肝素鈉小規(guī)模提取技術(shù)

肝素鈉小規(guī)模提取技術(shù)肝素鈉是一種生物活性物質(zhì)，廣泛存在于豬、牛的大小腸、肝、胰臟等哺乳動(dòng)物的組織中，目前主要從豬的腸粘膜和肺中提取的硫酸氨基葡聚糖的鈉鹽，屬粘多糖類物質(zhì)。肝素鈉能夠阻止血小板聚集和破壞，妨礙凝血激活酶的形成；阻止凝血酶原變?yōu)槟福灰种颇?，從而妨礙纖維蛋白原變成纖維蛋白，達(dá)到抗凝血的作用，在治療血管病方面有獨(dú)特之處，具有凈血脂、防止血栓形成的作用，并對若干腫瘤的癌細(xì)胞有抑制和防止轉(zhuǎn)移的作用，有較高的醫(yī)用價(jià)值。隨著我國進(jìn)入老齡化社會(huì)，體外循環(huán)手術(shù)和冠狀動(dòng)脈介入手術(shù)需求將出現(xiàn)快速增長，帶動(dòng)相關(guān)生產(chǎn)公司的肝素鈉銷量逐年顯著遞增及普通肝素鈉制劑全球市場容量持續(xù)較快增長，直接帶動(dòng)了近幾年全球肝素鈉原料藥（由肝素鈉精品制得的半成品）市場容量持續(xù)較快增長。過去5年中，全球肝素原料藥年復(fù)合增長率約為9.35%，有機(jī)構(gòu)預(yù)測。2010年至2015年的增長速度更快，年復(fù)合增長率預(yù)計(jì)達(dá)到10.32%，到2015年肝素原料藥的需求將達(dá)50.5萬億單位。儀器及藥品準(zhǔn)備設(shè)備儀器：煮池（圓形池底嵌入鐵鍋），吸附池，攪拌扁（或棒），絞肉機(jī)，波美計(jì)（比重表），溫度計(jì)（量程為100C）,濾布網(wǎng)兜，塑料盆、桶、瓢，慢轉(zhuǎn)速攪拌裝置（洗衣機(jī)馬達(dá)改裝），壓榨機(jī)，石棉濾布，滌綸細(xì)（120目）白布，冷凝管（80cm），煤或柴，鼓風(fēng)機(jī)。藥品：D?204肝素鈉離子交換專用樹脂，食鹽，固體燒堿，鹽酸，95%勺乙醇，精密pH試紙、廣范pH試紙等。鮮豬腸粘膜的處理在池底鍋內(nèi)放入新鮮豬腸粘（膜）液，攪拌加熱使溫度升到30C，此時(shí)按100kg粘液加入食鹽3.5?4.5kg，繼續(xù)加熱到40C,用40%勺燒堿溶液調(diào)節(jié)pH值到8.8?9,并使溫度升至50?55C,保溫4h,注意攪拌。然后升溫至90?95C,停止加熱，保溫15?20min，撈出浮油，用100目的尼龍濾布過濾，將濾液轉(zhuǎn)入吸附池內(nèi)。經(jīng)擠壓干勺濾渣回鍋，加入濾渣量1?1.5倍勺4%勺氯化鈉溶液，攪拌、升溫、煮沸，保溫 1h，過濾，合并濾液，用于提取肝素鈉。整個(gè)過程要注意攪拌、控溫、防炭化。濾渣可制成飼料添加劑。肝素鈉勺吸附與洗滌將冷卻到50?55C的濾液再除去油脂，調(diào)節(jié) pH值為9,并保證其pH值為9。每100kg濾液加入處理好的D?204肝素鈉離子交換專用樹脂11?12.5kg，以70?80轉(zhuǎn)/min的轉(zhuǎn)速攪拌8?9h,使其與離子交換樹脂充分吸附， 靜止15min后過濾，棄濾液。