液相色及其檢測技術(shù)

液相色及其檢測技術(shù)第一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日主要內(nèi)容液相色譜基本知識液相色譜常見故障及維護保養(yǎng)液相色譜的應用檢測方法前處理技術(shù)報告及數(shù)據(jù)分析液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)第二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日1液相色譜基本知識第三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日1.1液相色譜的發(fā)展?20世紀初，俄國植物學家茨維特（Tswett）提出經(jīng)典液相色譜法。1938年有了薄層色譜。1944年有了紙色譜。?20世紀50年代后，氣相色譜迅速發(fā)展，液相色譜發(fā)展緩慢。?20世紀60年代末期，隨著微粒固定相的研制成功，及高壓輸液泵和高靈敏度檢測器的出現(xiàn)，高效液相色譜方法在經(jīng)典液相色譜法和氣相色譜法的基礎(chǔ)上建立起來。?20世紀70年代，往復式雙柱塞恒流泵占主導地位，Kirkland制備出多孔球形硅膠，平均粒徑7μm。?20世紀80年代，研制出二極管陣列紫外吸收檢測器。?20世紀90年代，HPLC高速發(fā)展，聯(lián)用技術(shù)，多維色譜成為活躍的新技術(shù)領(lǐng)域。?2000年后，亞二微米填料（色譜柱50mm），高分離度快速（超高效）液相色譜提高了分析的速度。第四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日早期的柱色譜玻璃柱填料：硅膠氧化鋁纖維素樣品溶劑重力洗脫第五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日1.2高效液相色譜的組成什么是高效液相色譜(HPLC)高效液相色譜的定義為：高壓泵驅(qū)動液體(流動相)通過裝填有涂層顆粒的柱管(色譜柱)將混合物分離為單一組分的色譜分離技術(shù)。第六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日HPLC的主要組成部分溶劑輸送系統(tǒng)(泵)溶劑–流動相進樣器(進樣閥)色譜柱–固定相檢測器數(shù)據(jù)系統(tǒng)第七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第十頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第十一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日HPLC的特點.高壓：系統(tǒng)壓力10-40MPa；(1MPa=10bar=147psi).高速：分析時間短,僅幾分鐘到幾十分鐘；.高效：柱效高為5000-30,000塔板數(shù)/m.高選擇性：適于復雜、多組分樣品的分離.高靈敏度：最低檢測線（LOD）UVD10-9g;FLD10-12g；RID10-6g；第十二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊

液相色譜儀由輸液系統(tǒng)，進樣系統(tǒng)，分離系統(tǒng)，檢測系統(tǒng)和記錄數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)五部分組成。１.2.1輸液系統(tǒng)１)流動相和儲液罐流動相－有機溶劑，純水，緩沖鹽溶液等儲液罐－玻璃，不銹鋼，塑料容器，0.5L-4L 連接管路－塑料管，配有不銹鋼或玻璃過濾器，孔徑為0.45m左右。第十三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日圖片第十四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第十五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊2）輸液泵A.對泵的要求a)泵要耐腐蝕，一般采用不銹鋼材料制成，b)在高壓下能連續(xù)工作，壓力一般為40-50MPa,24h工作，c）輸出流量范圍寬，填充柱：0.1-10（mL/min）微孔柱：0.01-10(mL/min）d)流量穩(wěn)定，流量的控制精度應小于１％。

第十六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊B.常用泵氣動放大泵、往復泵、螺旋注射泵、隔膜泵等幾種，由于氣動放大泵和螺旋注射泵存在流量調(diào)節(jié)不便、溶劑更換困難、不利于進行梯度洗脫等缺點,應用越來越少。往復式柱塞泵的應用更為普遍。 a)恒流泵如往復泵 （１）注射型－通過控制電機轉(zhuǎn)數(shù)來改變柱塞移動速度,操作方便,缺點是液缸容積小,不利于連續(xù)工作。 (２）往復型－有并聯(lián)和串聯(lián)兩種,如安捷倫1100、1200的泵就是雙柱塞、往復式串聯(lián)泵。b)恒壓泵如氣動放大泵是輸出壓力不變的泵，系統(tǒng)阻力不變時可保持恒定流量，否則流量改變。第十七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊3）梯度洗脫裝置

梯度洗脫是在洗脫過程中，連續(xù)或間斷的改變流動相中含有的兩種或兩種以上不同極性溶劑的比例，即調(diào)節(jié)流動相的極性，使樣品中的組分可在最短的時間內(nèi)達到滿意的分離。實現(xiàn)梯度洗脫，需要二元或多元泵，梯度控制裝置及軟件。a低壓梯度（也叫外梯度）：在常壓下，預先按一定程序?qū)煞N或多種不同極性的溶劑混合后，再用一臺高壓泵輸入色譜柱。b高壓梯度（或稱內(nèi)梯度系統(tǒng)）：利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按設(shè)定的比例送入梯度混合室，混合后，進入色譜柱。第十八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日氣動放大泵（恒壓）往復式柱塞泵（恒流）第十九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊1.2.２進樣系統(tǒng)定量地將試樣注入色譜系統(tǒng)的裝置。1)六通閥進樣器耐高壓，死體積小，不銹鋼材料制成，定量管體積5-10L。2)自動進樣器由計算機控制，按預先編制的進樣程序進行，進樣量連續(xù)可調(diào)，重復性好。第二十頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊1.2.３分離系統(tǒng)包括色譜柱和柱箱及控溫部分１）色譜柱內(nèi)壁拋光的直型柱管，內(nèi)裝固定相，標準柱長一般為10-50cm，內(nèi)徑4.6mm，微孔柱內(nèi)徑0.5-1.0mm。

第二十一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第二十二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊２）柱箱及控溫部分

要求控制柱溫的情況：a.標準分析中，要求保留時間再現(xiàn)；b.通過改變柱溫提高分離效率；c.分析高分子化合物或大黏度樣品：d.有生物活性的樣品柱溫要低于室溫；e.復雜樣品采用二維色譜技術(shù)，需在不同溫度下操作。

