實驗二中微量鐵的測定

實驗二中微量鐵的測定第一頁，共十五頁，2022年，8月28日目的

掌握使用分光光度計.掌握標準曲線法進行定量分析掌握分光光度法測定藥物或水中鐵含量的操作方法及原理.第二頁，共十五頁，2022年，8月28日

原理

鐵是藥物和水中常見的一種雜質(zhì),含量大時易產(chǎn)生特殊氣味,因此對藥物和飲水中的鐵要進行檢查和測定.選擇顯色劑的基本原則亞鐵離子與鄰二氮菲生成穩(wěn)定的橙紅色配合物.Fe2++

第三頁，共十五頁，2022年，8月28日應(yīng)用此反應(yīng)可測定鐵,當(dāng)鐵以Fe3+離子形式存在于溶液中時,可預(yù)先用還原劑(鹽酸羥胺或?qū)Ρ蕉拥?將其還原為Fe2+離子.及顯色條件的選擇顯色時,溶液PH值應(yīng)為2～9.若酸度過高(PH<2）顯色緩慢而色淺;若酸度過低,二價鐵離子易水解.最大吸收波長為508nm,ε=11100.第四頁，共十五頁，2022年，8月28日儀器與試劑

(1)722型分光光度計(2)容量瓶(10ml，7個);(3)吸量管(2,1ml)(4)洗耳球(5)擦鏡紙(6)標準鐵溶液(20μg/ml)(7)鄰二氮菲0.1%水溶液(8)鹽酸羥胺1%水溶液(用時配制)(9)HCA-NaAc緩沖溶液(10)FeCl3待測液第五頁，共十五頁，2022年，8月28日四.操作步驟

1.標準曲線的制作以標準溶液的濃度為橫坐標，相應(yīng)的吸光度為縱坐標，繪制成A-C曲線即為標準曲線。

第六頁，共十五頁，2022年，8月28日

具體步驟：在6只10ml容量瓶中，用吸量管分別加入0.0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0ml鐵標準溶液(硫酸鐵銨每ml含F(xiàn)e3+20μg),分別加入0.2ml鹽酸羥胺,0.4ml鄰二氮菲,1.0mlHAc-NaAc緩沖溶液,用水稀釋至刻度后搖勻,放置5min.用1cm比色皿,以0.0ml鐵標液為試劑空白,在所選波長(508nm)下,測量各溶液的吸光度.以鐵含量為橫坐標,吸光度A為縱坐標,繪制標準曲線.第七頁，共十五頁，2022年，8月28日2.FeCl3樣測定以FeCl3為樣品,準確吸取樣1.00ml(或適量),置10ml容量瓶中.按上述制備標準曲線的方法配制溶液并測定吸光度,根據(jù)測得的吸光度求出FeCl3樣中總鐵量.據(jù)FeCl3樣測得吸光度查出鐵含量.（1）在相同條件下測定樣品溶液的吸光度，即可從標準曲線查出樣品溶液中被除測組分的濃度，（2）將一系列標準溶液的濃度與相應(yīng)的吸光度，進行線性回歸，然后將樣品溶液的吸光度引入回歸方程，計算樣品溶液中被測組分的濃度。由于線性回歸法制備的標準曲線，比手繪法更客觀，所以目前文獻報到多采用此法。第八頁，共十五頁，2022年，8月28日

標準曲線制備實例

精密稱取對照品1.110mg用甲醇溶解并定容至10ml，用移液管精密移取0.4ml,

0.8ml，1.2ml，1.6ml，2.0ml，2.4ml分別定容于10ml容量瓶，以此為對照溶液，在268nm下測其吸收度，測定結(jié)果見表Table2第九頁，共十五頁，2022年，8月28日

Table2LinearRelationshipofStandardMaterial

NO.

contentsofstandardAmaterial(mg/l)

14.44000.09228.88000.187313.3200.277417.7600.365522.2000.458626.6400.553第十頁，共十五頁，2022年，8月28日對對照品的吸收度和濃度進行線性回歸，得回歸方程：

A=0.02063C+0.0014γ=0.99993(A:吸收度，C:濃度)

標準品在4.440~26.640mg/L范圍內(nèi)A與C呈良好線性關(guān)系。以對照品溶液的濃度為橫坐標，吸收度為縱坐標，繪制標準曲線，見Fig3。第十一頁，共十五頁，2022年，8月28日以對照品濃度對吸收度作圖，得直線，見Fig3Fig5normalcurveofstandardmaterial第十二頁，共十五頁，2022年，8月28日思考題顯色反應(yīng)操作中,加入的各標準溶液與樣品液的含酸量不同,對顯色有無影響?據(jù)制備標準曲線測得的數(shù)據(jù),判斷本次實驗得濃度與吸光度間的線性好不好,分析其原因.第十三頁，共十五頁，2022年，8月28日注意事項待測溶液裝量應(yīng)超過比色皿2/3，但也不能裝得太滿。實驗過程中，注意不要將溶液撒入機器內(nèi)部，如果發(fā)生上述情況，請及時清理干凈。比色皿用后，請洗凈后，用95%乙醇浸泡，長期不用，請擦干后，收好.第十四頁，共十五頁，2022年，8月28日附：722型分光光度計使用方法開機后需預(yù)熱20分鐘。波長