將已吸肝素鈉的樹脂用清水沖洗至無渾濁、濾干后，用 55C涼開水、約1.5倍樹脂的量，攪拌0.5h，過濾，再用6波美度的涼鹽開水1.5倍量攪拌洗滌60?80min后，過濾，收集樹脂。實(shí)踐證明6波美度的涼鹽水藥不會(huì)使肝素鈉從樹脂中洗脫。肝素鈉的洗脫將經(jīng)洗滌后已吸附肝素鈉的樹脂放人20波美度的鹽水（用涼開水溶解）中，淹過樹脂10cm水面為宜，以70轉(zhuǎn)/分左右攪拌2?3h,過濾收集濾液。反復(fù)洗脫3次，待樹脂中的肝素鈉全部洗脫后，合并濾液。將洗脫后的樹脂用20波美度的鹽水或pH=2溶液中浸泡保養(yǎng)，下次再用。肝素鈉粗品的提純將洗脫液（肝素鈉粗溶液）放入沉淀桶內(nèi)，用酸（或堿）調(diào)節(jié)pH值為6.5?7.5，用95%的乙醇沉淀肝素鈉。以30轉(zhuǎn)/min的速度加入95%的乙醇使之混和均勻，并使乙醇濃度為 30波美度，靜置24h。吸出上層清液回收乙醇。下層即為肝素鈉膏狀沉淀，收集于塑料桶、玻璃缸或陶瓷中用酒精淹沒，累積后提純。將累積的肝素鈉膏狀沉淀用350-400目的尼龍布濾干酒精，用30C左右、5波美度的鹽水30?50倍溶解，用1:1的稀鹽酸溶液少量多次地加入，調(diào)節(jié)pH值為2.5?3.5，過濾除去雜質(zhì)，加熱到40C再過濾，按此方法再洗1次。濾液用40%的氫氧化鈉調(diào)節(jié)到pH值為乙然后用95%的乙醇加入達(dá)50波美度以上，靜置24h后用小軟管吸出乙醇。將所得沉淀再用95（%或回收的88?90波美度）的乙醇加入脫水，乙醇用量為沉淀體積的2倍或更多，經(jīng)過5h以上靜置，上層乙醇供回收，下層藥進(jìn)行再脫水。將脫水后的沉淀物放在大塘瓷盤上，用水浴法蒸干（防止藥品飛濺），也可用200?500W燈泡烘干。所得肝素鈉粗品用塑料袋密封保存。濾渣的處理與再利用在提純中所得濾渣累積起來，用30波美度的乙醇浸泡保存，按提純方法處理、回收再利用。即按1kg濾渣加入10kg1波美度鹽水里泡散，用鹽酸調(diào)pH值為2?3,溫度在26?30C進(jìn)行過濾去渣，用40%的氫氧化鈉慢慢調(diào)節(jié)pH值為7再用95%勺乙醇加入達(dá)50波美度靜置沉淀，等候24h吸出乙醇，沉淀過濾、烘干后還可得低效價(jià)勺肝素鈉粗品。速效最高，藥后7d相對防治效果達(dá)68.65%。但防治持效性較差，藥后21d勺平均相對防治效果僅為23.26%，以750倍稀釋液防治持效性最好，藥后21d為36.67%。3結(jié)論與討論中藥是中華民族勺瑰寶，是歷經(jīng)千百年臨床應(yīng)用實(shí)際篩選出來勺天然產(chǎn)物，從中藥尋求抗菌藥物無疑有著得天獨(dú)厚勺優(yōu)勢?！巴ｍ槨睘橐环N中藥制劑農(nóng)藥，試驗(yàn)結(jié)果表明，對茶樹炭疽病具有一定的防治效果，防治效果要優(yōu)于60%L?C殺菌乳油，但較硅唑?多菌靈可濕性粉劑要差， 具有較好的防治速效性，但防治持效性較差?！巴ｍ槨敝兴?種處理濃度中，雖然750倍稀釋