臨床免疫學(xué)質(zhì)量控制

關(guān)于臨床免疫學(xué)質(zhì)量控制第1頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二分析前質(zhì)量控制臨床檢驗(yàn)科全面質(zhì)量管理系統(tǒng)用于臨床診斷與治療分析測(cè)定參與臨床診斷、查房等醫(yī)療活動(dòng)，幫助臨床醫(yī)生合理分析、正確使用檢驗(yàn)結(jié)果分析中分析后

通過(guò)實(shí)踐與文獻(xiàn)復(fù)習(xí)進(jìn)行方法學(xué)研究、臨床意義探討、經(jīng)濟(jì)學(xué)評(píng)估，不斷開(kāi)展循征醫(yī)學(xué)工作探討標(biāo)本采集各環(huán)節(jié)影響實(shí)驗(yàn)因素并制定相應(yīng)制度與措施檢驗(yàn)科與臨床密切的信息交流臨床醫(yī)生選擇合理有效的檢測(cè)項(xiàng)目，正確書(shū)寫(xiě)化驗(yàn)申請(qǐng)單檢驗(yàn)科對(duì)臨床醫(yī)生選擇項(xiàng)目時(shí),提出自己的建議對(duì)檢驗(yàn)科工作人員不斷進(jìn)行專(zhuān)業(yè)知識(shí)繼續(xù)教育,不斷提高整體素質(zhì)和學(xué)術(shù)水平

醫(yī)護(hù)人員能正確進(jìn)行標(biāo)本采集與運(yùn)送標(biāo)本采集檢查、監(jiān)督標(biāo)本是否符合要求標(biāo)本運(yùn)送病人準(zhǔn)備建立檢驗(yàn)報(bào)告解釋咨詢(xún)及建議的機(jī)構(gòu)臨床檢驗(yàn)科第2頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二內(nèi)容提要分析前質(zhì)量控制分析中質(zhì)量控制分析后質(zhì)量控制第3頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二一、分析前質(zhì)量控制

培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)室工作人員；建立臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系；實(shí)驗(yàn)室規(guī)范設(shè)置；試劑盒的選擇、評(píng)價(jià)、使用與保存儀器的校準(zhǔn)、評(píng)價(jià)、維護(hù)和保養(yǎng)；標(biāo)本采集、運(yùn)輸、核收、登記、處置與保存；質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的選擇、評(píng)價(jià)和使用。

第4頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二1、試劑盒的選擇、評(píng)價(jià)、使用與保存

乙肝等試劑盒

生產(chǎn)批準(zhǔn)文號(hào)；生產(chǎn)許可證經(jīng)營(yíng)許可證

藥品經(jīng)營(yíng)許可證批批檢定合格；貼有防偽標(biāo)簽。

未作規(guī)定的試劑，應(yīng)從如下方面進(jìn)行評(píng)價(jià)：靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡(jiǎn)便性、安全性及經(jīng)濟(jì)性等。

第5頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

試劑盒的評(píng)價(jià)

真實(shí)性和可靠性

1、真實(shí)性：指測(cè)量值與實(shí)際值符合的程度（診斷試驗(yàn)應(yīng)能提供哪些人確實(shí)有?。ㄕ骊?yáng)性）和哪些人確實(shí)無(wú)?。ㄕ骊幮裕┑闹笜?biāo)）。

評(píng)價(jià)指標(biāo)

相對(duì)靈敏度：是試驗(yàn)檢出有?。搓?yáng)性）的人數(shù)占患者總數(shù)的比例，即真陽(yáng)性率。相對(duì)靈敏度是衡量真陽(yáng)性率的尺度。

相對(duì)特異性：是試驗(yàn)檢出無(wú)?。搓幮裕┑娜藬?shù)占無(wú)病者總數(shù)的比例，即真陰性率。相對(duì)特異性是衡量真陰性率的尺度。第6頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

