝產(chǎn)生的二氧化碳也通過紅細(xì)胞運(yùn)到肺部并被排出體外。血紅蛋白更易和一氧化碳相合，當(dāng)空氣中一氧化碳含量增高時，可引起一氧化碳中毒。紅細(xì)胞和血紅蛋白的數(shù)量減少到一定程度時，稱為貧血。紅細(xì)胞大量被破壞可引起溶血性黃疸。紅細(xì)胞描述：多，小而圓，中央著色較淺，無核。禽類稱為凝血細(xì)胞，一般為卵圓形，有細(xì)胞核，比哺乳動物的大得多，數(shù)量少。血液涂片的制備和細(xì)胞染色１、涂片的制作

選取一張邊緣平滑的載玻片作為推片(最好此載玻片稍窄或磨去兩角),用左手的拇指與中指夾持一張載玻片，取被檢血液一滴(最好是未加抗凝劑的新鮮血)置載玻片的一端，然后右手持推片傾斜30-40°角，由血滴的前方向后接觸血滴，待血液擴(kuò)散成線狀后，立即以均等的速度輕而平穩(wěn)地向前推進(jìn)，即形成血膜。涂片時，血滴越大，角度越大，推片速度越快，則血膜越厚，反之則血膜越薄。白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)的血片宜稍厚，進(jìn)行紅細(xì)胞形態(tài)及血原蟲檢查的血片宜稍薄。一張良好的血片，要求厚薄適宜，血液分布均勻，對光觀察呈霓虹色，邊緣整齊，能明顯分出頭，體，尾三部分，兩側(cè)留有空隙(以寫明畜別，編號、日期)。血膜分布不勻，主要是由于推片不齊，用力不勻，玻片不潔所致。推好的血片可在空氣中揮動，使其迅速干燥，以防細(xì)胞皺縮變形，并盡快固定染色。為了觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，識別各種細(xì)胞及其異常變化，血涂片必須進(jìn)行染色。原理染色是染料透入被染物并留存其內(nèi)部的一種過程，此過程既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用。各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對染料的親和力也不一樣。例如血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染成紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞質(zhì)為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染成紫藍(lán)色或藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性顆粒呈等電狀態(tài)，與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染成紫紅色，稱為中性物質(zhì)。２、細(xì)胞染色瑞氏染色法姬姆薩氏染色法瑞－姬氏復(fù)合染色法（１）瑞氏染色法●瑞氏染料：酸性染料伊紅、堿性染料亞甲藍(lán)●瑞氏染液：瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml。將染色粉置于研缽中，加少量甲醇研磨，使其溶解，將已溶解的染液倒入潔凈的棕色玻璃瓶中，剩下未溶解的染料再加少量甲醇研磨，如此繼續(xù)操作，直至全部染料溶解并用完甲醇為止。在室溫中保存7日，每日震搖一次，過濾后即可應(yīng)用。新配的染液偏堿性，放置后可呈酸性。保存時間愈久，染色能力愈佳?！裢科渭尤旧骸茫薄瞞in——加磷酸鹽緩沖液混合均勻——３～5min——水沖洗——自然干燥——鏡檢(所得血片呈櫻紅色者為佳)（２）姬姆薩氏染色法●姬姆薩氏染料：酸性染料伊紅、堿性染料天青●姬姆薩氏染液：姬姆薩氏染粉0.5g，中性甘油33ml，中性甲醇33ml。將染色粉置于研缽中，加少量甘油，充分研磨；加入所余甘油，在50～60℃水溶液中保溫1～2h，并用玻棒攪拌，使染粉溶解；最后加入甲醇，混合后裝入棕色瓶中，保存7日后過濾即成原液染色時取原液0.5～1ml，加pH6.8磷酸鹽緩沖液10ml，即成應(yīng)用液?！裢科状脊潭ǎ场祄in——置于染色液中染３０～６０min－水洗——吸干——鏡檢(玫瑰紫為佳)●對細(xì)胞核與寄生蟲效果好（３）瑞－姬氏復(fù)合染色法●瑞－姬氏復(fù)合染液：瑞氏染粉5.0g，姬姆薩氏染粉0.5g，甲醇500ml。將兩種染粉置于研缽中，加少量甲醇研磨，傾入棕色瓶中，用剩余甲醇再研磨，最后一并裝入瓶中保存7日后過濾即成?！裢科渭尤疽骸?.5～１min后加等量緩沖液——５～１０min——吸干——鏡檢。磷酸鹽緩沖液(PH6.4-6.8)：磷酸二氫鉀0.3g加磷酸氫二鈉0.2g再加蒸餾水至1000ml,配制成磷酸鹽緩沖液調(diào)整pH,如無緩沖液可用新鮮蒸餾水代替。二、血液常規(guī)檢驗(yàn)紅細(xì)胞沉降率的測定紅細(xì)胞壓積容量測定紅細(xì)胞滲透脆性的測定血液凝固時間測定血紅蛋白(Hb)含量測定血細(xì)胞檢驗(yàn)血小板計(jì)數(shù)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)白細(xì)胞計(jì)數(shù)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)內(nèi)容定義:血液加入抗凝劑后，一定時間內(nèi)紅細(xì)胞向下沉降的毫米數(shù)，叫做紅細(xì)胞沉降速度，簡稱血沉（ESP）。紅細(xì)胞沉降率測定血液檢驗(yàn)魏氏法先向10ml刻度試管中加入3.8%枸櫞酸1ml，再自靜脈采血4ml，顛倒混合數(shù)次，然后用魏氏血沉管吸取抗凝劑至刻度0處，擦去管外血液，在室溫條件下，垂直放于血沉管架上，經(jīng)15、30、45、60min，分別觀察并記錄細(xì)胞沉降數(shù)值?！椒?/p>

1魏氏血沉管長30cm，內(nèi)徑2.5mm管上有0~200的刻度，每一刻度的距離為1mm，其溶積為1ml。血液檢驗(yàn)“六五”型血沉管法于血沉管中加入抗凝劑（草酸鈉0.015~0.02g，枸櫞酸鈉粉末0.04~0.05g）,自頸靜脈直接采血至刻度“0”處，立即充分混合，于室溫垂直立于試管架上，鏡15、30、45、60min各觀察一次，并記錄紅細(xì)胞沉降的數(shù)值?！椒?/p>