柱箱控溫范圍：低于室溫10℃-80℃，對凝膠滲透色譜，柱溫從室溫到150℃。第二十三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

液相色譜儀各個模塊1.2.４檢測系統(tǒng)

檢測器是液相色譜三大關(guān)鍵部件之一，用于監(jiān)測色譜柱分離后組分濃度的變化，由記錄儀繪出色譜圖來進行定性定量分析。理想的檢測器應具有以下特征：a.靈敏度高，b.對所有溶質(zhì)都有快速響應，c.線性范圍寬，d.適用范圍廣等。

常用的檢測器有:紫外吸收檢測器,熒光檢測器,示差折光檢測器,電導檢測器等。第二十四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊1)紫外吸收檢測器

A)固定波長由光源(低壓汞燈),濾光片，流通池,光電池接收器等組成.波長為254nm,280nm,流通池體積為5-10L,光路為5-10mm。光電池接收信號經(jīng)放大輸出。B)可變波長一般采用氘燈和鎢燈作光源，波長在190-700nm范圍內(nèi),由光柵將光分為單色光，由光電二極管接收某一特定波長的信號。第二十五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊1)紫外吸收檢測器

C）光二極管陣列檢測器是一種新型的紫外吸收檢測器，進入流通池的不是單色光，獲得的信號是全部紫外光波長的色譜信號，因此不僅可以進行定量檢測，還可以提供組分的光譜定性信息。采用鎢燈和氘燈做光源，光照射到流通池上，透過光經(jīng)光柵色散后，投射到由1024個二極管組成的陣列上被檢測。全部檢測過程由計算機控制，不僅可以繪制隨時間的變化進入檢測器的液流的光譜吸收曲線－－吸光度隨波長的變化曲線，可以畫出三維立體譜圖。第二十六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊２）熒光檢測器

利用某溶質(zhì)在受紫外光激發(fā)后可發(fā)射熒光的性質(zhì)進行檢測的．是一種高靈敏度選擇性檢測器。激發(fā)光源常用氙燈，可發(fā)出250-600nm連續(xù)波長的強光，經(jīng)透鏡單色器分出有一定波長的激發(fā)光，照射在流通池上，溶質(zhì)受激發(fā)后產(chǎn)生的熒光，經(jīng)聚光和單色器，選擇出需要檢測波長的光，聚焦在光電倍增管上，將光轉(zhuǎn)變成電信號，經(jīng)放大輸出到微處理機。第二十七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊３）示差折光檢測器

是通過連續(xù)監(jiān)測參比池和測量池中溶液的折光率之差來測量試樣的濃度的，是一種通用型檢測器。由于它對流動相的任何變化都有響應，因此不能用于梯度洗脫。另外受溫度影響波動大，靈敏度低，使用時有一定限制。第二十八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊４）電導檢測器

是一種選擇性檢測器，通過測量流動樣品的電導或電阻進行檢測，主要用于檢測以水溶液為流動相的離子型溶質(zhì)，在離子色譜中應用廣泛。有代表性的電導檢測器是雙電極微型檢測器和五電極電導檢測器。第二十九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日液相色譜儀各個模塊1.2.5色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)1)記錄儀,繪制色譜圖。2)微處理機，與色譜儀連接構(gòu)成一個比較完整的色譜分析系統(tǒng)。它包括一定容量的程序存儲器，方法存儲器，數(shù)據(jù)存儲和譜圖記錄和顯示器等，通過鍵功能給出操作參數(shù)指令。3)色譜工作站，全部操作參數(shù)的控制，多臺儀器控制，網(wǎng)絡運行功能等。第三十頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日1.3液相色譜的分離模式HPLC的分離模式，主要有四種反相色譜正相和吸附色譜離子交換色譜尺寸排阻色譜第三十一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日1.3.1反相色譜柱填料是非極性的(如，C18,C8,C3,苯基，等.)流動相是水（緩沖液）+可與水混溶的有機溶劑(如，甲醇、乙腈）反相色譜（RPLC或RPC）是最常用的模式……90%以上的色譜工作者都用這種模式，或者說大多數(shù)液相色譜的檢測，都是這種模式。這種技術(shù)可用于分離非極性、極性、可離子化的和離子型分子…….RPC的適用性非常廣泛第三十二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日對于包含各種化合物的樣品來說，經(jīng)常要采用梯度洗脫…….開始時流動相以水為主，然后隨著時間延長逐漸加入有機溶劑。有機溶劑增加了溶劑強度，洗脫在RPC填料上保留很強的化合物。第三十三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日1.3.2正相色譜在這一模式中，柱填料是極性的（如，硅膠、氰丙基鍵合、氨基鍵合等），而流動相是非極性的（如己烷、異辛烷、二氯甲烷、醋酸乙酯）進行正相分離的實驗不到10%這項技術(shù)有以下應用：.水敏性化合物.幾何異構(gòu)體.順-反異構(gòu)體第三十四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日1.3.3離子交換色譜離子交換色譜中的固定相是一些帶電荷的基團，這些帶電基團通過靜電相互作用與帶相反電荷的離子結(jié)合。如果流動相中存在其他帶相反電荷的離子，按照質(zhì)量作用定律，這些離子將與結(jié)合在固定相上的反離子進行交換。固定相基團帶正電荷的時候，其可交換離子為陰離子，這種離子交換劑為陰離子交換劑；固定相的帶電基團帶負電荷，可用來與流動相交換的離子就是陽離子，這種離子交換劑叫做陽離子交換劑。第三十五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日陰離子交換柱的功能團主要是－NH2，及－NH3：陽離子交換劑的功能團主要是－SO3H及－COOH。其中-NH3離子交換柱及-SO3H離子交換劑屬于強離子交換劑，它們在很廣泛的pH范圍內(nèi)都有離子交換能力；-NH2及-COOH離子交換柱屬于弱離子交換劑，只有在一定的pH值范圍內(nèi)，才能有離子交換能力。離子交換色譜主要用于可電離化合物的分離，例如，氨基酸自動分析儀中的色譜柱，多肽的分離、蛋白質(zhì)的分離，核苷酸、核苷和各種堿基的分離等。