評(píng)價(jià)試劑盒相關(guān)指標(biāo)一覽表試驗(yàn)有?。ㄕ骊?yáng)性）無(wú)?。ㄕ骊幮裕┖喜㈥?yáng)性TPFPTP+FP陰性FNTNFN+TN總數(shù)TP+FNFP+TNTP+FP+FN+TN第7頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

相對(duì)靈敏度=TP/(TP+FN)；

相對(duì)特異性=TN/(FP+TN)；

相對(duì)符合率=(TP+TN)/(TP+FP+FN+TN)。

2、可靠性：是指在相同條件下重復(fù)試驗(yàn)獲得相同結(jié)果的穩(wěn)定程度。如試驗(yàn)結(jié)果為均數(shù)，可用變異系數(shù)表示。公式為：CV=s/x×100%

S為標(biāo)準(zhǔn)差，x為平均值。第8頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

列舉范例（資料參考）

（1）標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)源：中國(guó)藥品生物制品檢定所。（2）標(biāo)準(zhǔn)品模式：抗HCV預(yù)期陽(yáng)性100份,預(yù)期陰性98份。（3）試劑來(lái)源于H廠(chǎng)家。（4）在一次對(duì)丙肝試劑評(píng)價(jià)試驗(yàn)中，通過(guò)使用該試劑對(duì)198份標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)抗HCV預(yù)期陽(yáng)性100份標(biāo)本中，檢出陽(yáng)性98份、陰性2份：預(yù)期陰性98份標(biāo)本中，檢出陰性96份，陽(yáng)性2份。

第9頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

評(píng)價(jià)丙肝試劑盒相關(guān)指標(biāo)一覽表

試驗(yàn)有?。ㄕ骊?yáng)性）無(wú)?。ㄕ骊幮裕┖喜㈥?yáng)性（TP）98份（FP）2份TP+FP=100份陰性（FN）2份（TN）96份FN+TN=98份總數(shù)TP+FN=100份FP+TN=98份TP+FP+FN+TN=198份第10頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

經(jīng)分析：

相對(duì)靈敏度=TP/(TP+FN)=98/100=98%

相對(duì)特異性=TN/(FP+TN)=96/98=97.96%

相對(duì)符合率

=(TP+TN)/(TP+FP+FN+TN)=98+96/198=97.98%第11頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二試劑的正確使用與保存

按說(shuō)明書(shū)操作，不能想當(dāng)然；詳實(shí)記載----批號(hào)、有效期、使用情況及更換試劑記錄等；索要試劑商相關(guān)證件并有效保存，特別是批批檢報(bào)告書(shū)；

試驗(yàn)用試劑

冰箱內(nèi)？使用時(shí)？多余部分如何處置？

……第12頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第13頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二第14頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

存在的問(wèn)題:

（1）將試劑盒從冰箱中拿出即用后果是：溫育時(shí)間不夠，對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性，尤其是冬天沒(méi)有空調(diào)的環(huán)境里。

要求：試劑盒從冰箱中拿出室溫放置20min以上，與室溫平衡，然后再進(jìn)行測(cè)定。

目的：在后面的溫育反應(yīng)中，能使反應(yīng)孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所要求的高度，以滿(mǎn)足要求。

第15頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

（2）商品化ELISA試劑盒中,洗板液由所提供的濃縮液稀釋配置而成，故所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。

（3）OPD底物溶液必須在反應(yīng)顯色前臨時(shí)配制。第16頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二2、目前免疫學(xué)檢驗(yàn)所要控制的儀器

（1）移液器利用稱(chēng)重法校準(zhǔn)：吸取刻度指示量的水，萬(wàn)分之一天平稱(chēng)重后計(jì)算吸量是否正確，一般應(yīng)在±10%以?xún)?nèi)。（2）水浴箱、溫箱、冰箱使用標(biāo)準(zhǔn)溫度計(jì)，經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度與水中（或溫箱內(nèi)）實(shí)測(cè)溫度是否一致，允許有±1℃的誤差。