2“六五”型血沉管法內(nèi)徑0.9cm，全長17~20cm，管上有100個刻度容積為10ml。血液檢驗(yàn)各種動物的正常血沉值動物種類15min30min45min60min測定方法馬驢黃牛水牛奶牛山羊豬31329.80.33497530.80.785396.7650.752055110.70.891.61.20.630六五型法魏氏法魏氏法魏氏法魏氏法魏氏法六五型法①測定血沉?xí)r必須用新配制的抗凝血；②血液與抗凝劑混合要充分，柱面上不應(yīng)有氣泡，它可使血沉變慢；③用魏氏法測定時，事先應(yīng)檢查血沉架是否好用，以防漏液；④測定時室溫以20℃左右為宜，溫度過低可以減慢血沉。血沉值沒有獨(dú)立的診斷意義。血沉加快，見于馬傳染性貧血、梨形蟲病、結(jié)核、鼻疽、豬瘟、化膿性炎癥、風(fēng)濕癥等。血沉減慢，見于大出汗、多尿、劇烈腹瀉、馬流行性腦脊髓炎、破傷風(fēng)、牛瓣胃阻塞、腹痛癥等。臨床意義定義:是指壓緊的紅細(xì)胞在全血中所占的百分率,是鑒別貧血的一項(xiàng)不可缺少的指標(biāo),簡稱比容。紅細(xì)胞壓積容量測定紅細(xì)胞壓積容量測定管（溫氏測定管）長約11cm,內(nèi)徑約2.5mm，管壁刻有0-10cm刻度，分度刻度1mm。用毛細(xì)玻璃吸管或長針頭吸滿抗凝全血，將血液自上而下擠入溫氏測定管內(nèi)，至刻度10處；3000rpm離心30-40min。讀取紅細(xì)胞柱層的刻度數(shù)，即為紅細(xì)胞壓積容量數(shù)值，數(shù)值用百分率表示。▲方法1、壓積升高2、壓積降低各種貧血生理性升高病理性升高各種脫水每超出高限一個小格（１mm)一天的補(bǔ)液量＝８００－１０００毫升臨床意義定義:是指紅細(xì)胞在低滲氯化鈉溶液中的抵抗力，故又稱為紅細(xì)胞抵抗。紅細(xì)胞滲透脆性的測定取10ml刻度試管22支，分別標(biāo)明管號，每管分別加入個濃度低滲氯化鈉溶液5ml，再加入10%紅細(xì)胞生理鹽水懸浮液2滴，混勻。室溫下放置10-15min，離心5min并觀察結(jié)果?？鼓?份，先用生理鹽水將紅細(xì)胞洗滌1次，然后做成10%紅細(xì)胞生理鹽水懸浮液備用。配制1%NaCl溶液，以0.02%為濃度梯度配制從0.76%-0.34%共22份濃度的低滲溶液。分別裝入100ml細(xì)口瓶中備用，每6-8周更換一次。溶液變?yōu)闇\桃紅色，管底有大量紅細(xì)胞沉淀，即開始溶血，此管的鹽水濃度代表紅細(xì)胞的最小抵抗；溶液呈深紅色，管底無紅細(xì)胞沉淀，即完全溶血，此管的鹽水濃度代表紅細(xì)胞最大抵抗?！椒ㄔ龈呓档腿辫F性貧血免疫性溶血性貧血臨床意義定義:是指血液自血管流出直到完全凝固所需的時間，用以測定血液的凝固能力。血液凝固時間測定頸靜脈采血，見到出血后立即用秒表記錄時間。取血一滴，滴在玻片一端，隨即玻片稍稍傾斜，滴血一端向上。此時未凝固血液自上而下流動，形成一條血線，放在室溫下的平皿內(nèi)，防止血液中水分蒸發(fā)，靜置2min，之后每隔30s用針尖跳動血線一次，待針頭挑起纖維絲時，即停止秒表，記錄時間，即為血凝時間?！椒úＦê唵我仔?，但不及試管法準(zhǔn)確試管法采血前準(zhǔn)備刻度小試管3支，并預(yù)先放在25-37℃恒溫水浴箱內(nèi)。頸靜脈采血，剪刀出血立即開始計(jì)時。隨之將血液分別加入3支試管內(nèi)，每支試管各加1ml，再將試管放回水浴箱。放置3min后，先從第一管做起，每隔30s逐次傾斜試管一次，直到翻轉(zhuǎn)試管血液不能流出為止，并記錄時間。3支小試管的平均時間即為血凝時間。適用于出血性疾病的研究與診斷延長縮短重度貧血血斑病肝臟病炭疽病偶見于纖維素性肺炎臨床意義血液檢驗(yàn)紅細(xì)胞遇酸溶解，游離出血紅蛋白，并被酸化為褐色的酸性血紅素，稀釋后與標(biāo)準(zhǔn)色柱比色，即可求得血紅蛋白的含量。血紅蛋白試紙測定法器材應(yīng)備有測定血紅蛋白試紙和4g%~15g%血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)比色板。測定時，取試紙一條，吸附被檢血液一小滴，待血完全浸透后，立即置于所附標(biāo)準(zhǔn)色板的小孔下，肉眼與色板色澤進(jìn)行比較，選擇顏色相同或近似者，即得100ml血液所含血紅蛋白的克數(shù)。血紅蛋白測定沙利氏血紅蛋白測定法沙利氏血紅蛋白計(jì)由比色架、標(biāo)準(zhǔn)比色柱、血紅蛋白測定管及血紅蛋白吸管組成。測定管有兩個刻度標(biāo)志，一側(cè)的2~24刻度表示100ml血液中含有的血紅蛋白克數(shù)；另一側(cè)有20~160刻度，表示100ml血液中所含血紅蛋白的百分?jǐn)?shù)。在血紅蛋白稀釋管內(nèi)加入0.1mol/L鹽酸溶液至刻度10%處。用血紅蛋白吸管吸取血液至20mm3刻度處，，拭凈管外附著血液，迅速將試管內(nèi)血液緩緩吹入血紅蛋白洗試管內(nèi)的鹽酸溶液中，再吸取上層鹽酸溶液反復(fù)吹洗數(shù)次，勿使產(chǎn)生氣泡。移去血紅蛋白吸管，用小玻璃棒攪拌或輕輕搖振，使血液與鹽酸溶液混合而呈褐色。將測定管插入比色架內(nèi)，靜置10min。慢慢分次沿測定管壁滴加蒸餾水，邊加邊混勻，邊比色，直至血紅蛋白測定管液體的顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色柱一致為止，讀取測定管液體凹面最低處的刻度數(shù)，即為100ml血液內(nèi)所含血紅蛋白的克數(shù)或百分?jǐn)?shù)?！椒ㄑ簷z驗(yàn)動物種類血紅蛋白值（克/100毫升）馬、騾11.0（9.0~13.0）牛10.0（9.0~11.0）水牛8.3（8.0~9.0）羊9.8（7.8~11.6）豬10.5（9.5~12.0）雞12.5（10.0~14.5）血紅蛋白增高見于各種原因引起的血液濃縮，如腹瀉、嘔吐、大汗、多尿及腸梗阻等。血紅蛋白減少見于各種貧血，如馬鼻疽、牛結(jié)核、牛羊肝片吸蟲病、仔豬蛔蟲等。臨床意義紅細(xì)胞計(jì)數(shù)白細(xì)胞計(jì)數(shù)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)血細(xì)胞檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)是將一定量的供檢全血經(jīng)一定倍數(shù)（200倍）稀釋后，在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室內(nèi)，數(shù)一定體積的紅細(xì)胞數(shù)，然后再推算出1mm3血液內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)。紅細(xì)胞計(jì)數(shù)