第三十六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日1.3.4尺寸排阻色譜空間排阻色譜法又名尺寸排阻色譜法(sizeexclusionchromatography，SEC)，是按分子大小順序進行分離的一種色譜方法。被廣泛應用于大分子分級，即用來分析大分子物質(zhì)相對分子質(zhì)量的分布。其固定相為化學惰性多孔物質(zhì)——凝膠，凝膠具有一定大小的孔穴，體積大的分子不能滲透到孔穴中去而被排阻，較早的淋洗出來；中等體積的分子部分滲透；小分子可完全滲透入內(nèi)，最后洗出色譜柱。這樣，樣品分子基本按其分子大小先后排阻，從柱中流出。第三十七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2液相色譜儀的日常維護與常見故障排除第三十八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.1液相色譜儀的日常維護2.1.1儲液器流動相使用HPLC級試劑/溶劑；含緩沖鹽的流動相過0.45μm膜除去微粒物質(zhì);更換流動相時,應徹底清洗，防止交叉污染；定期清潔儲液器及過濾白頭，防止滋生微生物。第三十九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.1.2輸液泵密封墊易損壞引起故障，每天實驗結(jié)束一定要認真沖洗泵,注意防止堵塞,使用緩沖鹽流動相時,更要小心。可以配備泵的在線清洗裝置。使用HPLC級試劑,注意泵壓力不要太高,要適當調(diào)整壓力,一般壓力上限在10-20MPa，下限為0.5MPa，注意防止因泵堵塞造成壓力過高損壞柱塞桿或燒壞電機。第四十頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.1.3進樣器停機前一定沖洗干凈進樣器內(nèi)殘留的樣品或緩沖鹽，防止樣品和無機鹽沉積造成進樣閥轉(zhuǎn)子面磨損或堵塞。注射器最好使用儀器自配尖頭、平頭針，不要用其它儀器的。第四十一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.1.4色譜柱—防止柱性能下降1溶劑的化學腐蝕性不能太強；2避免顆粒物在柱頭沉降；3柱壓不能太高，防止沖擊太大；4流動相pH值小于7時，最好用大粒度同種填料的予柱；5柱頭加濾片（燒結(jié)不銹鋼),需要時加保護柱；6經(jīng)常清洗柱；7長時間不用時要保存好,一定要洗去緩沖鹽,加入有機溶劑（如乙腈、甲醇均可），將柱兩端擰緊,保持柱填料濕潤。第四十二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.1.5檢測器1.保持清潔，每天用后與色譜柱一起清洗；2.使用脫過氣的流動相，防止氣泡滯留池內(nèi)；3.檢測器燈有一定壽命，不用時不開燈。第四十三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.1.6記錄器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄儀:熱敏式打印頭要注意記錄紙的質(zhì)量,開機前注意檢查走紙部件,不要卡紙。色譜工作站:防止網(wǎng)上病毒損壞軟件。不用移動硬盤或是U盤等拷貝工作站上的數(shù)據(jù)，如果必須拷貝，也只用儀器專用的。第四十四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

2.2常見故障的排除2.2.1儲液器1）脫氣不充分(噪聲大，出毛刺)用He脫氣真空脫氣超聲脫氣加熱回餾脫氣(混合流動相不宜)第四十五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

2）流動相供給不暢，泵壓力不穩(wěn)流動相接近用完，可能吸入部分氣體；過濾器（過濾白頭）堵塞（有顆粒，長霉）；可能是流速過高,阻力大,造成走空現(xiàn)象。解決辦法：更換流動相，清洗過濾器，降低流速，加大管路內(nèi)徑;抬高儲液器。第四十六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

3）儲液器或流動相被污染產(chǎn)生有規(guī)則的噪聲；基線上升，梯度洗脫出鬼峰；

原因:溶劑質(zhì)量差（含雜質(zhì)多）；配流動相的玻璃器皿不干凈,微生物影響；配制流動相的操作不當（過濾、脫氣、攪拌)第四十七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.2.2輸液泵1）單向閥a.球和閥座粘在一起，堵死，打不出溶劑，(緩沖鹽流動相)用高質(zhì)量的溶劑沖洗，不同極性溶劑沖洗,如水、甲醇、異丙醇、二氯甲烷…，更換新單向閥。b.球和閥座密封不嚴，壓力不穩(wěn)，氣泡進入閥中，緊貼在閥體內(nèi)，使球難以返回閥座，引起倒流，壓力和流速變化大，可能有小晶體顆粒。

清除氣泡的辦法：打開排液閥，大流量沖洗，用脫過氣的甲醇沖洗，一般可解決問題。第四十八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

2）泵墊圈磨損或破碎：高壓下壓力不穩(wěn)，從泵頭往外滲漏流動相，色譜峰的保留時間會改變。解決辦法：更換新墊圈。更換方法按維修說明書上的方法一步步操作。或是請工程師上門，尤其是頭一次維修。注意：

輸液泵的墊圈要和流動相匹配協(xié)調(diào)。多數(shù)墊圈和流動相是協(xié)調(diào)的,但有的墊圈適用于甲醇、水、乙腈，在四氫呋喃中溶解、變粘、變軟。需換墊圈時,應向廠商咨詢墊圈的規(guī)格型號。色譜工作者一般應學會換密封墊圈。第四十九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

3）柱塞桿故障磨損、漏液使用不當被折斷柱塞桿被卡住，不能運動。更換新柱塞桿請維修工程師幫助解決，或參照專門的操作手冊自己動手更換。第五十頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.2.3進樣系統(tǒng)1）滲漏轉(zhuǎn)子密封墊圈松緊不合適；墊圈不配套；組裝不對。2）堵塞,樣品打不進去。樣品管堵塞：環(huán)管用反沖法或超聲清洗排除（或換新管).

