不同預(yù)張力下乙醇的血管活性差異及其機(jī)制研究課件

不同預(yù)張力下乙醇的血管活性差異及其機(jī)制研究

指導(dǎo)老師：夏強(qiáng)教授

錢令波高琴錢韻羅芳軍馮磊魏吉清吳笑張昕霞卓婷婷鄭群

0301）BACKGROUND酒作為一種世界性的飲料，以其獨(dú)特的方式浸潤(rùn)著社會(huì)。但長(zhǎng)期過量飲酒會(huì)對(duì)健康帶來嚴(yán)重影響。早在1985年，世界衛(wèi)生組織（WHO）就把過量飲酒帶來的問題確定為全球性的公共衛(wèi)生健康問題。醉酒與脂肪肝、肝硬化、胃炎、胃潰瘍、冠心病和中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙等疾病的發(fā)生均有密切關(guān)系。近年來，隨著心血管系統(tǒng)疾病發(fā)病率的逐漸增高，研究乙醇對(duì)心血管系統(tǒng)的影響已越來越受到人們的關(guān)注。BACKGROUND乙醇對(duì)心血管系統(tǒng)功能的影響十分明顯，大量研究稱，長(zhǎng)期大量飲酒可引起高血壓、心絞痛、腦卒中，可產(chǎn)生酒精性心肌病和心律失常

。但新近研究表明，給藥途徑和劑量不同的乙醇對(duì)心血管的效應(yīng)也有所不同。研究表明，不同濃度乙醇對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞NO、內(nèi)皮素等物質(zhì)的分泌量存在影響，因此，血管內(nèi)皮存在與否可能會(huì)影響乙醇的血管活性作用。同時(shí)還觀察到，乙醇可引起機(jī)體許多組織細(xì)胞鈉離子通道、鉀離子通道、鈣離子通道和靜息及動(dòng)作電位的改變。因此，乙醇的血管效應(yīng)也可能通過影響血管平滑肌細(xì)胞離子通道的活性而介導(dǎo)。有人還發(fā)現(xiàn)，飲酒時(shí)情緒激動(dòng)容易醉酒，由此我們猜測(cè)，不同預(yù)張力下血管對(duì)乙醇的反應(yīng)性存在差異；在高血壓情況下或臨床應(yīng)用降壓藥物時(shí)，可能會(huì)影響乙醇對(duì)血管的作用。OBJECTIVE研究不同濃度乙醇對(duì)離體大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的作用：收縮or舒張？

觀察不同預(yù)張力對(duì)乙醇血管活性的影響探討乙醇對(duì)血管的作用是否由鈣通道介導(dǎo)：電壓依賴性鈣通道？受體操縱性鈣通道？Ryanodine

受體？IP3受體？SD大鼠organbath系統(tǒng)METHODSMETHODS胸主動(dòng)脈環(huán)的制備取大鼠胸主動(dòng)脈→

置于冰K-H液→去除周圍結(jié)締組織→剪成約3、4mm寬的8段血管環(huán)

→置于含K-H液的浴槽內(nèi)→將血管環(huán)張力調(diào)至預(yù)張力（3,1,1.5,2,2.5,3,3.5,4g）

→平衡60min。一、乙醇對(duì)PE及KCl預(yù)收縮的主動(dòng)脈環(huán)張力的影響METHODS

實(shí)驗(yàn)分組乙醇對(duì)PE及KCl預(yù)收縮的內(nèi)皮完整主動(dòng)脈環(huán)張力的影響乙醇對(duì)PE及KCl預(yù)收縮的去內(nèi)皮主動(dòng)脈環(huán)張力的影響間隔5min累積加入乙醇（0.1‰～3‰）測(cè)定不同濃度乙醇灌流時(shí)血管環(huán)的平均張力