（redbloodcellcount，RBC）

臨床上最常用的是改良紐巴（Neubauer）氏計(jì)數(shù)板，它是由一塊特制的玻璃板構(gòu)成，玻璃板中間有橫溝將其分為三個狹窄的平臺，兩邊的平臺較中間的平臺高0.1mm。中央平臺又有一縱溝相隔，其上各刻有一個計(jì)數(shù)室。每個計(jì)數(shù)室劃分為9個大方格，每一大方格面積為1.0mm2，深度為0.1mm；四角每一大方格劃分為16個中方格，為計(jì)數(shù)白細(xì)胞用。中央一大方格用雙線劃分為25個中方格，每個中方格又劃分為16個小方格，共計(jì)400個小方格，此為紅細(xì)胞計(jì)數(shù)之用。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

用5ml吸管吸取紅細(xì)胞稀釋液3.98ml（或4ml亦可）置于試管中。用沙利氏吸血管吸取全血樣品至2020mm3刻度處（或吸血至刻度10處，紅細(xì)胞稀釋液用2ml）。擦去吸管外壁多余的血液，將此血液吹入試管底部，再吸、吹數(shù)次，以洗出沙利氏管內(nèi)粘附的血細(xì)胞，然后試管口加塞，顛倒混合數(shù)次，再用毛細(xì)吸管（或玻棒）吸取已稀釋好的血液，放于計(jì)數(shù)室與蓋玻片接觸處，即可自然流入計(jì)數(shù)室中。注意充液不可過多或過少，過多則溢出而流入兩側(cè)槽內(nèi)，過少則計(jì)數(shù)池中形成氣泡，致使無法計(jì)數(shù)。

計(jì)數(shù)時，先用低倍鏡，光線要稍暗些，找到計(jì)數(shù)室的格后，把中央的大方格置于視野之中，然后轉(zhuǎn)用高倍鏡。在此中央大方格內(nèi)選擇四角與最中的五個中方格（或用對角線的方法數(shù)五個中方格），每個中方格有16個小方格，所以共計(jì)數(shù)80個小方格。計(jì)數(shù)時注意壓在左邊雙線上的紅細(xì)胞計(jì)在內(nèi)，壓在右邊雙線上的紅細(xì)胞則不計(jì)數(shù)在內(nèi)；同樣，壓在上線的計(jì)入，壓在下線的不計(jì)入，此所謂“數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下”的計(jì)數(shù)法則。計(jì)算1mm3血液中紅細(xì)胞個數(shù)=X/80×400×200×10。X:5個中方格(即80個小方格)內(nèi)的紅細(xì)胞總數(shù)。400:一個大方格，即1mm2面積內(nèi)共有400個小方格。200:稀釋倍數(shù)。10:血蓋片與計(jì)數(shù)板的實(shí)際高度是1/10mm，乘10后則為1.0mm。上式簡化后為:1mm3紅細(xì)胞數(shù)=X×10，000充液量不可過多或過少，過多可使血蓋片浮起，過少則計(jì)數(shù)室中形成小的空氣泡，使計(jì)數(shù)結(jié)果偏低甚至無法計(jì)數(shù)。顯微鏡臺應(yīng)保持水平，否則計(jì)數(shù)室內(nèi)的液體流向一側(cè)而計(jì)數(shù)不準(zhǔn)。沙利氏吸血管或試管，每次用完后，先用清水吸吹數(shù)次，然后用蒸餾水、酒精、乙醚，按次序分別吸吹數(shù)次，干后備下次使用。血細(xì)胞計(jì)數(shù)板用蒸餾水沖洗后，用絨布輕輕擦干即可，切不可用粗布擦試，也不可用酒精、乙醚等溶液沖洗。注意事項(xiàng)血液檢驗(yàn)健康動物紅細(xì)胞數(shù)（萬/立方毫米）動物種類平均數(shù)值變動范圍馬650600~700牛（包括水牛）600550~700綿羊900800~1100山羊13001000~1600豬600500~700雞350250~500紅細(xì)胞增多