手動進樣系統(tǒng)器第五十一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日3）注樣孔a)裝樣時針頭周圍滲漏：孔道堵塞，或者放空管和樣品管太細，阻力太大；針頭密封管規(guī)格不對，針頭太細。b)樣品滯留閥在進樣位置停留時間不夠。要求停留時間至少應讓流動相流過的體積是環(huán)體積的10-20倍。(一般是在下一針進樣前才將閥扳到裝樣位置)第五十二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.2.3進樣系統(tǒng)a.樣品瓶不配套瓶小——針彎、折斷瓶大——樣品少，抽不上樣瓶破碎更換合適的樣品瓶。b.注意樣品瓶隔墊，防止污染。c.進樣器針頭堵塞（樣品、緩沖鹽、隔墊碎片、針頭本身)，可用溶劑清洗，金屬絲疏通，或換新針頭。

自動進樣系統(tǒng)第五十三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.2.3進樣系統(tǒng)d.樣品滯留：空白溶劑出色譜峰.加倍清洗，或調(diào)整樣品瓶順序，（從低濃度開始，高濃度放后面）或在樣品瓶前放清洗液瓶.

自動進樣系統(tǒng)第五十四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.2.4色譜柱色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟正確選擇色譜柱是液相成功分析的關(guān)鍵1)塔板數(shù)下降a.樣品處理不合適，選擇適當?shù)臉悠穬艋椒?，選擇合適流動相。b.柱頭塌陷，填裝修補，最好專業(yè)人士來做。2)峰形變壞出現(xiàn)拖尾峰，分叉峰，非高斯峰。與塔板數(shù)下降有關(guān)，峰形壞保留時間不變，可能是柱堵塞(不銹鋼燒結(jié)片)，或柱頭有空穴。第五十五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日不同分離模式的色譜柱反相色譜柱：C18，C8，C3，苯基，氰基等正相色譜柱：硅膠，氨基，氰基，二醇基等離子交換柱：有強陰，強陽，弱陰，弱陽之分體積排阻柱：凝膠滲透色譜柱與凝膠過濾色譜柱手性柱：用于手性化合物拆分親和色譜柱：依據(jù)溶質(zhì)與填料上配基之間的分子識別特性而實現(xiàn)分離第五十六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.2.4色譜柱

3)柱壓突然增大樣品沉積在柱內(nèi),用能溶解樣品的溶劑沖洗（斷開柱和檢測器）可正向沖，反向沖。柱內(nèi)硬件有問題： 濾片堵塞，換新片; 塌陷：用相同填料填充、修補。第五十七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.2.4色譜柱

4)保留時間改變不同柱保留時間的變化,主要是填料差異造成的,不同牌號柱出峰順序不變，保留時間有小的變化。若峰順序變化，保留時間變化較大，應考慮換柱或優(yōu)化分離條件。對專門的分析最好用同一批號的柱子。第五十八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日由色譜柱引起的故障故障現(xiàn)象解決辦法過濾片堵塞壓力增高、N下降、峰形差倒柱沖洗或換過濾片柱頭塌陷峰分叉、N下降修補柱頭健合相流失保留值改變、峰形差、N下降換柱樣品堵塞壓力高用能溶解樣品的溶劑沖洗強吸收樣品N下降、保留值小強溶劑反沖第五十九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日理論塔板數(shù)理論塔板數(shù)（theoreticalplatenumber,N）用于定量表示色譜柱的分離效率（簡稱柱效）。N取決于固定相的種類、性質(zhì)（粒度、粒徑分布等）、填充狀況、柱長、流動相的種類和流速及測定柱效所用物質(zhì)的性質(zhì)。如果峰形對稱并符合正態(tài)分布，N可近似表示為：

N=（tR/σ）2=16(tR)2/W=5.54(tR/W1/2)2

W：峰寬；σ：曲線拐點處峰寬的一半，即峰高0.607處峰寬的一半。

N為常量時，W隨tR成正比例變化。在一張多組分色譜圖上，如果各組份含量相當，則后洗脫的峰比前面的峰要逐漸加寬，峰高則逐漸降低。用半峰寬計算理論塔板數(shù)比用峰寬計算更為方便和常用，因為半峰寬更容易準確測定，尤其是對稍有拖尾的峰。N與柱長成正比，柱越長，N越大。用N表示柱效時應注明柱長，，如果未注明，則表示柱長為1米時的理論塔板數(shù)。（一般HPLC柱的N在1000以上。）

第六十頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.2.5檢測器1）紫外—可見光檢測器a.燈故障:基線噪聲大,靈敏度低,氘燈壽命:1000-3000h 鎢燈壽命:2000h一般至少使用6個月以上，可能接近壽命期限。b.流通池基線有波動，或是基線變高、噪音明顯流通池內(nèi)有氣泡：用脫氣甲醇，不同流量沖洗。池堵塞（入口、出口、池內(nèi)）：用可溶堵塞物的溶劑沖洗（緩沖鹽用水沖洗）池污染：異丙醇、二氯甲烷、6mol/LHNO3沖洗.

第六十一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日檢測器

C非線性響應超出線性范圍:樣品量太大;檢測器的衰減超出了其線性動力學范圍;流動相的紫外吸收比較強.

第六十二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

2.2.5檢測器

2)溫度影響環(huán)境溫度變化引起基線漂移。流動相溫度變化引起折射率改變，紫外光傳導變化。柱溫變化引起基線漂移。第六十三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

2.2.5檢測器

3)信號線故障記錄儀和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)信號線插接不緊,接觸不良，信號很弱，出現(xiàn)不需要的噪音,此時按說明書檢查線路連接。地線對儀器很重要,儀器外殼和信號線的接地很嚴格，接地不良會出現(xiàn)較大的基線噪聲，接錯線會造成短路，燒毀儀器。第六十四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日2.2.5檢測器

4)波長問題正確選擇波長:既照顧到靈敏度,又考慮到穩(wěn)定性。

HPLC中，波長選擇是依據(jù)待測物質(zhì)最大吸收波長來決定的。通常，高效液相色譜檢測器為紫外檢測器，所以HPLC中波長的選擇和紫外波長選擇一致，均為選擇最大吸收波長，這樣能保證檢測的靈敏度和響應值最高。第六十五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日3與液相色譜儀配套使用的設(shè)備3.1設(shè)備所在儀器室的輔助設(shè)施3.2與液相色譜配套的前處理設(shè)備

