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實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握胰島素和腎上腺素對(duì)血糖水平的調(diào)節(jié)作用2、熟悉分光光度計(jì)的使用。第1頁(yè)/共11頁(yè)第一頁(yè),共12頁(yè)。二、實(shí)驗(yàn)原理人和動(dòng)物體內(nèi),血糖濃度受各種激素調(diào)節(jié)而維持恒定。胰島素能降低血糖;其他很多激素則具有升高血糖的作用,其中以腎上腺素作用較為迅速而明顯。胰島素促進(jìn)肝和肌將葡萄糖合成糖原,又加強(qiáng)糖的氧化利用,故可降低血糖;腎上腺素促進(jìn)糖原分解而增高血糖。
人和動(dòng)物體內(nèi),血糖濃度受各種激素調(diào)節(jié)而維持恒定。胰島素能降低血糖;其他很多激素則具有升高血糖的作用,其中以腎上腺素作用較為迅速而明顯。胰島索促進(jìn)肝和肌將葡萄糖合成糖原,又加強(qiáng)糖的氧化利用,故可降低血糖;腎上腺素促進(jìn)糖原分解而增高血糖。第2頁(yè)/共11頁(yè)第二頁(yè),共12頁(yè)。三、實(shí)驗(yàn)材料1、家兔。2、722N型分光光度計(jì)。3、試劑。(1)草酸鈉。(2)葡萄糖。(3)腎上腺素lmg/ml。(4)胰島素。第3頁(yè)/共11頁(yè)第三頁(yè),共12頁(yè)。四、實(shí)驗(yàn)方法1.動(dòng)物準(zhǔn)備:取正常家兔一只,實(shí)驗(yàn)前預(yù)先饑餓16h,稱體重(一般為2~3kg)。
2.取血:心臟采血,放入含抗凝劑的試管中,約需5ml,混勻。(抗凝血1)
3.注射激素后取血:取餓兔血后,其中一組在兔皮下注射胰島素,劑量按1U/kg體重計(jì)算,并記錄注射時(shí)間。30分鐘后再取血。另一組在兔皮下注射腎上腺素,劑量按0.4mg/kg體重計(jì)算。并記錄注射時(shí)間。15分鐘后再取血。(抗凝血2)第4頁(yè)/共11頁(yè)第四頁(yè),共12頁(yè)。制備無(wú)蛋白血濾液3.5ml蒸餾水+0.5ml抗凝血
+0.5ml1/3mol/L硫酸+0.5ml10%鎢酸鈉混勻后離心五分鐘,三檔(1500轉(zhuǎn)/分),將上清液用膠頭滴管轉(zhuǎn)移至干燥的試管中。即為無(wú)蛋白血濾液第5頁(yè)/共11頁(yè)第五頁(yè),共12頁(yè)。
血糖管試劑ml空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管1測(cè)定管2無(wú)蛋白血濾液
一
一1ml1ml標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖應(yīng)用液
一1ml一一蒸餾水2ml1ml1ml1ml堿性銅試劑2ml2ml2ml2ml混勻,置沸水浴中煮8min。取出用自來(lái)水冷卻(切勿搖動(dòng))磷鉬酸試劑2ml2ml2ml2ml混勻后放置2min,臨比色前加水至25ml第6頁(yè)/共11頁(yè)第六頁(yè),共12頁(yè)。比色測(cè)定將各管顛倒混勻后,用空白管調(diào)零,在620nm處測(cè)定吸光值。
第7頁(yè)/共11頁(yè)第七頁(yè),共12頁(yè)。操作注意1、等水沸騰后,才能放入血糖管。加熱要準(zhǔn)確8分鐘。2、冷卻時(shí)切不可搖動(dòng)血糖管,以免還原的氧化亞銅被空氣中的氧再氧化,降低實(shí)際結(jié)果。3、加入磷鉬酸后迅速比色。4、分光光度計(jì)的使用。第8頁(yè)/共11頁(yè)第八頁(yè),共12頁(yè)。分光光度計(jì)的使用1、接通電源,打開比色皿蓋,預(yù)熱20-30分鐘后,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至所需波長(zhǎng)。2、將盛有空白溶液的比色皿放在比色架的第一格,其余放測(cè)定溶液。將比色皿蓋蓋上,此時(shí)空白溶液在光路上。將光點(diǎn)調(diào)到“T”,調(diào)節(jié)T為100%。3、將光點(diǎn)調(diào)到“A”,輕輕拉動(dòng)比色架固定拉桿,使第二個(gè)比色皿溶液處在光路中,此時(shí)讀數(shù)即為該溶液的吸收度。4、依次拉出第三、第四個(gè)比色皿,分別讀取吸收度。5、測(cè)定完畢,先打開比色皿蓋,再斷電源。第9頁(yè)/共11頁(yè)第九頁(yè),共12頁(yè)。結(jié)果計(jì)算測(cè)定管吸收度標(biāo)準(zhǔn)管吸收度0.1×0.5551/=1L血液中的血糖mmol數(shù)第10頁(yè)/共11頁(yè)第十頁(yè),共12頁(yè)。感謝您的觀看!第11頁(yè)/共11頁(yè)第十一頁(yè),共12頁(yè)。內(nèi)容總結(jié)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。其他很多激素則具有升高血糖的作用,其中以腎上腺素作用較為迅速而明顯。胰島素促進(jìn)肝和肌將葡萄糖合成糖原,又加強(qiáng)糖的氧化利用,故可降低血糖。胰島索促進(jìn)肝和肌將葡萄糖合成糖原,又加強(qiáng)糖的氧化利用,故可降低血糖。3.5ml蒸餾水+0.5m
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