不同預(yù)張力下乙醇的血管活性差異及其機制研究課件

不同預(yù)張力下乙醇的血管活性差異及其機制研究

指導(dǎo)老師：夏強教授

錢令波高琴錢韻羅芳軍馮磊魏吉清吳笑張昕霞卓婷婷鄭群

0301）BACKGROUND酒作為一種世界性的飲料，以其獨特的方式浸潤著社會。但長期過量飲酒會對健康帶來嚴重影響。早在1985年，世界衛(wèi)生組織（WHO）就把過量飲酒帶來的問題確定為全球性的公共衛(wèi)生健康問題。醉酒與脂肪肝、肝硬化、胃炎、胃潰瘍、冠心病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙等疾病的發(fā)生均有密切關(guān)系。近年來，隨著心血管系統(tǒng)疾病發(fā)病率的逐漸增高，研究乙醇對心血管系統(tǒng)的影響已越來越受到人們的關(guān)注。BACKGROUND乙醇對心血管系統(tǒng)功能的影響十分明顯，大量研究稱，長期大量飲酒可引起高血壓、心絞痛、腦卒中，可產(chǎn)生酒精性心肌病和心律失常

。但新近研究表明，給藥途徑和劑量不同的乙醇對心血管的效應(yīng)也有所不同。研究表明，不同濃度乙醇對內(nèi)皮細胞NO、內(nèi)皮素等物質(zhì)的分泌量存在影響，因此，血管內(nèi)皮存在與否可能會影響乙醇的血管活性作用。同時還觀察到，乙醇可引起機體許多組織細胞鈉離子通道、鉀離子通道、鈣離子通道和靜息及動作電位的改變。因此，乙醇的血管效應(yīng)也可能通過影響血管平滑肌細胞離子通道的活性而介導(dǎo)。有人還發(fā)現(xiàn)，飲酒時情緒激動容易醉酒，由此我們猜測，不同預(yù)張力下血管對乙醇的反應(yīng)性存在差異；在高血壓情況下或臨床應(yīng)用降壓藥物時，可能會影響乙醇對血管的作用。OBJECTIVE研究不同濃度乙醇對離體大鼠胸主動脈環(huán)的作用：收縮or舒張？

觀察不同預(yù)張力對乙醇血管活性的影響探討乙醇對血管的作用是否由鈣通道介導(dǎo)：電壓依賴性鈣通道？受體操縱性鈣通道？Ryanodine

受體？IP3受體？SD大鼠organbath系統(tǒng)METHODSMETHODS胸主動脈環(huán)的制備取大鼠胸主動脈→

置于冰K-H液→去除周圍結(jié)締組織→剪成約3、4mm寬的8段血管環(huán)

→置于含K-H液的浴槽內(nèi)→將血管環(huán)張力調(diào)至預(yù)張力（3,1,1.5,2,2.5,3,3.5,4g）

→平衡60min。一、乙醇對PE及KCl預(yù)收縮的主動脈環(huán)張力的影響METHODS

實驗分組乙醇對PE及KCl預(yù)收縮的內(nèi)皮完整主動脈環(huán)張力的影響乙醇對PE及KCl預(yù)收縮的去內(nèi)皮主動脈環(huán)張力的影響間隔5min累積加入乙醇（0.1‰～3‰）測定不同濃度乙醇灌流時血管環(huán)的平均張力

加入KCl（610-2mol/L）

加入PE（10-6mol/L）去內(nèi)皮內(nèi)皮完整待收縮穩(wěn)定洗脫待收縮穩(wěn)定間隔5min累積加入乙醇（0.1‰～3‰）METHODS二、乙醇對CaCl2量效曲線的影響胸主動脈環(huán)的制備使用去內(nèi)皮胸主動脈環(huán)，預(yù)張力均設(shè)為3g（最適預(yù)張力），其余如前述標本的預(yù)處理如前述實驗分組換成無鈣K-H溶液→加入3‰（最大效應(yīng)濃度）乙醇→孵育30min→再換無鈣K-H溶液→加入終濃度0.06mol/LKCl溶液或終濃度10-6mol/L的苯腎上腺素（PE）誘發(fā)血管收縮達穩(wěn)定后→每隔5min累積加入CaCl2（0.25～5mmol/L）→觀察血管環(huán)張力的變化。（見下圖）無鈣K-H液灌流