第六十六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日3.1設(shè)備所在儀器室的輔助設(shè)施空調(diào)：控制溫度排氣罩：排除有機溶液溫濕度計：適時記錄溫度、濕度避光的窗簾：避光雙層窗戶：防塵大功率的電源線：10A、16A、20A。第六十七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日臺面的承重、距離墻面有50-70cm的距離、儀器臺面的寬度：邊臺一般80cm、中央臺150cm第六十八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日3.2與液相色譜配套的前處理設(shè)備

（提取）（凈化）濃縮水浴鍋分液漏斗振蕩器恒溫水浴振蕩器振蕩器超聲波振蕩器渦旋混合器固相萃取儀真空泵（無油隔膜泵）溶劑過濾裝置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀氮吹儀平行蒸發(fā)儀離心機（配置不同的轉(zhuǎn)子或適配器）各種規(guī)格的移液器瓶口分配器冷卻循環(huán)水裝置第六十九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第七十頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第七十一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第七十二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第七十三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第七十四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日3.3應急設(shè)施延時電源：應對突發(fā)事件，如突然停電EPS應急電源:提供一種符合用戶要求的具有獨立回路的應急供電系統(tǒng)，該系統(tǒng)能夠在應急狀態(tài)下提供緊急供電，用來解決只有一路市電、缺少第二路電源，或代替發(fā)電機組構(gòu)成第二電源。規(guī)格范圍：3KW—800KW安裝形式：落地式（標準配電柜）靜態(tài)、無噪音、無排煙、無公害、無火災隱患；自動切換。可實現(xiàn)無人值守；節(jié)能，非應急供電時，基本不耗電；性能穩(wěn)定，安全可靠，使用壽命長；與發(fā)電機組相比縮合造價低，性能價格比好。

第七十五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日3.4液相色譜實驗室的管理日常管理：包括衛(wèi)生、開關(guān)門窗、水、電、氣、空調(diào)、溫濕度記錄等等。設(shè)備的使用記錄：使用前后儀器的狀態(tài)是否正常、檢測樣品名稱或編號、檢測參數(shù)、檢測人、溫濕度等；維護保養(yǎng)也要記錄、維修也要記錄。第七十六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日H:\檢驗室管理檢查表.doc第七十七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日儀器室管理內(nèi)容1、管理人員上午上班查看整理內(nèi)容地面：整潔；物品按規(guī)定區(qū)域存放；操作臺面：臺面干凈、物品擺放整齊；試劑架：干凈、試劑擺放整齊；櫥子內(nèi)外：物品整齊、內(nèi)外干凈；抽屜內(nèi)外：抽屜內(nèi)物品整齊，抽屜邊框干凈；通風櫥：邊框玻璃干凈，臺面整潔，物品擺放整齊；空調(diào)：干凈整潔；試劑：過期試劑及時清理，試劑瓶干凈，標簽粘貼一致規(guī)范；窗臺窗框：擦拭干凈；門：門里、門外、門框清潔干凈；儀器：表面整潔、按區(qū)域存放；儀器使用記錄：固定區(qū)域存放，檢查有無漏簽，干凈整齊；溫度濕度：早8：30－9：00記錄室內(nèi)溫度和濕度，及時補充溫濕度計所需的水；其他：滅火器、線路等保持清潔、順暢。2、管理人員在下午下班時逐項檢查并記錄的項目：水：檢查回流水、水管是否關(guān)閉、滴漏；電：檢查照明、儀器等的電源是否關(guān)閉，如有儀器正在使用要注明；氣：檢查鋼瓶、氣路是否關(guān)閉，如有儀器正在使用要注明；窗：應關(guān)閉，如有必要開窗，注明原因；門：關(guān)閉。3、填表方式：符合要求的打“√”；不符合要求的打“×”；“水、電、氣、窗”等正在使用或需要打開的注明原因，或填上在用設(shè)備編號。溫度濕度：早8：30－9：00記錄室內(nèi)溫度和濕度，及時補充溫濕度計所需的水；第七十八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日H:\檢驗室管理檢查表.doc第七十九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日3.5液相色譜儀的管理專人管理、有限人員的使用定期檢定定期維護定期核查新上崗人員一定培訓后經(jīng)考核合格才能上崗對新上崗人員做好監(jiān)督第八十頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日3.5液相色譜儀的管理起草操作規(guī)程：開機前準備工作，如何開機，各個模塊如何操作，如何編輯檢測方法、如何檢測樣品、圖譜如何讓處理、如何讓關(guān)機、關(guān)機后的清理工作等等。起草維護保養(yǎng)規(guī)程：多長時間、對什么部件、如何保養(yǎng)。核查規(guī)程：核查方法？核查結(jié)果分析判定。第八十一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日4液相色譜在檢測工作中的應用第八十二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第八十三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第八十四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日食品分析主要內(nèi)容食品添加劑殘留天然化合物酸類化合物抗生素氨基酸抗氧化劑霉菌毒素糖防腐劑農(nóng)藥酯類人工甜味劑環(huán)境污染物維生素著色劑無機離子香料化合物第八十五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日舉例1---農(nóng)獸藥殘留檢測

雞肉中十種磺胺類藥物殘留的高效液相色譜紫外檢測（HPLC-UV）分析方法。采用C18柱，甲醇—水/甲醇—甲酸為流動相梯度洗脫，雞肉樣品經(jīng)過甲醇提取，正己烷脫脂，SLW固相萃取柱凈化，用HPLC法測定雞肉中十種磺胺類藥物的含量。結(jié)果表明，當雞肉樣品添加十種磺胺類藥物為0.05～0.2

mg/kg時，方法回收率為67.4%～95.6%，變異系數(shù)為4.8%～11.5%，十種磺胺類藥物最低檢出濃度為0.01

mg/g。

第八十六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日食品添加劑檢測采用ODSC18柱，甲醇—乙酸銨作為流動相，針對不同類型樣品，采用不同前處理方法，樣品處理液最后于液相色譜儀進行分析定量。結(jié)果:乙酰磺胺酸鉀、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸、阿斯巴甜在0～0.32

mg/ml濃度范圍內(nèi)，標準曲線線性關(guān)系良好，RSD為0.67%～6.8%；乙?；前匪徕浖訕嘶厥章蕿?3.1%～99.6%、苯甲酸為90.5%～98.7%、山梨酸為91.5%～102.5%、糖精鈉為91.8%～100.9%、脫氫乙酸為92.3%～99.8%、阿斯巴甜為90.3%～103.5%。