加入KCl（610-2mol/L）

加入PE（10-6mol/L）去內(nèi)皮內(nèi)皮完整待收縮穩(wěn)定洗脫待收縮穩(wěn)定間隔5min累積加入乙醇（0.1‰～3‰）METHODS二、乙醇對(duì)CaCl2量效曲線的影響胸主動(dòng)脈環(huán)的制備使用去內(nèi)皮胸主動(dòng)脈環(huán)，預(yù)張力均設(shè)為3g（最適預(yù)張力），其余如前述標(biāo)本的預(yù)處理如前述實(shí)驗(yàn)分組換成無鈣K-H溶液→加入3‰（最大效應(yīng)濃度）乙醇→孵育30min→再換無鈣K-H溶液→加入終濃度0.06mol/LKCl溶液或終濃度10-6mol/L的苯腎上腺素（PE）誘發(fā)血管收縮達(dá)穩(wěn)定后→每隔5min累積加入CaCl2（0.25～5mmol/L）→觀察血管環(huán)張力的變化。（見下圖）無鈣K-H液灌流

METHODSKCl對(duì)照KCl+乙醇

PE對(duì)照

PE+乙醇30min后待收縮穩(wěn)定加入KCl（0.06mol/L）再換無鈣K-H液間隔5min累積加入CaCl2（0.25-5mmol/L）觀察血管環(huán)張力變化無鈣K-H液灌流

無鈣K-H液灌流

無鈣K-H液灌流

再換無鈣K-H液再換無鈣K-H液再換無鈣K-H液加入KCl（0.06mol/L）加入PE（10-6mol/L）加入PE（10-6mol/L）加入終濃度3‰乙醇

孵育30min加入終濃度3‰乙醇30min后孵育30min待收縮穩(wěn)定待收縮穩(wěn)定待收縮穩(wěn)定間隔5min累積加入CaCl2（0.25-5mmol/L）

間隔5min累積加入CaCl2（0.25-5mmol/L）

間隔5min累積加入CaCl2（0.25-5mmol/L）觀察血管環(huán)張力變化觀察血管環(huán)張力變化觀察血管環(huán)張力變化METHODS實(shí)驗(yàn)分組（見下圖）

（1）Ver組：在去內(nèi)皮的血管實(shí)驗(yàn)中，加入10-6mol/L的L型鈣通道阻斷劑維拉帕米（Ver），孵育30min后，洗脫，加入PE（10-6mol/L）待收縮穩(wěn)定后，再觀察血管環(huán)張力的變化20min。（2）Ver+乙醇組：在去內(nèi)皮的血管實(shí)驗(yàn)中，加入10-6mol/L的Ver，孵育30min后，洗脫，加入PE（10-6mol/L）待收縮穩(wěn)定后，再加入終濃度3‰乙醇，共孵育20min，觀察血管環(huán)張力的變化。（3）Ver+RR+乙醇組：在去內(nèi)皮的血管實(shí)驗(yàn)中，加入10-6mol/L的Ver，5min后，加入10-5mol/L的ryanodine受體阻斷劑釕紅（rutheniumred,RR），共孵育25min后，洗脫，加入PE（10-6mol/L）待收縮穩(wěn)定后，再加入終濃度3‰乙醇共孵育20min，觀察血管環(huán)張力的變化。（4）Ver+HP+乙醇組：在去內(nèi)皮的血管實(shí)驗(yàn)中，加入10-6mol/L的Ver，5min后，加入50mg/L的IP3受體阻斷劑肝素（heparin,HP），共孵育25

min后，洗脫，加入PE（10-6mol/L）待收縮穩(wěn)定后，再加入終濃度3‰乙醇共孵育20min，觀察血管環(huán)張力的變化。METHODSVer(10-6mol/L)30minVer組Ver+乙醇組

Ver+RR+乙醇組

Ver+HP+乙醇組PE(10-6mol/L)30min穩(wěn)定10minRR10-5mol/L5min

穩(wěn)定10minHP50mg/L5min

穩(wěn)定10min乙醇（3‰）

20min乙醇（3‰）

20min乙醇（3‰）

20minRESULTS一、乙醇對(duì)KCl預(yù)收縮的主動(dòng)脈環(huán)張力的影響Fig.1A.Concentration-dependenteffectofethanol(0.1‰-3‰)in6×10?2MKClprecontractedrataorticringswithendotheliumatdifferentrestingtension(1g-4g).DataareexpressedasMean±SD(n=3-5).*P<0.05,vs.Control-3g.RESULTS二、乙醇對(duì)PE預(yù)收縮的主動(dòng)脈環(huán)張力的影響Fig.2A.Concentration-dependenteffectofethanol(0.1‰-3‰)in10-6MPEprecontractedrataorticringswithendotheliumatdifferentrestingtension(1g-4g).