METHODSKCl對照KCl+乙醇

PE對照

PE+乙醇30min后待收縮穩(wěn)定加入KCl（0.06mol/L）再換無鈣K-H液間隔5min累積加入CaCl2（0.25-5mmol/L）觀察血管環(huán)張力變化無鈣K-H液灌流

無鈣K-H液灌流

無鈣K-H液灌流

再換無鈣K-H液再換無鈣K-H液再換無鈣K-H液加入KCl（0.06mol/L）加入PE（10-6mol/L）加入PE（10-6mol/L）加入終濃度3‰乙醇

孵育30min加入終濃度3‰乙醇30min后孵育30min待收縮穩(wěn)定待收縮穩(wěn)定待收縮穩(wěn)定間隔5min累積加入CaCl2（0.25-5mmol/L）

間隔5min累積加入CaCl2（0.25-5mmol/L）

間隔5min累積加入CaCl2（0.25-5mmol/L）觀察血管環(huán)張力變化觀察血管環(huán)張力變化觀察血管環(huán)張力變化METHODS實驗分組（見下圖）

（1）Ver組：在去內(nèi)皮的血管實驗中，加入10-6mol/L的L型鈣通道阻斷劑維拉帕米（Ver），孵育30min后，洗脫，加入PE（10-6mol/L）待收縮穩(wěn)定后，再觀察血管環(huán)張力的變化20min。（2）Ver+乙醇組：在去內(nèi)皮的血管實驗中，加入10-6mol/L的Ver，孵育30min后，洗脫，加入PE（10-6mol/L）待收縮穩(wěn)定后，再加入終濃度3‰乙醇，共孵育20min，觀察血管環(huán)張力的變化。（3）Ver+RR+乙醇組：在去內(nèi)皮的血管實驗中，加入10-6mol/L的Ver，5min后，加入10-5mol/L的ryanodine受體阻斷劑釕紅（rutheniumred,RR），共孵育25min后，洗脫，加入PE（10-6mol/L）待收縮穩(wěn)定后，再加入終濃度3‰乙醇共孵育20min，觀察血管環(huán)張力的變化。（4）Ver+HP+乙醇組：在去內(nèi)皮的血管實驗中，加入10-6mol/L的Ver，5min后，加入50mg/L的IP3受體阻斷劑肝素（heparin,HP），共孵育25

min后，洗脫，加入PE（10-6mol/L）待收縮穩(wěn)定后，再加入終濃度3‰乙醇共孵育20min，觀察血管環(huán)張力的變化。METHODSVer(10-6mol/L)30minVer組Ver+乙醇組

Ver+RR+乙醇組

Ver+HP+乙醇組PE(10-6mol/L)30min穩(wěn)定10minRR10-5mol/L5min

穩(wěn)定10minHP50mg/L5min

穩(wěn)定10min乙醇（3‰）

20min乙醇（3‰）

20min乙醇（3‰）

20minRESULTS一、乙醇對KCl預(yù)收縮的主動脈環(huán)張力的影響Fig.1A.Concentration-dependenteffectofethanol(0.1‰-3‰)in6×10?2MKClprecontractedrataorticringswithendotheliumatdifferentrestingtension(1g-4g).DataareexpressedasMean±SD(n=3-5).*P<0.05,vs.Control-3g.RESULTS二、乙醇對PE預(yù)收縮的主動脈環(huán)張力的影響Fig.2A.Concentration-dependenteffectofethanol(0.1‰-3‰)in10-6MPEprecontractedrataorticringswithendotheliumatdifferentrestingtension(1g-4g).

DataareexpressedasMean±SD(n=3-6).