可見于因各種原因引起的脫水，進(jìn)而使血液濃縮，表現(xiàn)為紅細(xì)胞相對增多，如大出汗、胸膜炎和腹膜炎的滲出期等。紅細(xì)胞減少

多見于各種類型貧血，如馬傳染性貧血、牛梨形蟲病、仔豬營養(yǎng)性貧血、新生幼畜溶血病、牛血紅蛋白尿病等。此外好，紅細(xì)胞生成不足或破壞增多，亦可導(dǎo)致紅細(xì)胞數(shù)減少。臨床意義白細(xì)胞計(jì)數(shù)

whitebloodcellcount，WBC

一定量的血液用冰醋酸溶液稀釋后，可將紅細(xì)胞破壞，然后再細(xì)胞計(jì)數(shù)板的技術(shù)室內(nèi)計(jì)數(shù)一定容積的白細(xì)胞數(shù)，一次推算出每立方毫米內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)。用1ml吸管吸取白細(xì)胞稀釋液0.38ml（也可吸0.4ml）置一小試管中。用沙利氏管吸取被檢血至20mm3處，擦去管外粘附的血液，吹入小試管中，反復(fù)吸吹數(shù)次，以洗凈管內(nèi)所粘附的白細(xì)胞，充分振蕩混合。再用毛細(xì)吸管或沙利氏吸血管吸取被稀釋的血液，充入已蓋好蓋玻片的計(jì)數(shù)室內(nèi)，靜置1～2min，低倍鏡檢查。將計(jì)數(shù)室四角四個大方格內(nèi)的全部白細(xì)胞依次數(shù)完，注意壓在左線和上線的計(jì)入，壓在右線和下線的不計(jì)入。1mm3血液中白細(xì)胞數(shù)=x/4×20×10X：四角四個大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。x/4：一個大方格（面積為1mm2）內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。20：稀釋倍數(shù)10：血蓋片與計(jì)數(shù)板的實(shí)際高度是0.1mm，乘10后則為1mm。上式簡化后為1mm3血液中白細(xì)胞數(shù)=x×50計(jì)算血液檢驗(yàn)健康動物白細(xì)胞數(shù)（個/立方毫米）動物種類平均數(shù)值變動范圍馬80007000~9000黃牛、奶牛75007000~8000水牛88008000~9000綿羊85008000~9500山羊100007000~13000豬1300011000~16000雞2000018000~30000白細(xì)胞增多可見于多數(shù)細(xì)菌性感染和炎癥，如豬丹毒、豬肺疫、結(jié)核、馬鼻疽、馬腺疫、肺炎、胸膜炎、腹膜炎等。白血病時以白細(xì)胞的顯著增多為特征。白細(xì)胞減少主要見于某些病毒性傳染病，如豬瘟、流感等；某些重度疾病的后期；長期應(yīng)用某些藥物（如氯霉素等）；梨形蟲病等。臨床意義白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

differentialcountofwhitebloodcell，DC

外周血液中的白細(xì)胞主要有5中，即嗜中性白細(xì)胞、嗜酸性白細(xì)胞、嗜堿性白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞，它們各有其特定的生理機(jī)能，在正常時這5種白細(xì)胞之間有一定的比例。但在病理情況下，白細(xì)胞總數(shù)的變化反映機(jī)體防御機(jī)能的一般狀態(tài)，各種白細(xì)胞之間百分比的變化，則反映機(jī)體防御機(jī)能的特殊狀態(tài)。由于白細(xì)胞總數(shù)的增減并不一定表示各類白細(xì)胞平均增多或減少，常常僅限于某一種或兩種白細(xì)胞數(shù)的變化，從而引起白細(xì)胞之間百分比的相對改變。因此，白細(xì)胞計(jì)數(shù)對疾病的診斷具有一般意義，而白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)則具有具體意義，在分析臨床意義時，必須把二者結(jié)合起來。

鏡檢技術(shù)將被檢血液涂片，經(jīng)瑞氏染色或姬姆薩染色，水洗，干燥后鏡檢。先用低倍鏡全面觀察血片上細(xì)胞分布情況及染色質(zhì)量，然后選擇染色良好，細(xì)胞分布均勻的部分，用油鏡進(jìn)行分類。由于比重大的細(xì)胞(粒細(xì)胞，單核細(xì)胞等)多分布在血片的邊緣和尾部，比重小的細(xì)胞(如小淋巴細(xì)胞等)則多分布在血片的頭部和中間。為減少這種細(xì)胞分布的固有誤差并避免重復(fù)計(jì)數(shù)，血片必須按一定方向曲折移動而分類計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)時，為避免重復(fù)和遺漏，可用四區(qū)、三區(qū)或中央曲折計(jì)數(shù)法推移血片，記錄每一區(qū)的各種白細(xì)胞數(shù)。每張血片最少計(jì)數(shù)100個細(xì)胞(如果計(jì)數(shù)200-300個白細(xì)胞，當(dāng)然其百分率更為準(zhǔn)確)，連續(xù)觀察2～3張血片，求出各種白細(xì)胞的百分比。記錄時，可用白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)器，也可事先設(shè)計(jì)一表格，用畫“正”字的方法記錄，以便于統(tǒng)計(jì)百分?jǐn)?shù)。