第八十七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日霉菌毒素檢測采用高效液相色譜法，使用Agilent1100色譜柱；在柱溫30℃；乙腈—甲醇—水（1∶1∶2）為流動相；流速為1.0ml/min；熒光檢測器；測出黃曲霉素在花生中的含量，方法重復性的RSD為0.38%，平均回收率為78.4%。采用甲醇水溶液提取糧食中的黃曲霉毒素，提取液經(jīng)過過濾、稀釋后，用免疫親和柱凈化，以甲醇為流動相洗脫，用高效液相色譜法直接測定。方法重復性的RSD為1.5%，平均回收率為90%～105%。

第八十八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日食品安全分析應用的特點.樣品種類繁多、基質(zhì)復雜.極性高或熱不穩(wěn)定的品種越來越多.法規(guī)標準、待測物種類與數(shù)量數(shù)量迅速增加.檢測標準日益提高LC及LC/MS已經(jīng)成為安全食品領(lǐng)域極其重要而有效的分析技術(shù)！

第八十九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日5檢測方法前處理技術(shù)第九十頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日樣品前處理的重要性最低檢測限量的限制儀器(LC

/LC-MS等)的對樣品潔凈度的高要求樣品基質(zhì)中的內(nèi)源性物質(zhì)（如脂肪、蛋白、色素、鹽份等等）對目標物的分離與檢測的干擾樣品的增多，要求前處理方法簡單快速第九十一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第九十二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第九十三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

5.1溶劑萃取

溶劑萃取方法主要有液-液萃取、液-固萃取和液-氣萃取，它們都是屬于兩相間的傳質(zhì)過程，即物質(zhì)從一相轉(zhuǎn)入另一相的過程。

溶劑萃取技術(shù)在我們液相色譜分析的樣品制備過程中，是用到最為廣泛的一種技術(shù)。第九十四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日在液-液萃取中非常重要的操作是急速的振動樣品，這樣可以確保兩的完全接觸，有助于質(zhì)量傳遞。由于物質(zhì)劇烈的振動，使得乳化現(xiàn)象經(jīng)常發(fā)生，特別是那些含有表面活性劑和脂肪的樣品。為了防止乳化形成，常采用加熱或加鹽的方法破乳。第九十五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日常用于破乳的技術(shù)有：

（1）

加鹽；

（2）

使用加熱-冷卻萃取容器；

（3）

通過離心作；

（4）加少量的不同的有機溶劑。第九十六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

5.2固相萃取

（phase

extraction

SPE）

固相萃?。⊿PE）是利用固體吸附劑將液體樣品中的目標化合物吸附，與樣品的基體和干擾化合物分離。然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達到分離和富集目標化合物的目的。與液液萃取相比固相萃取有很多優(yōu)點：固相萃取不需要大量互不相深的溶劑，處理過程中不會產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，它采用高效、高選擇性的吸附劑（固定相），能顯著減少溶劑的用量，簡化樣品的預處理過程，同時所需費用也有所減少。一般來說固相萃取費用為液液萃取的五分之一，但其缺點是目標化合物的回收率和精密度要略低于液液萃取。第九十七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日固相萃取實質(zhì)是上一種液相色譜分離，其主要分離模式也與液相色譜相同，可分為正相（吸附劑極性大于洗脫液極性），反相（吸附劑極性小于洗脫液極性），離子交換和吸附。固相萃取所用的吸附劑與液相色譜常用的固定相相同，只是在粒度上有所區(qū)別。最簡單的固相萃裝置就是一根直徑為數(shù)毫米的小柱，小柱可以是聚丙烯、聚乙烯、聚四氟乙烯等塑料，還可是不銹鋼的?，F(xiàn)在很多廠家開發(fā)了固相萃取的專用裝置，固相萃取儀。

第九十八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日SPE柱構(gòu)造固相萃取小柱構(gòu)造第九十九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日固相萃取的一般操作程序分為以下幾步聚：

（1）活化吸附劑；

（2）樣品過柱

（3）淋洗

（4）分析物洗脫

不同的模式固相萃取小柱活化所用的溶劑不同；洗脫所用溶劑也不同。

第一百頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日5.3凝膠滲透色譜（GPC）

GPC是被用來去除脂肪和其它分子量相對較高的化合物，適用的樣品范圍極廣，回收的農(nóng)藥品種多，回收率也高，不僅對油脂凈化效果好，而且分析的重現(xiàn)性好，柱子可以重復作用，已成為藥物殘留分析中的通用凈化方法。其作用類似一組分子篩，將樣品溶液加到柱子上后，用溶劑淋洗，分子量大于農(nóng)藥的類脂肪，色素，蠟質(zhì)等先被淋洗出來，然后農(nóng)藥按分子量大小相繼被淋洗出來。常用的淋洗劑有環(huán)已烷，二氯甲烷，甲苯，乙酸乙酯等，這種技術(shù)在歐美國家應用非常普遍。

第一百零一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第一百零二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日5.4固相微萃?。╯olid

phase

micro-extraction

SPME）固相微萃取（SPME）是在固相萃取上發(fā)展起來的一種新型、高效的樣品預處理技術(shù)它集采集、濃縮于一體，簡單、方便、無溶劑，不會造成二次污染，是一種有利于環(huán)保的很有應用前景的預處理方法。與液液萃取和固相萃取相比，具有操作時間短，樣品量小，無需萃取溶劑，適用于分析揮發(fā)性與非揮發(fā)性物質(zhì)，重現(xiàn)性好等優(yōu)點。

