自來水中細(xì)菌的測定

【摘要】本實驗應(yīng)用平板菌落技術(shù)測定水中細(xì)菌總數(shù)。以一定的培養(yǎng)基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中細(xì)菌種數(shù)僅是一種近似值。實驗用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基在保證無菌的環(huán)境下，采取自來水的樣品，利用培養(yǎng)基制作平板，計數(shù)。國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，飲用水中大腸菌群數(shù)每升中不超過3個，細(xì)菌總數(shù)每毫升不超過100個。所謂細(xì)菌總數(shù)，指1毫升或1克檢樣中所含的細(xì)菌菌落的總數(shù)。按菌落計數(shù)方法進(jìn)行計數(shù)，得到如下結(jié)果：在顯微鏡下可觀察到眾多的菌落且種類繁多，取其平均值得到，菌落數(shù)為65/mL，自來水中細(xì)菌總數(shù)為65/mL，符合國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)。【關(guān)鍵詞】自來水細(xì)菌總數(shù)平板菌落計數(shù)技術(shù)牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基自來水的微生物學(xué)檢驗，特別是腸道細(xì)菌的檢驗，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時也是評價水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)。應(yīng)用平板計數(shù)技術(shù)測定水中細(xì)菌總數(shù)是用微生物測水質(zhì)的常用方法。由于水中細(xì)菌種類繁多，它們對營養(yǎng)和其他生長條件的要求差別很大，不可能找到一種培養(yǎng)基在一種條件下，使水中所有的細(xì)菌均能生長繁殖，因此，以一定的培養(yǎng)基平板上生長出來的菌落，計算出來的水中細(xì)菌總數(shù)僅是一種近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。通過此方法我們能夠計算出水中的細(xì)菌總數(shù)，從而判斷自來水是否符合國家標(biāo)準(zhǔn)，是否受到污染。1材料與方法水樣的采取先在自來水龍頭周圍放置酒精燈進(jìn)行滅菌，再放開水龍頭使水流5min后，以滅菌三角燒瓶接取水樣，以待分析。固體培養(yǎng)基的制作牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方如下：牛肉膏1.5g蛋白胨5.0gNaCl2.5g水500mLpH7.4?7.6將培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶化后到入燒杯。也可放在稱量杯中，稱量后直接放入水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然后立即取出紙片。在上述燒杯中先假如少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后，加入瓊脂，再在石棉上加熱使其溶解。將藥品完全溶解后，補(bǔ)充水到所需的總體積。在未調(diào)pH前，先用精密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH,如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入lmol/LNaOH,邊加邊攪拌，并隨時用PH試紙測其PH,直至PH達(dá)7.6。反之，用lmol/LHCL進(jìn)行調(diào)節(jié)。高壓蒸汽滅菌將內(nèi)層鍋去處，再向外層鍋中加入適量的水，使水面與三角架相平為宜。放回內(nèi)層鍋，并加入要滅菌的培養(yǎng)皿、試管、燒杯等物品（注意不要裝得太擠，以免防礙蒸氣流通而影響滅菌效果）。加蓋，并將蓋上的排氣管插入內(nèi)層的排氣槽內(nèi)，再2兩兩對稱的方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。1.3.4本實驗用O.lMPa,121.5°C,20min滅菌。滅菌所需時間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至“0時”，打開排氣閥，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。自來水中細(xì)菌總數(shù)的測定1.4.1用滅菌吸管吸取1mL水樣，注入滅菌培養(yǎng)皿中，共做四個平板。1.4.2分別傾注約15mL已溶化并冷卻到45C左右的牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，并立即在桌上做平面旋搖，使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。1.4.3另取一空的滅菌培養(yǎng)皿，傾注牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基15mL,作空白對照。1.4.4培養(yǎng)基凝固后，倒置與37C溫箱中，培養(yǎng)24h,進(jìn)行菌落記數(shù)。四個平板的平均菌落數(shù)即為1mL水樣的細(xì)菌總數(shù)。2結(jié)果與分析2.1實驗數(shù)據(jù)平板菌落數(shù)平均值空白065/mL1562633724692.2數(shù)據(jù)分析根據(jù)國家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)可飲用水中的細(xì)菌個數(shù)為每毫升不超過100個，而此自來水中的細(xì)菌個數(shù)為65個每毫升，低于國家標(biāo)準(zhǔn)，故該自來水水質(zhì)合格。3討論水是生命之源，水質(zhì)的好壞對人們生活起著至關(guān)重要的作用，而判斷水質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)，微生物在水中的數(shù)量、種類是必不可少的。細(xì)菌是微生物界的一個大類群，它與人類的生活密切相關(guān)，為了我們更好地生活，我們必須研究細(xì)菌，并掌握一些方法，來使細(xì)菌向人類有用的方面發(fā)展。自來水的微生物學(xué)檢驗，特別是腸道細(xì)菌的檢驗，在保證飲水安全和控制傳染病上有著重要意義，同時也是評價水質(zhì)狀況的重要指標(biāo)。通過此實驗，我們可知平板菌落技術(shù)法是測定水樣中細(xì)菌個數(shù)比較方便的方法，但它也存在一些無法避免的因素，比如在數(shù)菌落時，菌落太小且又處于培養(yǎng)基內(nèi)部，這樣就不能準(zhǔn)確地觀察到菌落，從而影響實驗結(jié)果；又如在培養(yǎng)過程中由于細(xì)菌之間的相互抑制也會使菌落計數(shù)的結(jié)果減少。另外，在實驗中應(yīng)該注意以下幾點：倒置培養(yǎng)基時應(yīng)降溫至45°C,以免溫度過高燙死大腸桿菌，也不能過低，防止培養(yǎng)基凝固。傾注培養(yǎng)基后要將培養(yǎng)皿在桌面上做平面旋轉(zhuǎn)搖動，將培養(yǎng)基和自來水樣搖勻，在培養(yǎng)基中觀察結(jié)果時可見一些菌苔就是培養(yǎng)皿沒有搖勻的結(jié)果。參考文獻(xiàn)】沈萍陳向東主編《微生物學(xué)實驗》（第四版）.高等教育出版.2007年羅雪云等《食品衛(wèi)生微生物檢驗標(biāo)準(zhǔn)手冊》北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，1995年郝士海《現(xiàn)代細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)基和生化試驗手冊》北京：中國科學(xué)技術(shù)出版社1992年