各類白細(xì)胞的形態(tài)特征

在鏡下辨認(rèn)各種白細(xì)胞時，必須掌握其主要特征，如細(xì)胞大小，核的形狀結(jié)構(gòu)及染色性，胞漿顏色、有無顆粒及顆粒特點(diǎn)等。在同一張血片上對照比較，互相鑒別。1．嗜中性白細(xì)胞。圓形，直徑約10—15μm。胞漿淡紅色，胞漿內(nèi)有多量紫紅色細(xì)小顆粒(染色不佳時則看不清楚)。核染成深紫色，其形狀多樣，核微呈腎形，染色稍淡的稱幼年核，呈帶形或S形，兩邊平行的稱桿狀核，分成2—3葉，在葉之間有細(xì)絲相連的稱分葉核。有時因核葉重疊看不到細(xì)絲，但核量較多，染色質(zhì)致密，也可認(rèn)為是分葉核。2．嗜酸性白細(xì)胞。大小，形態(tài)與嗜中性白細(xì)胞大體相似，唯胞漿內(nèi)含有粗大的鮮紅色顆粒(馬的這種嗜酸性顆粒明顯大于其它家畜)。核多數(shù)為兩葉。3．嗜堿性白細(xì)胞。大小、形態(tài)與嗜中性白細(xì)胞相似，但胞漿內(nèi)含有粗大的深藍(lán)色顆粒，常遮蓋在核上。核分葉不明顯。4．淋巴細(xì)胞。分大小兩種，小淋巴細(xì)胞圓形，直徑約7—10μm，核染成深紫色，圓形或腎形。胞漿很少，常僅呈一小片月牙狀，染成藍(lán)色。大淋巴細(xì)胞直徑約10—19μm，核圓形或腎形。胞漿相對較多，染成天藍(lán)色，在胞漿與核之間有淡染帶。有時內(nèi)含少數(shù)紫紅色大顆粒。5．單核細(xì)胞。是外周血液中最大的細(xì)胞，直徑約為12—24m。核染成紫色，其染色質(zhì)疏松，核形不規(guī)則，呈腎形，多角形，折疊狀等。胞漿較多，染成淺灰藍(lán)色，有時內(nèi)含少量灰塵樣淡紅色小顆粒。馬牛羊駱駝雞豬血液檢驗(yàn)臨床意義健康動物各類白細(xì)胞分類數(shù)值（%）動物種類嗜堿性細(xì)胞嗜酸性細(xì)胞嗜中性細(xì)胞淋巴細(xì)胞大單核細(xì)胞幼稚型桿狀核分葉核馬牛水牛豬羊0.50.50.50.50.54.54.010.02.55.50.51.04.04.04.55.01.053.033.035.035.033.035.056.047.053.057.03.02.03.03.03.0白細(xì)胞增多嗜中性白細(xì)胞增多：見于豬、牛巴氏桿菌病、馬腺疫、肺炎及化膿性感染等。嗜酸性白細(xì)胞增多：見于某些蠕蟲病、過敏性疾病及濕疹等。淋巴細(xì)胞增多：見于結(jié)核、鼻疽、布氏桿菌病、豬瘟及牛梨形蟲病。單核細(xì)胞增多：見于敗血性疾病，某些梨形蟲病及李氏桿菌等。白細(xì)胞減少嗜中性白細(xì)胞減少：見于病毒性傳染病、藥物中毒（如長期服用抗生素）、各種疾病的垂危期。嗜酸性白細(xì)胞減少：見于敗血癥、某些病毒病及牛梨形蟲病等。淋巴細(xì)胞減少：多為嗜中性白細(xì)胞增多而造成的相對性變化。血液檢驗(yàn)在分析嗜中性白細(xì)胞增、減變化時，還應(yīng)注意嗜中性白細(xì)胞的成熟情況。若未成熟的嗜中性白細(xì)胞增多，即出現(xiàn)嗜中性髓樣細(xì)胞、幼稚型和桿狀核嗜中性白細(xì)胞的比例增多，則稱為核左移。若血液內(nèi)分葉核嗜中性白細(xì)胞大量增多，而且核的分葉數(shù)目也增多，則稱為核右移。白細(xì)胞總數(shù)增多的同時，出現(xiàn)核左移，表示骨髓造血機(jī)能加強(qiáng)，機(jī)體處于積極防御階段；而白細(xì)胞總數(shù)減少時見有核左移，則表示骨髓造血機(jī)能減退，機(jī)體的抗病力降低。至于核右移，乃骨髓造血功能衰退的標(biāo)志，多因機(jī)體高度衰竭而引起，常提示預(yù)后慎重。臨床意義尿素能溶解紅細(xì)胞及白細(xì)胞而保存完整形態(tài)的血小板，經(jīng)稀釋后再細(xì)胞計(jì)數(shù)室內(nèi)直接計(jì)數(shù)，以求得1mm3血液內(nèi)的血小板數(shù)。稀釋液中的枸櫞酸鈉有抗凝作用，甲醛可以固定血小板的形態(tài)。血小板計(jì)數(shù)(plateletcount)用1ml吸管吸取稀釋液0.38ml置一小試管中。用沙利氏管吸取被檢血至20mm3處，擦去管外粘附的血液，吹入小試管中，吸吹數(shù)次，充分混允。靜置20min以上，使紅細(xì)胞溶解。充分混勻后再用毛細(xì)吸管或沙利氏吸血管吸取被稀釋的血液，充入已蓋好蓋玻片的計(jì)數(shù)室內(nèi)，靜置10min，高倍鏡觀察。任選計(jì)數(shù)室內(nèi)一個大方格，按計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)。血小板在高倍鏡下，呈橢圓形、原形或不規(guī)則折光小體，注意切勿誤將塵埃等異物計(jì)入。

1mm3血液中血小板數(shù)=x×20×10X：一個大方格內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。20：稀釋倍數(shù)10：血蓋片與計(jì)數(shù)板的實(shí)際高度是0.1mm，乘10后則為1mm。上式簡化后為1mm3血液中血小板數(shù)=x×200計(jì)算臨床意義血小板減少：血小板增多：生成減少破壞增多消耗過多原發(fā)性增多繼發(fā)性增多急性感染、急性出血急性溶血再生障礙性貧血、急性白血病放化療等原發(fā)性血小板減少性紫癜/脾功能亢進(jìn)血管內(nèi)凝血、血栓性血小板減少性紫癜/光學(xué)顯微鏡的使用1.物鏡轉(zhuǎn)換器2.接物鏡3.游標(biāo)卡尺4.載物臺5.聚光器6.彩虹光闌