第17頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

（3）洗板機(jī)設(shè)置洗板后的殘留液一般不超過(guò)2ul；人工扣板時(shí)，墊紙不濕；定期檢查管孔是否堵塞。

（4）酶標(biāo)儀經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分，防止濾光片霉變；定期檢查校準(zhǔn)，使其保持良好的工作性能。第18頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

3、臨床標(biāo)本的收集與保存

免疫試驗(yàn)標(biāo)本十分廣泛，

體液：如血清、血漿、各種積液；

分泌物：如唾液、腦脊液；

排泄物：糞便、尿液；均可用于測(cè)定其中的抗原或抗體成分，一般使用血清。

第19頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二可能影響測(cè)定結(jié)果的標(biāo)本因素

患者標(biāo)本中有可能會(huì)含有干擾酶免疫測(cè)定導(dǎo)致假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果的干擾因素，其分為兩類(lèi)：

1、內(nèi)源性干擾因素：類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體、因使用鼠抗體治療或誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體、交叉反應(yīng)等。

第20頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

2、外源性干擾因素：如標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、儲(chǔ)存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全、冷凍保存標(biāo)本反復(fù)凍融等。（1）盡量避免溶血紅細(xì)胞破裂釋放出具有過(guò)氧化物酶活性物質(zhì)，增加非特異性顯色而成假陽(yáng)性。（2）血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性。（3）盡量不用抗凝血，尤其不能用肝素抗凝血?？鼓煌耆臉?biāo)本因纖維蛋白原的干擾也可產(chǎn)生假陽(yáng)性。（4）標(biāo)本在冰箱中保存不宜過(guò)長(zhǎng)易導(dǎo)致血清IgG聚合，使間接法試劑本底加深。（5）盡量避免污染第21頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

4、建立臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系

最重要的一點(diǎn)：“實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理文件”的書(shū)寫(xiě)文件包含：質(zhì)量手冊(cè)、程序性文件、作業(yè)指導(dǎo)書(shū)和相關(guān)表格、報(bào)告等質(zhì)量記錄。程序性文件：包括管理性和技術(shù)性文件兩種。作業(yè)指導(dǎo)書(shū)：包括檢測(cè)細(xì)則、標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)

以文件形式存在，便于查閱，并確保得到實(shí)施。第22頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二

（二）分析中質(zhì)量控制

1、如何做好病毒性肝炎酶免檢驗(yàn)質(zhì)控物定值的選擇？

2、質(zhì)控品的正確使用；

3、ELISA檢測(cè)方法的注意事項(xiàng)；

4、室內(nèi)質(zhì)控的實(shí)際操作步驟；

第23頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二1.如何做好病毒性肝炎酶免檢驗(yàn)質(zhì)控物定值的選擇？

質(zhì)控物：高值、中值、低值及陰性值；

設(shè)置臨界于cut-off(CO值)的低值弱陽(yáng)性質(zhì)控物是室內(nèi)質(zhì)控的關(guān)鍵；

低值弱陽(yáng)性臨界值質(zhì)控物

是室內(nèi)質(zhì)控精密度觀(guān)察的最敏感的窗口，是提示試驗(yàn)成功與否的最重要標(biāo)志；

不是判斷陰陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn)。第24頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二現(xiàn)有的室內(nèi)質(zhì)控血清

項(xiàng)目

梅毒螺旋體抗體質(zhì)控血清抗HIV國(guó)家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)抗HCV國(guó)家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)抗HAVIgM質(zhì)控血清

HBcAbIgM質(zhì)控血清

HBcAb質(zhì)控血清

HBeAb質(zhì)控血清

HBeAg質(zhì)控血清

HBsAb質(zhì)控血清

HBsAg國(guó)家二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

由國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局批準(zhǔn)，可在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信息平臺(tái)上檢索到，網(wǎng)址：http：//第25頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二2、質(zhì)控品的正確使用

