液相色譜法測奶制品中的防腐劑含量

液相色譜法測奶制品中的防腐劑含量第一頁，共十五頁，2022年，8月28日主要內(nèi)容第二頁，共十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)背景食品防腐劑可以抑制食品中的微生物的繁殖或殺滅食品中的微生物，苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鈉鹽是常用的食品防腐劑。但如果添加過量，會(huì)破壞食品中的營養(yǎng)成分，不僅能破壞維生素B1,還能使鈣形成不溶性物質(zhì),影響人體對(duì)鈣的吸收,同時(shí)對(duì)人的胃腸有刺激作用,過量食用還可引發(fā)癌癥。苯甲酸的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于山梨酸,但因苯甲酸在酸性條件下抑菌范圍廣,以及價(jià)格低廉,仍作為主要防腐劑加入到食品中。但是苯甲酸是不允許在乳制品中添加的。然而近年來中國奶制品大多被檢出苯甲酸，雖然含量不高，但足以影響嬰兒等特殊人群的健康。第三頁，共十五頁，2022年，8月28日性狀與性能山梨酸苯甲酸無色晶體粉末，相對(duì)分子質(zhì)量為：112.13，熔點(diǎn)132～135℃，沸點(diǎn)228℃，耐光耐熱性好，難溶于水，溶于乙醇，乙醚，花生油和丙酮。白色晶體，相對(duì)分子質(zhì)量為144.11，熔點(diǎn)121.7℃，沸點(diǎn)249.2℃，常溫下難溶于水，溶于熱水，乙醇，氯仿，乙醚，丙酮，二硫化碳等。第四頁，共十五頁，2022年，8月28日食品中測定防腐劑方法的比較第五頁，共十五頁，2022年，8月28日食品中測定防腐劑方法的選擇檢測苯甲酸和山梨酸一般采用薄層色譜法、氣相色譜法和液相色譜法。薄層色譜法是一種定性半定量的測定方法，雖然靈敏度高但重現(xiàn)性差。氣相色譜樣品處理工作量大、試劑毒性強(qiáng)，且該方法由于填充柱的吸附及柱效能差別較大，使標(biāo)準(zhǔn)系列線性差，最低檢出限較高。對(duì)于含量低或稀釋倍數(shù)大的樣品無法檢測，而液相色譜法樣品處理相對(duì)簡單。另外，高效液相色譜因采用高壓輸液泵和小顆粒的填料，與經(jīng)典的液相色譜相比具有很高的柱效和分離能力。故本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測定防腐劑的含量。第六頁，共十五頁，2022年，8月28日高效液相法的測定過程第七頁，共十五頁，2022年，8月28日儀器及試劑儀器：高效液相色譜儀（紫外檢測器）微量進(jìn)樣器（100um）超聲波發(fā)生器;溶劑過濾器;0.45μm濾膜;容量瓶;恒溫水浴鍋試劑：液態(tài)奶飲料；奶粉；甲醇（色譜純）；稀氨水（1:1）氫氧化鈉溶液（0.1mol/L）;亞鐵氰化鉀溶液（0.2mol/L）醋酸鋅溶液；磷酸鹽緩沖溶液；標(biāo)準(zhǔn)貯備液：苯甲酸(1mg/mL),山梨酸（1mg/mL）;混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（苯甲酸+山梨酸）0.2mg/mL第八頁，共十五頁，2022年，8月28日山梨酸、苯甲酸的提取第九頁，共十五頁，2022年，8月28日

液相色譜條件

柱子:EclipseXD13-C18柱(4.6mm×150mm，5μm);流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖溶液-甲醇(V/V90:10);等梯度洗脫;流速0.3ml/min;保留時(shí)間15min;柱溫35℃;進(jìn)樣量20ul;紫外檢測波長227nm；第十頁，共十五頁，2022年，8月28日實(shí)驗(yàn)步驟1.混合標(biāo)準(zhǔn)液的配置分別移取混合標(biāo)準(zhǔn)工作0.00ml,1.00ml,2.00ml,3.00ml,4.00ml,5.00ml,5.00ml于6個(gè)容量瓶（10ml），稀釋定容。2.流動(dòng)相處理流動(dòng)相用0.45um水相濾膜進(jìn)行減壓過濾和超聲脫氣處理3.開機(jī)出現(xiàn)平直基線進(jìn)樣4.定性分析分別進(jìn)苯甲酸,山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液10uL,確定各個(gè)峰保留時(shí)間5.標(biāo)準(zhǔn)曲線測定分別吸取60uL的苯甲酸和山梨酸混合標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)樣，建立定量分析表6.樣品分析取樣品60uL進(jìn)樣，記錄保留時(shí)間和峰面積第十一頁，共十五頁，2022年，8月28日標(biāo)準(zhǔn)色譜圖第十二頁，共十五頁，2022年，8月28日液相色譜儀使用注意事項(xiàng)(1)使用高效液相色譜級(jí)的溶劑與試劑，溶劑和水必須進(jìn)行過濾。(2)必須對(duì)含有緩沖鹽的流動(dòng)相進(jìn)行過濾（0.45um）。(3)流動(dòng)相使用前必須脫氣。(4)改變流動(dòng)相時(shí)防止交叉污染。(5)不要使用陳舊的流動(dòng)相，定期清洗流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶。(6)定期清洗燒結(jié)不銹鋼吸濾頭。(7)防止過高壓力沖擊色譜柱。(8)每次使用后要沖洗干凈進(jìn)樣閥中殘留的樣品和緩沖鹽，防止無機(jī)鹽沉積和樣品微粒磨損閥轉(zhuǎn)子。(9)嚴(yán)禁使用氣相色譜那樣的尖頭針進(jìn)樣。(10)在注射針前加裝針式過濾器，防止樣品中的微粒進(jìn)入進(jìn)樣閥(11)色譜柱不用卸下前:a.必須洗去緩沖液；b.防止產(chǎn)生微生物；c.用大于10%的有機(jī)溶劑充滿整個(gè)色譜柱；d.柱卸下后用柱堵頭將色譜柱首尾密封。第十三頁，共十五頁，2022年，8月28日參考文獻(xiàn)1.祝偉霞,魏蔚,楊冀州,劉亞風(fēng)《高效液相色譜法測定乳飲料和奶制品中苯甲酸和山梨酸》,中國國境衛(wèi)生檢疫雜志,2005年10月第28卷第5期2.周毅剛,龍?zhí)K,王曉春,等.高效液相法測定食品中苯甲酸和山梨酸含量.中國醫(yī)師雜志,2001,13(3):184-1883.全國