細菌感染的實驗診療

第二章

細菌感染試驗診療細菌感染的實驗診療1/58感染診療有賴于從標本中檢出病原體或檢出病原體可溶性抗原,或病原體DNA病人血清中檢出病原體抗體本章主要討論檢出病原體問題細菌感染的實驗診療2/58第一節(jié)試驗診療目標與要求細菌感染的實驗診療3/58進行病原學(xué)診療進行藥敏試驗,指導(dǎo)合理用藥用作流行病學(xué)調(diào)查,追蹤傳染源研究病原生物與感染關(guān)系一.目標細菌感染的實驗診療4/58

鮑氏痢疾志賀菌13型暴發(fā)

時間：1992年9月發(fā)?。?6名死亡：10名地點：某嬰兒室傳染源：慢性攜帶者產(chǎn)婦傳輸方式：經(jīng)過污染操作臺接觸細菌感染的實驗診療5/58鼠傷寒暴發(fā)

時間：1991年11月地點：某嬰兒室發(fā)病：55名死亡：23名56件物品（被褥，尿布，奶瓶）中26件檢出鼠傷寒沙門菌細菌感染的實驗診療6/58二.診療試驗選擇有價值快速簡便特異性和敏感性高細菌感染的實驗診療7/58可用方法:查病原體:直接涂片分離,對純培養(yǎng)物進行判定查可溶性抗原:用已知抗體查DNA:分子生物學(xué)方法查抗體:用已知抗原IgMIgG:效價有4倍以上增高細菌感染的實驗診療8/58三.細菌判定流程

雙歧檢索:以某一試驗分表解:用各種試驗整體分析數(shù)字編碼:將各種試驗分別編碼,數(shù)字化后查表細菌感染的實驗診療9/58革蘭氏陰性桿菌葡萄糖發(fā)酵+-氧化酶+-弧菌腸桿菌非發(fā)酵菌細菌感染的實驗診療10/58ABCDE甲乙丙丁++--++++----++--+-++細菌感染的實驗診療11/58組別試驗代碼結(jié)果結(jié)果代碼總值1A4-01B2-0C1+1

2D4+45E2-0F1+1

15…細菌感染的實驗診療12/58微量生化反應(yīng)系統(tǒng)和自動化

各試驗孔含不一樣試驗脫水底物

加入純化被檢菌

孵育4-24h觀察結(jié)果人工讀取依據(jù)編碼資料判定菌種或電腦讀取細菌感染的實驗診療13/58第二節(jié)臨床標本采集與處理細菌感染的實驗診療14/58一.標本采集標準早期,用抗菌藥品前依據(jù)病原體存在部位采集對應(yīng)標本無菌技術(shù),防止正常菌群污染,預(yù)防病原體播散采取適當方法細菌感染的實驗診療15/58二.標本處理盡快接種到適當培養(yǎng)基上依據(jù)抵抗力選擇保留和運輸條件厭氧菌奈瑟菌病毒細菌感染的實驗診療16/58第三節(jié)細菌形態(tài)學(xué)檢驗細菌感染的實驗診療17/58一.不染色標本用懸滴法或壓片細菌是活,可觀察運動加入特異抗體可抑制其運動結(jié)合標本起源可作初步診療,如霍亂,梅毒用相差或暗視野顯微鏡效果更加好細菌感染的實驗診療18/58壓片懸滴法細菌感染的實驗診療19/58二.染色標本革蘭染色(Gramstain):紫色革蘭陽性;紅色革蘭陰性.注意細菌大小,形狀,排列以及著色均一性抗酸染色(acid-faststain):紅色抗酸陽性,藍色抗酸陰性熒光染色:更易觀察細菌感染的實驗診療20/58特殊染色可用于觀察莢膜,鞭毛等細菌特殊結(jié)構(gòu)細菌感染的實驗診療21/58第四節(jié)細菌分離培養(yǎng)細菌感染的實驗診療22/58一.細菌生長要求培養(yǎng)基:營養(yǎng)物質(zhì),pH7.4氣體:需氧菌,厭氧菌,兼性厭氧菌,微需氧菌溫度:普通37°C時間:普通18~24h細菌感染的實驗診療23/58二.培養(yǎng)基1.對培養(yǎng)基基本要求足夠營養(yǎng)物質(zhì)適當pH無菌澄清細菌感染的實驗診療24/582.培養(yǎng)基種類按培養(yǎng)基成份分:基礎(chǔ)培養(yǎng)基:滿足普通細菌要求營養(yǎng)培養(yǎng)基:滿足苛求細菌要求判別培養(yǎng)基:加有被利用物和指示劑選擇培養(yǎng)基:加有抑制劑,能抑制非目標菌生長特殊培養(yǎng)基:滿足特殊細菌要求細菌感染的實驗診療25/58按培養(yǎng)基物理性狀分:液體:增菌固體:加2%瓊脂,平板用于分離純種,斜面用于傳代或保留細菌半固體:加0.5%瓊脂,用于觀察動力,保留菌種細菌感染的實驗診療26/58三.主要接種方法分區(qū)劃線法:用于分離純種,屢次燒灼降低菌數(shù),以獲取單個菌落連續(xù)劃線:不要求單個菌落,用于保留或繁殖細菌涂布:使細菌長成菌苔,可觀察細菌被抑制情況或用于繁殖細菌傾注平板:少許細菌混于瓊脂中倒板,計數(shù),分離純種細菌感染的實驗診療27/58四.細菌生長表現(xiàn)固體基:菌落形成,注意其