固相萃取過程是一個平衡過程，萃取的平衡時間與攪拌速度、固定相的膜厚以及被分析樣品的分配常數(shù)，擴散系數(shù)，萃取溫度有關(guān)。大分子質(zhì)量的物質(zhì)比小分子質(zhì)量的物質(zhì)需更長的分析時間。攪拌有利于減少達到平衡所需時間，當達到平衡時，固相微萃取方法的靈敏度最高。第一百零三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日固相微萃取(SPME)非常小巧,狀似一只色譜注射器，由手柄(Holder)和萃取頭或纖維頭(Fiber)兩部分構(gòu)成。萃取頭是一根外套不銹鋼細管的1cm長、涂有不同色譜固定相或吸附劑的熔融石英纖維頭，纖維頭在不銹鋼管內(nèi)可自由伸縮，用于萃取、吸附樣品;手柄用于安裝或固定萃取頭，可永久使用。

第一百零四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日第一百零五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日5.5微波萃取技術(shù)（micro

amplitude

extraction

MAE）

微波萃取就是利用極性分子可迅速吸收微波能量來加熱一些具有極性的溶劑，如乙醇、甲醇、丙酮和水等。因非極性溶劑不能吸收微波能量，所以在微波萃取中不能使用100％的非極性溶劑作為萃取溶劑。

一般可在非溶劑中加入一定比例的極性溶劑來使用。

MAE就是將樣品放在聚四氟乙烯材料樣品杯中，加入萃取溶劑后將樣品杯放入密封性好、耐高壓又不吸收微波能量的萃取罐中。由于萃取罐是密封的，當萃取溶劑加熱時，由于萃取溶劑的揮發(fā)使罐內(nèi)壓力增加。壓力的增加使用萃取溶劑的沸點也大大增加，這樣就提高了萃取溫度。同時由于密封，萃取溶劑也不會損失，也就減少了萃取溶劑的用量。第一百零六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日5.6加速溶劑萃取（ASE）加速溶劑萃取是在提高的溫度（50~200℃）和壓力（1000~3000psi或10.3~20.6MPa）下用溶劑萃取固體或半固體樣品的新穎樣品前處理方法。第一百零七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日將樣品裝入萃取池Time(min)溶劑充滿萃取池

0-1萃取池加熱加壓5樣品保持一定的壓力5

和溫度(靜態(tài)萃?。┫蜉腿〕刂凶⑷肭鍧嵢軇?.5用N2吹掃萃取池1-2萃取液準備分析.Total12-14SolventOvenCollectionVialVentExtractionCellPumpASE提取過程三、提取技術(shù)第一百零八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日ASE提取的特點有機溶劑用量少、快速、回收率高克服了超臨界萃取選擇性差、回收率低的問題被美國EPA（環(huán)保局）的標準方法所采用國際上在食品安全檢測中開始采用這一技術(shù)，設(shè)備價格昂貴第一百零九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日5.7分散固相萃取MASMAS的含義是：Multi-functionImpurityAdsorptionSPE，即“多重機制雜質(zhì)吸附萃取凈化法”。主要通過多官能化的復合吸附材料，將生物樣品中的主要干擾基質(zhì)吸附，而將強水溶性的被測物質(zhì)留在樣品溶液中而達到凈化和富集的目的。填充料一般為C18或C8,樣品和填充料的比例通常為1:4。第一百一十頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日MAS流程示意圖將樣品及提取溶劑同時放入離心管中，震蕩或超聲提??；加入SPE填料吸附凈化樣品基質(zhì)干擾，離心后檢測目標物被留在了溶液里。取上清液進行后處理或直接檢測。

第一百一十一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日快速，簡單，提取和凈化一步完成避免了樣品乳化、濃縮造成的待測組分的損失經(jīng)濟，成本低Mas優(yōu)點第一百一十二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日MAS方法特點常規(guī)SPE是吸附再洗脫得到目標化合物，而MAS是只吸附雜質(zhì)MAS與一般吸附雜質(zhì)的樣品凈化法的主要區(qū)別在于使用多官能團吸附試劑，同時除去多種雜質(zhì)該方法的核心之一是對于蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、磷脂等生物干擾基質(zhì)具有較好選擇性吸附的分離材料。通過選擇合適的條件（溶劑組合、pH）可以將樣品中大部分的生物干擾基質(zhì)去除，而保證強水溶性被測物質(zhì)具有70%以上的回收率。第一百一十三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日6、樣品處理的基本方法及經(jīng)驗第一百一十四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日前處理方法的建立6.1概述目的：分離-檢測基本內(nèi)容：提取、凈化、濃縮、衍生化6.2樣品預處理采集制備貯存第一百一十五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日前處理方法的建立6.3提取方法1）樣品種類飲料、果汁、奶、蛋、動物組織（肉、肝、腎等）2）提取溶劑-相似相溶原則-一般采用乙腈、甲醇和丙酮等水溶性溶劑-混合溶劑，增加選擇性第一百一十六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日前處理方法的建立3）提取方法-組織搗碎法（homogenization)-振蕩法(shaking)-索氏提取法(Soxhletextraction)-超聲波輔助提?。⊿AE）-強化溶劑萃?。ˋSE）-微波輔助萃取（MAE）-消解法：酸消解、堿消解、酶消解-其他第一百一十七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日前處理方法的建立6.4凈化方法1）液液萃取LLE2）固相萃取SPE3）固相微萃?。⊿PME）4）制備色譜法（HPLC、TLC）5）凝膠滲透色譜法（GPC）6）基質(zhì)固相分散技術(shù)（MSPD）：獸藥殘留7）免疫親和柱（IAC）：毒素8）分子印跡技術(shù)（MIPs)：痕量成分9)其他技術(shù)第一百一十八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日前處理方法的建立6.5濃縮與富集-旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮-氮吹儀-濃縮器濃縮、平行蒸發(fā)儀-真空離心濃縮濃縮過程組分最容易損失第一百一十九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日前處理方法的建立6.6衍生化-反應速度快-容易重復-定量完全、轉(zhuǎn)化率穩(wěn)定-產(chǎn)物易純化-產(chǎn)物易于分離和檢測-HPLC衍生化方法：多用熒光檢測器-衍生化方式：柱前、柱后第一百二十頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日技術(shù)內(nèi)容說明提取用物理、化學或生物的手段破壞待測組分與樣品基質(zhì)組分之間的結(jié)合力，將待測組分從樣品中游離出來并進行有選擇的提取。這種結(jié)合力是分子間力或化學鍵。去除基質(zhì)，減少由基質(zhì)對待測組分的帶來的影響，如吸附、共沉淀等。純化將待測物和提取過程共萃取物（雜質(zhì)）有選擇地進行分離，同時滿足在分析實驗室可操作的條件下，能達到分析方法在質(zhì)量控制指標上的要求。雜質(zhì)的存在會影響定性、定量的結(jié)果。對設(shè)備也會產(chǎn)生影響。濃縮指減少樣品溶液中溶劑含量，使組分濃度提高。進行基質(zhì)溶劑更換。濃度在檢測器的響應范圍。分析設(shè)備要求。衍生由分析物的結(jié)構(gòu)特點，特征選擇性的衍生化。衍生改變分析物的結(jié)構(gòu)特點。滿足定性要求；或接顯色基團。滿足分離要求。第一百二十一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日分析應用對前處理技術(shù)的要求提高檢測靈敏度，可靠性（假陰性，假陽性）提高分析檢測的整體速度第一百二十二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日樣品前處理方法比較