RESULTSFig.2B.Concentration-dependenteffectofethanol(0.1‰-3‰)in10-6MPEprecontractedrataorticringswithoutendotheliumatdifferentrestingtension(1g-4g).

DataareexpressedasMean±SD(n=3-6).*P<0.05,**P<0.01,vs.Control-3g.RESULTS三、乙醇對CaCl2量效曲線的影響Fig.3A.Effectofethanolat3‰ontheCa2+(2.510-4-510-3M)-inducedcontractionofrataorticrings(theresttensionwas3g)withoutendotheliumpretreatedwith6×10?2MKCl.DataareexpressedasMean±SD(n=5-6).*P<0.05,**P<0.01,vs.Control.RESULTS四、維拉帕米（verapamil,Ver）預(yù)處理下乙醇的血管作用Fig.4.Effectofethanolat3‰inrataorticrings(theresttensionwas3g)withoutendotheliumprecontractedwithPE(10-6M)afterverapamil(Ver,10-6M)pretreatment.

DataareexpressedasMean±SD(n=5-6).*P<0.05,**P<0.01,vs.Ver;#P<0.05,vs.Ver+Ethanol.Ver:onlypretreatedwithverapamil;Ver+Ethanol:ethanoltreatmentafterverapamilincubation;Ver+RR+Ethanol:ethanoltreatmentafterverapamilandrutheniumred(RR,10?5M)incubation;Ver+HP+Ethanol:ethanoltreatmentafterverapamilandheparin(HP,50mg/L)incubationCONCLUSION乙醇具有血管活性作用。這種作用具有雙重性，并有一定的濃度依賴性。血管內(nèi)皮存在與否對乙醇的血管效應(yīng)有影響不同預(yù)張力下，乙醇的血管活性存在差異，3g為乙醇發(fā)揮舒血管活性的最適預(yù)張力促進血管平滑肌細胞膜上電壓操縱性鈣通道的開放，增加外鈣內(nèi)流和抑制受體依賴性鈣通道的開放，減少外鈣內(nèi)流可能是介導(dǎo)乙醇血管活性的一個重要機制乙醇可能通過激活I(lǐng)P3途徑引起肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣釋放增加而使血管收縮，而Ryanodine受體可能不參與乙醇的血管活性作用PERSPECTIVE本次研究，在一定程度上明確了乙醇對血管的作用，并闡明了部分機理，為進一步研究乙醇這一與人類生活和健康息息相關(guān)化學(xué)物質(zhì)的心血管生理、藥理機制，為指導(dǎo)人們適度飲酒及更多地了解疾病情況下乙醇的效應(yīng)，為過量酒精引起的臨床心血管疾病的防治提供了實驗和理論依據(jù)由于時間有限，本次研究型實驗僅對乙醇血管效應(yīng)的部分機制作了探討，今后可進一步考慮從其他離子通道（特別是牽張敏感性離子通道）、內(nèi)皮因素（NO、內(nèi)皮素等）等其他角度研究乙醇的血管活性機制，并比較各種因素對乙醇血管活性作用的影響強度及其相互作用，明確乙醇對血管的綜合作用REFERENCES馬佳佳,馬恒,王躍民,李紅梅,裴建明.

葛根素對大鼠腹主動脈的舒張作用及其機制.

第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2003,24(24):3321～2234蔣惠娣,汝海龍,王霄霞,夏強,屠潔.

木犀草素對大鼠主動脈的舒張作用及相關(guān)機制研究.

中國藥學(xué)雜志,2005,40(6):427～430

金紅峰，周云連，陳云龍，單綺嫻，陸源，夏強.

石斛對大鼠胸主動脈環(huán)的舒張作用.

中國中藥雜志,2003,28(11):1060～1062張紅雨，徐長慶，李鴻珠，李寶馨，張艷橋，張一娜.

白藜蘆醇對大鼠離體胸主動脈環(huán)的舒張作用.

中國中藥雜志,2005,30(16):128