用途：靈敏度控制、精密度控制。

穩(wěn)定性：

1、室溫（20-25℃，相對(duì)濕度20-25%）可穩(wěn)定兩周；

2、高溫高濕度（37℃，相對(duì)濕度60-80%

）條件下，可穩(wěn)定3天；

3、在冰箱內(nèi)冷藏（2-8℃）保存，可穩(wěn)定一年；

4、-20℃保存可穩(wěn)定一年以上。

第26頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二室內(nèi)質(zhì)控血清的規(guī)格第27頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二HBeAg質(zhì)控血清

定值適用試劑1NCU/ml進(jìn)口的試劑2NCU/ml國(guó)產(chǎn)試劑4NCU/ml國(guó)產(chǎn)試劑新的4NCU/ml≈原0.25NCU/ml第28頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二HBeAb質(zhì)控血清

定值適用試劑

1NCU/ml進(jìn)口的試劑

2NCU/ml進(jìn)口的試劑

4NCU/ml國(guó)產(chǎn)試劑第29頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二3、檢測(cè)方法的注意事項(xiàng)

結(jié)果判讀

衛(wèi)藥發(fā)（1995）第32號(hào)及（1996）第25號(hào)文要求：

凡開(kāi)展ELISA檢測(cè)項(xiàng)目的單位，必須使用酶標(biāo)儀判讀結(jié)果，不準(zhǔn)使用目測(cè)法。

第30頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二ELISA測(cè)定的“灰區(qū)”

是指ELISA測(cè)定時(shí)，吸光度處于Cut—off值周?chē)囊欢▍^(qū)域，其結(jié)果應(yīng)為“可疑”。需重復(fù)實(shí)驗(yàn)或換試劑重測(cè)以確定其陰、陽(yáng)性，如仍落在灰區(qū)范圍內(nèi)則報(bào)告±值。

灰區(qū)概念對(duì)血站系統(tǒng)的獻(xiàn)血員篩查尤為重要灰區(qū)的設(shè)置有兩種（1）C.O×（1±CV），CV為該試劑的批內(nèi)CV（一般在15%--20%間）。如：HBsAg1.05×（1±18%）（2）C.O±2s，s為實(shí)驗(yàn)室做室內(nèi)質(zhì)控OCV的s。如：HBsAg1.05±2×0.189第31頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二原始記錄

（1）分類(lèi)別、客觀(guān)、如實(shí)、準(zhǔn)確、及時(shí)登記，項(xiàng)目齊全、書(shū)寫(xiě)清晰、規(guī)范；

（2）陰、陽(yáng)性與可疑結(jié)果不能用“+、-、±”表示，必須用漢字書(shū)寫(xiě)或蓋印章；

（3）ELISA試驗(yàn)每次檢測(cè)必須有原始酶標(biāo)儀打印結(jié)果，其S/c.o值應(yīng)與原始登記結(jié)果一一對(duì)應(yīng)；

（4）定量試驗(yàn)結(jié)果必須采用法定的國(guó)際計(jì)量單位；

第32頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期二4、室內(nèi)質(zhì)控的實(shí)際操作步驟

1）設(shè)定靶值和控制限

2）特殊情況的處理：如Crubbs氏法

3）更換試劑及質(zhì)控品：

應(yīng)在“舊”批號(hào)質(zhì)控品使用結(jié)束前與“新”批號(hào)質(zhì)控品一起測(cè)定，設(shè)立新的靶值和控制限。

4）繪制質(zhì)控圖及記錄質(zhì)控結(jié)果：根據(jù)質(zhì)控圖的靶值和控制限繪制Levey---Jennings控制圖，將原始質(zhì)控結(jié)果記錄在質(zhì)控圖表上，保留打印的原始質(zhì)控記錄。第33頁(yè)，共38頁(yè)，2023年，2月20日，星期