LLE--化合物在不互溶的兩相中的溶解度的不同達到分離第一百二十三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

PPT

(蛋白沉淀法)—血樣中去除蛋白

第一百二十四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日SPE—保留目標物

分析物干擾物柱預處理樣品添加柱洗滌分析物洗脫第一百二十五頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日GPC---根據(jù)分子量大小的差異到達分離，去除油脂、

色素等大分子量的雜質(zhì)第一百二十六頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日SPE(固相萃取)機理第一百二十七頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

免疫親和柱的凈化過程優(yōu)點特異性強可濃縮樣品液缺點耗時只針對單一毒素價格昂貴第一百二十八頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日前處理技術(shù)比較小結(jié)SPE：較通用LLE：水油兩相PPT：蛋白質(zhì)較多的樣品，醫(yī)藥SPME：半揮發(fā)-揮發(fā)性樣品，多與GC聯(lián)用GPC：去除大分子雜質(zhì)（油脂，大分子色素）ASE：加速溶劑萃取第一百二十九頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日樣品前處理技術(shù)比較凈化方法優(yōu)點缺點LLE（液液萃取）無需特殊裝置1)操作繁瑣，費時2)耗費大量的有機溶劑，導致高成本和對環(huán)境的污染3)乳化現(xiàn)象，導致重現(xiàn)性差PPT（沉淀法）1）操作簡單2）可自動化適于高通量分析1)非特異性的沉淀反應可能使微量的分析物隨著基質(zhì)蛋白質(zhì)共同沉淀而損失。2)不能去除基質(zhì)中的鹽分，LC/MS分析時會導致離子干擾SPE（固相萃?。?)集樣品富集及凈化與一身，從而提高檢測靈敏度2)比液液萃取更快，方便和節(jié)省溶劑，可自動化3)批量處理重現(xiàn)性好成本較高第一百三十頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日SPE方法的優(yōu)點萃取過程簡單快速，易于多樣品平行操作易于自動化，提高分析效率樣品更干凈高樣品回收率和良好的重現(xiàn)性降低溶劑的消耗以有限的預算、儀器、人力來應付更多的樣品，更復雜的樣品基質(zhì)和更低的檢測限…第一百三十一頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日6.7樣品的采集、制備和儲存

（一）正確采樣的重要性：兩個原則第一，采集的樣品有代表性第二，采樣過程中要設(shè)法保持原有的理化指標，防止成分逸散或帶入雜質(zhì)（二）采樣步驟從大量的分析對象中抽取有代表性的一部分樣品作為分析材料（分析樣品），稱為樣品的采集。第一百三十二頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日（0.5kg）

需檢驗的批量食品原始樣品平均樣品試驗樣品復驗樣品保留樣品（0.5kg）（0.5kg）混合、處理縮分采樣（二）采樣步驟6.7樣品的采集、制備和儲存第一百三十三頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日

為獲得均勻的樣品，必須對樣品進行粉碎、混均、縮分，這項工作即為樣品制備。樣品的制備方法因產(chǎn)品的類型不同而異：

1.液體、漿體或懸浮液體一般將樣品搖均，充分攪拌。如：醬油、牛奶、飲料、蜂蜜等。常用工具為玻璃攪拌棒、電動攪拌器。

2.固體樣品用切細、粉碎、搗碎、研磨等方法將樣品制成均勻可檢狀態(tài)。水分含量少、硬度較大的固體樣品（如谷物）可用粉碎法；水分含量較高，質(zhì)地軟的樣品（如水果、蔬菜）可用勻漿法；韌性較強的樣品（如肉類）可用搗碎法。常用工具有粉碎機、組織搗碎機、絞肉機等。

3.罐頭水果罐頭在搗碎前須清除果核；肉禽罐頭應預先清除骨頭、魚類罐頭要將調(diào)味品（蔥、辣椒等）去除后再搗碎。常用的搗碎工具有高速組織搗碎機等。（三）樣品的制備一、樣品的采集、制備和儲存第一百三十四頁，共一百五十一頁，2022年，8月28日制備好的樣品如果需要保存，應放在密閉潔凈的容器內(nèi)，置于干燥、通風、陰暗處保存，如谷物類。易腐爛變質(zhì)的樣品應保存在0～5℃冰箱內(nèi)，如水果、蔬菜。禽肉類及魚類樣品須在-18℃冷凍保存，同時根據(jù)樣品自身特性來規(guī)定適宜的保存期。（四）樣品