下載本文檔
版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶(hù)提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
誘變物質(zhì)的微核測(cè)試一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解細(xì)胞微核形成機(jī)理及其形態(tài)特點(diǎn)2、學(xué)習(xí)植物根尖細(xì)胞的微核檢測(cè)方法二、實(shí)驗(yàn)原理微核(micronucleus,簡(jiǎn)稱(chēng)MCN),也叫衛(wèi)星核,是真核類(lèi)生物細(xì)胞中的一種異常結(jié)構(gòu),是染色體畸變?cè)陂g期細(xì)胞中的一種表現(xiàn)形式。微核往往是各種理化因子,如輻射、化學(xué)藥劑對(duì)分裂細(xì)胞作用而產(chǎn)生的。在細(xì)胞間期,微核呈圓形或橢圓形,游離于主核之外,大小應(yīng)在主核1/3以下。微核的折光率及細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣,也具合成DNA的能力。一般認(rèn)為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的染色體斷片產(chǎn)生的。有實(shí)驗(yàn)證明,整條染色體或幾條染色體也能形成微核。這些斷片或染色體在分裂過(guò)程中行動(dòng)滯后,在分裂末期不能進(jìn)入主核,便形成了主核之外的核塊。當(dāng)子細(xì)胞進(jìn)入下一次分裂間期時(shí),它們便濃縮成主核之外的小核,即形成了微核。已經(jīng)證實(shí),微核率的大小是和作用因子的劑量或輻射累積效應(yīng)呈正相關(guān),這一點(diǎn)與染色體畸變的情況一樣。所以許多人認(rèn)為可用簡(jiǎn)易的周期微核計(jì)數(shù)來(lái)代替繁雜的中期畸變?nèi)旧w計(jì)數(shù)。由于大量新的化合物的合成,原子能的應(yīng)用,各種各樣工業(yè)廢物的排出等都存在污染環(huán)境的可能性,欲了解這些因素對(duì)機(jī)體潛在的遺傳危害,需要有一套高度靈敏,技術(shù)簡(jiǎn)單易行的測(cè)試系統(tǒng)來(lái)監(jiān)測(cè)環(huán)境的變化。只有真核類(lèi)的測(cè)試系統(tǒng)更能直接推測(cè)誘變物質(zhì)對(duì)人類(lèi)或其它高等生物的遺傳危害,在這方面,微核測(cè)試是一種比較理想的方法。目前國(guó)內(nèi)外不少部門(mén)已把微核測(cè)試用于輻射損傷、輻射防護(hù)、化學(xué)誘變劑、新藥試驗(yàn)、食品添加劑的安全評(píng)價(jià),以及染色體遺傳疾病和癌癥前期診斷等各個(gè)方面。三、實(shí)驗(yàn)材料蠶豆:又稱(chēng)胡豆、佛豆、胡豆、川豆、倭豆、羅漢豆。一年生或二年生草本。為糧食、蔬菜和飼料、綠肥兼用作物。起源于西南亞和北非。相傳西漢張騫自西域引入中國(guó)。蠶豆含8種必需氨基酸。碳水化合物含量47%?60%。營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富,可食用,也可制醬、醬油、粉絲、粉皮和作蔬菜。還可作飼料、綠肥和蜜源植物種植一年生或二年生草本。莖直立,四棱,中空,四角上的維管束較大。羽狀復(fù)葉??偁罨ㄐ?,花蝶形。莢果,種子扁平,略呈矩圓形或近于球形。蠶豆花期一般是3月?5月。蠶豆為長(zhǎng)日照作物。喜溫暖濕潤(rùn)氣候和pH6.2?8的粘壤土。器材:顯微鏡、培養(yǎng)皿、恒溫培養(yǎng)箱、濾紙、生物解剖器、250ml、1L容量瓶、玻璃棒、點(diǎn)滴板、載玻片、蓋玻片等。藥品:鹽酸、冰醋酸、龍膽紫染液、乙醇、70%酒精、重絡(luò)酸鉀、蒸餾水1.1實(shí)驗(yàn)方法1?1?1選種f浸種f催芽f處理選取顆粒飽滿(mǎn)、色澤均勻的蠶豆種子作為實(shí)驗(yàn)材料。將選取好的蠶豆種子臵于培養(yǎng)皿中加蒸餾水浸種24小時(shí),期間換水2次。將浸泡24小時(shí)之后的蠶豆種子臵于25°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),直至生根l-2cm。稱(chēng)取1g重鉻酸鉀溶于蒸餾水中,轉(zhuǎn)入1L容量瓶中定容。將生根1-2cm的蠶豆分成16份,分別用lg/L重鉻酸鉀溶液、0.5g/L重鉻酸鉀溶液(用lg/L重鉻酸鉀溶液稀釋?zhuān)?.25g/L重鉻酸鉀溶液(lg/L重鉻酸鉀溶液稀釋)處理,對(duì)照用自來(lái)水處理。每個(gè)處理均為4份)。