大小,形狀表面,邊緣質(zhì)地,透明度溶血情況液體基:渾濁,菌膜,沉淀細菌感染的實驗診療28/58五.純種取得純種是細菌學(xué)工作基礎(chǔ)取得方法:劃線分離法(傾注平板法)取得大單個菌落斜面純培養(yǎng)物純培養(yǎng)物外觀表現(xiàn)應(yīng)是一致細菌感染的實驗診療29/58細菌感染的實驗診療30/58細菌感染的實驗診療31/58六.培養(yǎng)細菌目標確定有沒有細菌判定細菌藥敏試驗計數(shù)細菌利用細菌:制備菌苗,生產(chǎn)抗生素或基因工程產(chǎn)品細菌感染的實驗診療32/58第五節(jié)細菌代謝產(chǎn)物檢測細菌感染的實驗診療33/58一.細菌毒素檢測內(nèi)毒素:致熱作用:兔體溫鱟試驗外毒素:體內(nèi):毒素與抗毒素中和試驗體外:Elek平板法:沉淀反應(yīng)ELISA細菌感染的實驗診療34/58毒素和抗毒素中和試驗外毒素?外毒素?+已知抗體小白鼠小白鼠結(jié)果發(fā)病發(fā)病有毒性,但不是相應(yīng)發(fā)病不發(fā)病是對應(yīng)毒素不發(fā)病不發(fā)病無毒性細菌感染的實驗診療35/58抗毒素待測細菌沉淀線Elek試驗細菌感染的實驗診療36/58二.生化反應(yīng)欲檢測細菌生化反應(yīng),普通是在適當培養(yǎng)基中加入被測物和檢測其代謝產(chǎn)物試劑,即在判別培養(yǎng)基中進行培養(yǎng),或直接加試劑于培養(yǎng)物中,觀察呈色等現(xiàn)象判定結(jié)果

細菌感染的實驗診療37/58(一)碳水化合物代謝試驗糖(醇)發(fā)酵試驗:酸,氣體氧化-發(fā)酵(O/F)試驗:?-半乳糖苷酶(ONPG)試驗七葉苷水解試驗甲基紅試驗V-P試驗細菌感染的實驗診療38/58(二)蛋白質(zhì)和氨基酸代謝試驗

明膠液化試驗Indol試驗Ura試驗H2S試驗苯丙氨酸脫氨酶試驗氨基酸脫羧酶試驗細菌感染的實驗診療39/58(三)碳源氮源利用枸櫞酸鹽利用試驗丙二酸鹽利用試驗細菌感染的實驗診療40/58枸櫞酸鹽利用試驗細菌感染的實驗診療41/58(四)酶氧化酶試驗過氧化氫酶試驗硝酸鹽還原試驗卵磷脂酶試驗?zāi)堂冈囼濩AMP試驗?zāi)懼芫囼灱毦腥镜膶嶒炘\療42/58(五)抑菌試驗O/129試驗桿菌肽試驗Optochin試驗細菌感染的實驗診療43/58第六節(jié)感染血清學(xué)檢測已知抗體檢測細菌抗原用于判定細菌已知抗原檢測病人血清中抗體用于診療感染性疾病細菌感染的實驗診療44/58一.血清學(xué)判定了解微生物抗原結(jié)構(gòu)用已知抗體檢測細菌抗原組合特異性較高多在判定最終進行可用各種血清學(xué)方法,細菌多用凝集反應(yīng),病毒多用中和試驗細菌感染的實驗診療45/58二.血清學(xué)診療查抗體:用已知抗原IgM:感染指標IgG:效價有4倍以上增高或高于當?shù)厝巳核蕉嘤糜诓〕梯^長全身性感染細菌感染的實驗診療46/58第七節(jié)感染分子生物學(xué)檢測檢出病原體DNA證實病原體存在細菌感染的實驗診療47/58一.核酸檢測用途細菌分類臨床診療,快速判定耐藥性檢測毒素檢測流行病學(xué)調(diào)查細菌感染的實驗診療48/58二.核酸檢測方法

G+Cmol%PCR限制性內(nèi)切酶片段長度核酸雜交細菌感染的實驗診療49/58限制性內(nèi)切酶酶切分析

限制性內(nèi)切酶是能夠在一定部位切開DNA酶一樣內(nèi)切酶可將相同DNA切成一樣數(shù)目標，一樣大小分子量片段電泳后對所得圖譜進行分析可判斷DNA是否相同細菌感染的實驗診療50/581989年國外某醫(yī)院泌尿科3周內(nèi)從病人血，尿中分出8株不動桿菌，含有相同耐藥性，經(jīng)SmalI酶切后出現(xiàn)相同片段，但與環(huán)境中或其它科室分出不動桿菌不一樣，表明泌尿科病人是由同一克隆引發(fā)暴發(fā)細菌感染的實驗診療51/58某醫(yī)院ICU病房，從水池和病人標本中分出多株銅綠假單胞菌，將其染色體DNA用XBal酶切，發(fā)覺彼此之間沒有共同酶切片段圖譜，病人之間圖譜也不相同，說明這不是一次暴發(fā)細菌感染的實驗診療52/58第八節(jié)動物試驗細菌感染的實驗診療53/58一.動物試驗用途分離細菌,獲取純種檢測其致病性,觀察發(fā)病或死亡,可同時加抗體進行中和試驗或保護試驗制備抗體誘導(dǎo)變異建立感染模型檢測生物制品安全性

細菌感染的實驗診療54/58二.試驗動物選擇多用易感小動物,如小白鼠,豚鼠按需要選擇純系,突變系,雜種無菌動物(GF),悉生動物(GB),無特殊病原體動物(SPF),最低程度疾病動物(MDA),普通動物可選取各種路徑注射,如腹腔,靜脈,皮下,顱內(nèi)等細菌感染的實驗診療55/58可供細菌判定方法形態(tài):個體,菌落,液體基生長情況生長需要:氧,溫度,營養(yǎng)物生化反應(yīng):觀察其酶活性抗原性:用