7.光源8.鏡座

9.電源開關(guān)10.光源滑動變阻器

11.粗調(diào)螺旋12.微調(diào)螺旋13.鏡臂14.鏡筒15.目鏡

16.標(biāo)本移動螺旋操作步驟----1.觀察前準(zhǔn)備顯微鏡從顯微鏡柜或鏡箱內(nèi)拿出時，要用右手緊握鏡臂，左手托住鏡座，平穩(wěn)地將顯微鏡搬運(yùn)到實(shí)驗(yàn)桌上。將顯微鏡放在自己身體的左前方，離桌子邊緣約10cm左右，右側(cè)可放記錄本或繪圖紙。調(diào)節(jié)光照:不帶光源的顯微鏡，可利用燈光或自然光通過反光鏡來調(diào)節(jié)光照，光線較強(qiáng)的天然光源宜用平面鏡；光線較弱的天然光源或人工光源宜用凹面鏡，但不能用直射陽光，直射陽光會影響物像的清晰并刺激眼睛。將10×物鏡轉(zhuǎn)入光孔，將聚光器上的虹彩光圈打開到最大位置，用左眼觀察目鏡中視野的亮度，轉(zhuǎn)動反光鏡，使視野的光照達(dá)到最明亮最均勻?yàn)橹?。自帶光源的顯微鏡，可通過調(diào)節(jié)電流旋鈕來調(diào)節(jié)光照強(qiáng)弱。凡檢查染色標(biāo)本時，光線應(yīng)強(qiáng)；檢查未染色標(biāo)本時，光線不宜太強(qiáng)?？赏ㄟ^擴(kuò)大或縮小光圈、升降聚光器、旋轉(zhuǎn)反光鏡調(diào)節(jié)光線。2.低倍鏡觀察鏡檢任何標(biāo)本都要養(yǎng)成必須先用低倍鏡觀察的習(xí)慣。因?yàn)榈捅剁R視野較大，易于發(fā)現(xiàn)目標(biāo)和確定檢查的位置。將標(biāo)本片放置在載物臺上，用標(biāo)本夾夾住，移動推動器，使被觀察的標(biāo)本處在物鏡正下方，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)旋鈕，使物鏡調(diào)至接近標(biāo)本處，用目鏡觀察并同時用粗調(diào)節(jié)旋鈕慢慢下降載物臺，直至物像出現(xiàn)，再用細(xì)調(diào)節(jié)旋鈕使物像清晰為止。用推動器移動標(biāo)本片，找到合適的目的像并將它移到視野中央進(jìn)行觀察。3.高倍鏡觀察在低倍物鏡觀察的基礎(chǔ)上轉(zhuǎn)換高倍物鏡。較好的顯微鏡，低倍、高倍鏡頭是同焦的，在轉(zhuǎn)換物鏡時要從側(cè)面觀察，避免鏡頭與玻片相撞。然后從目鏡觀察，調(diào)節(jié)光照，使亮度適中，緩慢調(diào)節(jié)粗調(diào)節(jié)旋鈕，慢慢下降載物臺直至物像出現(xiàn)，再用細(xì)調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)至物像清晰為止，找到需觀察的部位，并移至視野中央進(jìn)行觀察,并準(zhǔn)備用油鏡觀察。4．油鏡觀察用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒提起約2cm，將油鏡轉(zhuǎn)至正下方。在玻片標(biāo)本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。從側(cè)面注視，用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒小心地降下，使油鏡浸在香柏油中，其鏡頭幾乎與標(biāo)本相接，應(yīng)特別注意不能壓在標(biāo)本上，更不可用力過猛，否則不僅壓碎玻片，也會損壞鏡頭。從目鏡內(nèi)觀察，進(jìn)一步調(diào)節(jié)光線，使光線明亮，再用粗調(diào)節(jié)器將鏡筒徐徐上升，直至視野出現(xiàn)物像為止，然后用細(xì)調(diào)節(jié)器校正焦距。如油鏡已離開油面而仍未見物像，必須再從側(cè)面觀察，將油鏡降下，重復(fù)操作至物像看清為止。5.觀察完后復(fù)原下降載物臺，將油鏡頭轉(zhuǎn)出，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，再用擦鏡紙蘸少許乙醚乙醇混合液擦去鏡頭上殘留油跡，最后再用擦鏡紙擦拭2—3下即可，（注意向一個方向擦拭）。將各部分還原，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡頭不與載物臺通光孔相對，而是成八字形位置，再將載物臺下降至最低，降下聚光器，反光鏡與聚光器垂直，最后用柔軟紗布清潔載物臺等機(jī)械部分，然后將顯微鏡放回柜內(nèi)或鏡箱中。三、血液分析儀及其在獸醫(yī)臨床上的應(yīng)用

血液分析儀是目前臨床血液檢驗(yàn)常用檢測儀器。20世紀(jì)40年代后期，美國人庫爾特（W.H.Coulter）發(fā)明電子血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀并申請專利。其特點(diǎn)是檢測速度快、精確度高、操作簡便。目前，各類血液分析儀主要能完成兩大功能：①細(xì)胞計(jì)數(shù)功能。②細(xì)胞分類功能。血液分析儀檢測原理主要是電阻抗法。

電阻抗法血液分析儀器組成

①信號發(fā)生器：通過小孔的各種血細(xì)胞都能產(chǎn)生電阻信號，信號電平的高低與細(xì)胞的大小成正比。②放大器：血細(xì)胞通過小孔時產(chǎn)生的脈沖信號非常微弱，需通過電子放大器，將微伏級信號放大為伏級脈沖信號，才可觸發(fā)電路。③閾值調(diào)節(jié)：在計(jì)數(shù)不同細(xì)胞時，應(yīng)調(diào)節(jié)閾值電平，以給出合適的閾值度，使計(jì)數(shù)結(jié)果盡量符合實(shí)際水平。④甄別器：各種微粒(血細(xì)胞、細(xì)胞碎片、雜質(zhì)等)通過小孔時均可產(chǎn)生相應(yīng)脈沖信號；甄別器則根據(jù)閾值提供的參考電平，將低于參考電平的各種非計(jì)數(shù)目標(biāo)的假信號去掉，以提高計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。⑤整形器：經(jīng)放大和甄別后的細(xì)胞脈沖信號，波形不一致，必須經(jīng)過整形器調(diào)整為一致標(biāo)準(zhǔn)的平頂波形后，才可觸發(fā)計(jì)數(shù)電路。⑥計(jì)數(shù)系統(tǒng)：血細(xì)胞產(chǎn)生的脈沖信號，經(jīng)過放大、甄別、整形后，送入計(jì)數(shù)系統(tǒng)；儀器對大小不同的脈沖進(jìn)行選擇，區(qū)分出不同類型的細(xì)胞并分別進(jìn)行計(jì)數(shù)。

電阻抗法檢測原理

又稱庫爾特原理(Coulterprinciple)白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)原理

儀器將體積為35～450fL的血細(xì)胞，分為256個通道（channel）。每個通道：1.64fl。根據(jù)細(xì)胞大小，分別置于不同的通道中，顯示血細(xì)胞體積分布直方圖(Histogram)。經(jīng)溶血素處理脫水后，血細(xì)胞體積大小發(fā)生了變化！第一群（35～90fl）小細(xì)胞區(qū)：淋巴細(xì)胞（體積最?。?。第二群（90～160fl）單個核細(xì)胞區(qū)，（中間細(xì)胞）：單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、原始、幼稚細(xì)胞、異常細(xì)胞等。第三群（160fl以上）大細(xì)胞區(qū)：嗜中性粒細(xì)胞（體積最大）。3590160300400450(fl)正常白細(xì)胞分類模式圖（直方圖）%紅細(xì)胞檢測原理

紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血細(xì)胞比容測定與白細(xì)胞計(jì)數(shù)相似100200300400(fl)%血小板檢測原理

血小板計(jì)數(shù)（platelet,PLT）：隨紅細(xì)胞在一個系統(tǒng)中進(jìn)行檢測%

102030(fl)直方圖在2～28fl，主要在2～

15fl（不同儀器不一）四、血液生化檢驗(yàn)分光光度法原理

分光光度法，常被用來測定溶液中存在的光吸收物質(zhì)的濃度，其基本原理是根據(jù)Lambert和Beer定律。

Lambert定律

一束平行單色光垂直照射于一均勻物質(zhì)（溶液）時，由于溶液吸收一部分光能，使光的強(qiáng)度減弱，若溶液的濃度不變，則溶液的厚度愈大，光線強(qiáng)度的減弱也愈顯著。設(shè)：入射光強(qiáng)度為I0L表示溶液的厚度（即光程）出射光（透過光）強(qiáng)度為I根據(jù)輻射能理論推導(dǎo)，I0與I之間關(guān)系為lg（I0/I）=K1L（1）K1是常數(shù)，受光線波長、溶液性質(zhì)、溶液濃度的影響。

Beer定律

當(dāng)一束單色光通過一溶液時，光能被溶液介質(zhì)吸收一部分，若溶液的厚度不變，則溶液濃度C愈大，光吸收愈大，透射光線強(qiáng)度的減弱也愈顯著，光強(qiáng)度減弱的量與溶液濃度增加量成正比

lg（I0/I）=K2C（2）K2為吸收系數(shù)，是常數(shù)，溶液對光吸收的大小與溶液濃度C成正比。Lambert-Beer定律（又稱吸收定律）

上二式合并（即（l）與（2）合并）

lg（I0/I）=CL令A(yù)=lg（I0/I），T=I/I0

；則A=CL，A=-lgT。T為透光率，A為吸光度（光密度、消光度）。其中為常數(shù)，又稱消光系數(shù)（extinctioncoefficient），表示物質(zhì)對光線吸收的能力，其值因物質(zhì)種類和光線波長而異。對于相同物質(zhì)和相同波長的單色光則消光系數(shù)不變。分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)

光源：鎢燈和氫燈（或氘燈）單色器：分解為單一波長光的裝置狹縫：調(diào)節(jié)入射單色光的強(qiáng)度，形成平行光線吸收池：又稱比色杯、比色皿、比色池，裝待測溶液用檢測系統(tǒng)：感受光能，轉(zhuǎn)化為電能，輸出A值、T值。幾類分光光度計(jì)22PC型可見光分光光度計(jì)UNICO2000型S54型紫外分光光度計(jì)UV8500型紫外分光光度計(jì)比色杯（比色皿）玻璃比色杯石英比色杯熒光比色杯比色杯使用注意事項(xiàng)

1、拿取比色皿時，只能用手指接觸兩側(cè)的毛玻璃，避免接觸光學(xué)面,光玻璃面對著光路。

2、不得將光學(xué)面與硬物或臟物接觸。盛裝溶液時，液面高于光路,高度為比色皿的2/3處即可，光學(xué)面如有殘液可先用濾紙輕輕吸附，然后再用檫鏡紙擦拭。

3、測定時濃度由低到高，進(jìn)行潤洗。比色皿在使用后，應(yīng)立即用水沖洗干凈。必要時可用1：1的鹽酸浸泡，然后用水沖洗干凈。

4、不能將比色皿放在火焰或電爐上進(jìn)行加熱或干燥箱內(nèi)烘烤；

5、在測量時如對比色皿有懷疑，可自行檢測。微量移液器吸嘴裝在吸液桿上，應(yīng)套牢避免間隙。依據(jù)所需容量旋轉(zhuǎn)手輪，使數(shù)輪顯示所需值。輕輕地將推動按鈕下壓，使推動按鈕推移至第一停點(diǎn)位置。手持取液器垂直浸入溶液中，吸嘴浸入深度為2-4mm，停留2-3秒后緩慢放松按鈕，即回到原來位置，溶液吸入后稍停即可將吸嘴移出液面。將取液器吸嘴置于排液容器內(nèi)。使吸嘴尖緊貼容器內(nèi)壁，按壓推動按鈕至第二停點(diǎn)位置，使溶液排盡，松開按鈕。移液完畢，按壓卸嘴按鈕，將吸嘴脫卸。分光光度計(jì)的使用722型分光光度計(jì)樣品測試操作①打開電源開關(guān)，使儀器預(yù)熱20分鐘②用“波長設(shè)置”按鈕將波長設(shè)置在您將要使用的分析波長位置上③打開樣品室蓋，將參比溶液倒入比色皿中放入比色皿架靠近測定者一端位置，并將樣品溶液倒入比色皿中放入比色皿架的其它位置，蓋好樣品室蓋。④拉動比色皿架拉桿一小格使比色皿架擋住光路，按“0%T”鍵調(diào)透射比零⑤推入比色皿架使參比溶液位于光路中，蓋好樣品室蓋，按“100%T”調(diào)100%透射比⑥按“方式鍵”（MODE）將測試方式設(shè)置為吸光度方式(A)⑦打開樣品室蓋，將盛有溶液的比色皿分別插入比色皿槽中，蓋上樣品室蓋⑧將參比溶液推入或拉入光路中，按“100%T”調(diào)A零⑨