1.1.2蠶豆根尖微核試驗(yàn)(半數(shù)保留,恢復(fù)培養(yǎng)24小時(shí)后進(jìn)行此項(xiàng))先用卡諾氏固定液固定,后解離、染色、制片觀察卡諾氏固定液的配制:3乙醇:1冰醋酸解離液的配制:l鹽酸:l乙醇固定:切取lcm左右的根尖,用卡諾氏固定液固定24小時(shí)后棄去固定液,移入70%酒精中保存。解離:棄去固定液,用蒸餾水漂洗2次,吸凈水,加入解離液解離20分鐘,棄去解離液,蒸餾水漂洗2次。染色:截取1-2mm蠶豆根尖于點(diǎn)滴板內(nèi),滴加適量的龍膽紫染色液染色10分鐘,加蓋玻片,壓片觀察,記錄有微核的細(xì)胞數(shù)目。直接解離、染色、制片觀察解離:切取lcm左右的根尖,用蒸餾水洗2次,吸凈水,加入解離液解離20分鐘,棄去解離液,蒸餾水漂洗2次。染色:截取1-2mm蠶豆根尖于點(diǎn)滴板內(nèi),滴加適量的龍膽紫染色液染色10分鐘,加蓋玻片,壓片觀察,記錄有微核的細(xì)胞數(shù)目。1、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析2.1微核形成與識(shí)別:首先在低倍鏡中找到分生組織區(qū)細(xì)胞分散均勻,分裂相較多的部位,再轉(zhuǎn)高倍鏡觀察,找到微核。在主核大小的1/3以下,并與主核分離的小核。小核著色與主核相當(dāng)或稍淺。小核形態(tài)為圓形、橢圓形或不規(guī)則型。不同物質(zhì)對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞微核的誘導(dǎo)效應(yīng)以蒸餾水和重鉻酸鉀溶液處理蠶豆根尖后,觀察并計(jì)算其微核形成率。鏡檢發(fā)現(xiàn)微核位于細(xì)胞質(zhì)中,為與主核完全分開(kāi)的圓形或橢圓形核,大小約為主核的1/3,其染色程度與主核一致或略淺于主核。分析表明,不同處理對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞微核的誘導(dǎo)隨處理液不同而存在差異。不同處理蠶豆根尖細(xì)胞后的微核率在2%0?10%0之間。結(jié)果表明,重鉻酸鉀溶液誘導(dǎo)蠶豆根尖細(xì)胞產(chǎn)生的微核率顯著高于蒸餾水(P<0.05)。3.2不同濃度重鉻酸鉀溶液對(duì)蠶豆根尖細(xì)胞微核的誘導(dǎo)效應(yīng)以三種不同濃度的重鉻酸鉀溶液(規(guī)兒重鉻酸鉀溶液、0.5g/L重鉻酸鉀溶液、0.25g/L重鉻酸鉀溶液)處理根尖,觀察并計(jì)算其微核率。結(jié)果表明,處理24
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶(hù)所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶(hù)上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶(hù)上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶(hù)因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 原油進(jìn)口中文合同模板
- 裝修協(xié)會(huì)質(zhì)保合同模板
- 飯店簽合同模板
- 銅管買(mǎi)賣(mài)合同模板
- 賣(mài)方房子定金合同模板
- 瓷磚購(gòu)銷(xiāo)付款合同模板
- 建設(shè)合伙合同模板
- 父母和孩子上學(xué)合同模板
- 家用肥料購(gòu)買(mǎi)合同模板
- 醫(yī)美交錢(qián)合同模板
- 2024年浙江省嘉興平湖市事業(yè)單位招聘57人歷年高頻難、易錯(cuò)點(diǎn)500題模擬試題附帶答案詳解
- 2024年時(shí)事政治試題【帶答案】
- 倉(cāng)庫(kù)租賃、物資倉(cāng)儲(chǔ)保管服務(wù)投標(biāo)方案(技術(shù)方案)
- 項(xiàng)目七《包餃子》(課件)三年級(jí)上冊(cè)勞動(dòng)人教版
- 2024-2030年中國(guó)玻尿酸填充行業(yè)市場(chǎng)發(fā)展趨勢(shì)與前景展望戰(zhàn)略分析報(bào)告
- 備戰(zhàn)2025年高考語(yǔ)文易錯(cuò)題(新高考專(zhuān)用)易錯(cuò)題27 古詩(shī)文默寫(xiě)之開(kāi)放性默寫(xiě)題-不會(huì)在開(kāi)放中找限制含答案
- 中國(guó)郵政集團(tuán)有限公司浙江省分公司招聘筆試題庫(kù)2024
- 十一屆三中全會(huì)
- 2024年四川公路橋梁建設(shè)集團(tuán)有限公司招聘筆試參考題庫(kù)含答案解析
- 科大訊飛蜻蜓fm合作方案
- 《小兒推拿》PPT課件(完整版)
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論