DataareexpressedasMean±SD(n=3-6).

RESULTSFig.2B.Concentration-dependenteffectofethanol(0.1‰-3‰)in10-6MPEprecontractedrataorticringswithoutendotheliumatdifferentrestingtension(1g-4g).

DataareexpressedasMean±SD(n=3-6).*P<0.05,**P<0.01,vs.Control-3g.RESULTS三、乙醇對(duì)CaCl2量效曲線的影響Fig.3A.Effectofethanolat3‰ontheCa2+(2.510-4-510-3M)-inducedcontractionofrataorticrings(theresttensionwas3g)withoutendotheliumpretreatedwith6×10?2MKCl.DataareexpressedasMean±SD(n=5-6).*P<0.05,**P<0.01,vs.Control.RESULTS四、維拉帕米（verapamil,Ver）預(yù)處理下乙醇的血管作用Fig.4.Effectofethanolat3‰inrataorticrings(theresttensionwas3g)withoutendotheliumprecontractedwithPE(10-6M)afterverapamil(Ver,10-6M)pretreatment.

DataareexpressedasMean±SD(n=5-6).*P<0.05,**P<0.01,vs.Ver;#P<0.05,vs.Ver+Ethanol.Ver:onlypretreatedwithverapamil;Ver+Ethanol:ethanoltreatmentafterverapamilincubation;Ver+RR+Ethanol:ethanoltreatmentafterverapamilandrutheniumred(RR,10?5M)incubation;Ver+HP+Ethanol:ethanoltreatmentafterverapamilandheparin(HP,50mg/L)incubationCONCLUSION乙醇具有血管活性作用。這種作用具有雙重性，并有一定的濃度依賴性。血管內(nèi)皮存在與否對(duì)乙醇的血管效應(yīng)有影響不同預(yù)張力下，乙醇的血管活性存在差異，3g為乙醇發(fā)揮舒血管活性的最適預(yù)張力促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞膜上電壓操縱性鈣通道的開放，增加外鈣內(nèi)流和抑制受體依賴性鈣通道的開放，減少外鈣內(nèi)流可能是介導(dǎo)乙醇血管活性的一個(gè)重要機(jī)制乙醇可能通過激活I(lǐng)P3途徑引起肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣釋放增加而使血管收縮，而Ryanodine受體可能不參與乙醇的血管活性作用PERSPECTIVE本次研究，在一定程度上明確了乙醇對(duì)血管的作用，并闡明了部分機(jī)理，為進(jìn)一步研究乙醇這一與人類生活和健康息息相關(guān)化學(xué)物質(zhì)的心血管生理、藥理機(jī)制，為指導(dǎo)人們適度飲酒及更多地了解疾病情況下乙醇的效應(yīng)，為過量酒精引起的臨床心血管疾病的防治提供了實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)由于時(shí)間有限，本次研究型實(shí)驗(yàn)僅對(duì)乙醇血管效應(yīng)的部分機(jī)制作了探討，今后可進(jìn)一步考慮從其他離子通道（特別是牽張敏感性離子通道）、內(nèi)皮因素（NO、內(nèi)皮素等）等其他角度研究乙醇的血管活性機(jī)制，并比較各種因素對(duì)乙醇血管活性作用的影響強(qiáng)度及其相互作用，明確乙醇對(duì)血管的綜合作用REFERENCES馬佳佳,馬恒,王躍民,李紅梅,裴建明.

葛根素對(duì)大鼠腹主動(dòng)脈的舒張作用及其機(jī)制.

第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,24(24):3321～2234蔣惠娣,汝海龍,王霄霞,夏強(qiáng),屠潔.

木犀草素對(duì)大鼠主動(dòng)脈的舒張作用及相關(guān)機(jī)制研究.

中國(guó)藥學(xué)雜志,2005,40(6):427～430

金紅峰，周云連，陳云龍，單綺嫻，陸源，夏強(qiáng).

石斛對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用.

中國(guó)中藥雜志,2003,28(11):1060～1062張紅雨，徐長(zhǎng)慶，李鴻珠，李寶馨，張艷橋，張一娜.

白藜蘆醇對(duì)大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)的舒張作用.

中國(guó)中藥雜志,2005,30(16):128