將被測溶液拉入光路中，此時，顯示器上所顯示是被測樣品的吸光度參數(shù)⑩實(shí)驗(yàn)完成后，關(guān)閉電源，洗凈比色皿，并蓋好蓋布。光路光路血液葡萄糖測定(費(fèi)吳氏法)血液非蛋白氮測定血清總蛋白、白蛋白及球蛋白測定（雙縮脲法）血清尿素測定（二乙酰-肟法）(一)血液葡萄糖測定(費(fèi)吳氏法)原理無蛋白血濾液中的葡萄糖，具有還原性，與堿性高銅混合加熱后，將高銅還原成氧化低銅而呈紅色沉淀，此沉淀物再被磷鉬酸氧化成藍(lán)色物質(zhì)。與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖管比色，而求得血糖含量。試劑0.25％苯甲酸溶液葡萄糖貯存標(biāo)準(zhǔn)液(1ml含10mg葡萄糖)

葡萄糖應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液(1ml≌0.1毫克葡萄糖)

堿性銅溶液磷鉬酸試劑

10％鎢酸鈉溶液

1/3mol／L硫酸溶液操作方法

鎢酸鈉法制備無蛋白血濾液50ml：取小燒杯或大試管一支，先加入蒸餾水7ml，再加入新鮮抗凝血1ml，充分混勻，使之溶血。然后，加入10％鎢酸鈉溶液1.0ml，混勻。最后，徐徐加入2／3N硫酸溶液1ml，隨加隨搖，充分混勻。放置5～10min后，用優(yōu)質(zhì)濾紙過濾或離心沉淀，即可獲得無色清亮無蛋白血濾液以供備用。

此法所得無蛋白血濾液近中性，不僅適用于葡萄糖的測定，還可用于非蛋白氮、尿素氮，肌酐等的測定。

步驟測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管1無蛋白血濾液（ml）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（ml）蒸餾水（ml）堿性銅溶液（ml）2002020200222混合后，在沸水中煮沸8min，取出后浸于冷水中2-3min（不可搖動）3磷鉬酸試劑2ml2ml2ml4混合后，于室溫下靜置2min5蒸餾水加至25ml25ml25ml6混勻，待管內(nèi)二氧化碳逸出后比色，選用620nm濾光板比色，讀取各管密度值取血糖測定管3支，分別標(biāo)明測定管、標(biāo)準(zhǔn)管及空白管，按表操作。全血血糖含量（mg/100ml）＝測定管光密度/標(biāo)準(zhǔn)管光密度×0.2×100/0.2臨床意義增高病理性增高糖尿病、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)腎上腺皮質(zhì)機(jī)能亢進(jìn)暫時性增高全麻后、肺炎、腎炎、顱內(nèi)壓增高、中樞神經(jīng)感染缺氧窒息減低生理性減低病理性減低胰島素分泌過多、嚴(yán)重貧血腎功能衰竭的慢性腎炎及功能減弱、甲狀腺功能減弱、腦垂休功能減退。多見長時間的劇烈運(yùn)動過后、過分饑餓及哺乳期竺(二)血液非蛋白氮測定原理血中的非蛋白氮物質(zhì)主要有尿素、尿酸、肌酸和肌醇等，均為蛋白質(zhì)代謝中間產(chǎn)物或最終產(chǎn)物。由于這些化合物不被蛋白沉淀，故測定無蛋白血濾液的含氮量即為非蛋白氮含量。試劑硫酸銨貯存標(biāo)準(zhǔn)液(1ml≌1mg氮)

硫酸銨應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)液(1ml≌0.03mg氮)50%硫酸溶液碘化汞鉀試劑貯存液碘化汞鉀試劑應(yīng)用液步驟測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管1無蛋白血濾液（ml）硫酸銨標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液（ml）50%硫酸溶液（ml）玻璃珠（粒）100.21010.21000.202

將測定管置酒精燈上以小火加熱消化，至管內(nèi)充滿白煙，管底液體有黑色轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色透明時為止，冷卻30min。3蒸餾水加至（ml）7774碘化汞鉀試劑應(yīng)用液（ml）3335

混合后，待10min，用480nm波長或藍(lán)色濾光板光電比色，以空白管校正光密度至0點(diǎn)，分別讀取各管讀數(shù)。此項(xiàng)操作應(yīng)在20min內(nèi)完成。

操作方法取草酸鉀抗凝全血（不能用雙草酸鹽抗凝血），以鎢酸鈉法制備無蛋白血濾液后，按表操作。全血非蛋白氮含量（mg/100ml）＝測定管光密度/標(biāo)準(zhǔn)管光密度×0.03×100/0.1降低增高急、慢性腎炎尿毒癥腎盂積水泌尿系結(jié)核、結(jié)石阻塞嚴(yán)重?zé)齻罅繃I吐腹瀉腸梗阻血紅蛋白尿甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)末期腎上腺機(jī)能不全重金屬中毒等中毒性肝炎膽道術(shù)后妊娠晚期臨床意義(三)血清總蛋白、白蛋白及球蛋白測定原理蛋白質(zhì)中的肽鍵，與堿性酒石酸鉀/納/銅作用，產(chǎn)生紫色反應(yīng)，成為雙縮脲反應(yīng)。根據(jù)顏色的深淺，與經(jīng)同樣處理的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液比色，即可求得血液蛋白質(zhì)含量。試劑27.8%硫酸鈉-亞硫酸鈉混合液雙縮脲試劑原理：當(dāng)脲加熱至180oC時，兩分子脲縮合，放出一分子氨而形成雙縮脲。雙縮脲在堿性條件下能與硫酸銅生成紫紅色絡(luò)合物，即發(fā)生雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中含有肽鍵，與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似，故蛋白質(zhì)與堿性硫酸銅也能形成紫紅色絡(luò)合物,在一定條件下其顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，可用來進(jìn)行蛋白質(zhì)定量。最大波長位于540nm處。本法測定蛋白質(zhì)范圍1-10mg。雙縮脲法測定蛋白質(zhì)濃度操作方法1、制備標(biāo)準(zhǔn)血清及測定其總蛋白量若無已備標(biāo)準(zhǔn)血清時，可收集多份健畜血清混合而成標(biāo)準(zhǔn)血清，并用微量定氮法測其總蛋白量。微量定氮法取血清1ml置于50ml量瓶中，用生理鹽水做50倍稀釋，混勻，供測總蛋白。另用血清制備無蛋白血濾液（同全血制備無蛋白血濾液法），供測非蛋白氮。然后按后表操作：步驟總蛋白測定管非蛋白氮測定管標(biāo)