基因毒性雜質(zhì)

基因毒性雜質(zhì)（GenotoxicImpurity)基因毒性雜質(zhì)第1頁(yè)歐盟公布藥品評(píng)定十大缺點(diǎn)中，Top4為基因毒性雜質(zhì)。要求對(duì)雜質(zhì)潛在基因毒性雜質(zhì)進(jìn)行詳細(xì)討論，并作為總體雜質(zhì)討論一部分。常見(jiàn)基因毒性物質(zhì)：苯并芘、黃曲霉素、亞硝胺化療藥品不良反應(yīng)是由化療藥品對(duì)正常細(xì)胞基因毒性所致，如順鉑、卡鉑、氟尿嘧啶等氨基糖甙類抗生素：大劑量、長(zhǎng)久使用會(huì)引發(fā)耳毒性；尤其敏感患者，僅使用一次或短期使用，就出現(xiàn)了聽(tīng)力受損。研究表明，這些患者一個(gè)基因上有一點(diǎn)（mtl555G）與他人不一樣，這使他們對(duì)氨基糖甙類藥品耳毒性易感性大大增加。基因毒性雜質(zhì)第2頁(yè)目錄基因毒性雜質(zhì)定義及風(fēng)險(xiǎn)可接收風(fēng)險(xiǎn)攝入量（TTC閾值）EMA對(duì)基因毒性雜質(zhì)指導(dǎo)要求判斷是否為基因毒性雜質(zhì)決議樹(shù)Q&A基因毒性雜質(zhì)第3頁(yè)參考法規(guī)EMA：年率先頒布《基因毒性雜質(zhì)程度指南》，于年1月1日證實(shí)實(shí)施。該指南為限制活性物質(zhì)中基因毒性雜質(zhì)提供了處理問(wèn)題框架和詳細(xì)做法ICH：年，Q3A(R2)step4vision“新原料藥中雜質(zhì)”FDA：年12月，Guidanceforindustry-GenotoxicandcarcinogenicimpuritiesinDrugsubstancesandproducts:Recommendedapproaches.介紹了歐盟和ICH控制方法。原料藥和制劑中基因毒性雜質(zhì)生成預(yù)防方法；上市申請(qǐng)和臨床研究申請(qǐng)可接收程度。基因毒性雜質(zhì)第4頁(yè)定義基因毒性雜質(zhì)：是指能直接或間接損傷細(xì)胞DNA，產(chǎn)生致突變和致癌作用物質(zhì)。慣用縮寫(xiě)

1、PGLs(potentiallygenotoxicimpurities有潛在基因毒性雜質(zhì))2、GTLs(genotoxicimpurities基因毒性雜質(zhì))風(fēng)險(xiǎn)：（體內(nèi)）基因毒性物質(zhì)在任何攝入量水平上對(duì)DNA都有潛在破壞性，這種破壞可能造成腫瘤產(chǎn)生。但不能說(shuō)“不存在顯著閥值，或是任何攝入水平都含有致癌風(fēng)險(xiǎn)”。新藥合成、原料純化、儲(chǔ)存運(yùn)輸（與包裝物接觸）等過(guò)程都可能產(chǎn)生基因毒性雜質(zhì)基因毒性雜質(zhì)第5頁(yè)可接收風(fēng)險(xiǎn)攝入量對(duì)于那些能夠與DNA進(jìn)行反應(yīng)化合物，因?yàn)樵谳^低劑量時(shí)機(jī)體本身保護(hù)機(jī)制能夠有效運(yùn)行，按照攝入量由高到低所造成影響進(jìn)行線性推斷是很困難。當(dāng)前，對(duì)于一個(gè)給定誘變劑，極難從試驗(yàn)方面證實(shí)它基因毒性存在一個(gè)閾值。尤其是對(duì)于一些化合物，它們可與非DNA靶點(diǎn)進(jìn)行反應(yīng)，或一些潛在突變劑，在與關(guān)鍵靶點(diǎn)結(jié)合之前就失去了毒性。因?yàn)槿狈χС只蚨拘蚤撝荡嬖谟辛ψC據(jù)，而使得我們極難界定一個(gè)安全服用量。基因毒性雜質(zhì)第6頁(yè)可接收風(fēng)險(xiǎn)攝入量是否能夠做個(gè)這么試驗(yàn)：劑量從低到高，對(duì)基因毒性雜質(zhì)影響性進(jìn)行線性推斷？引入一個(gè)新觀點(diǎn)：確定一個(gè)可接收其風(fēng)險(xiǎn)攝入量生物系統(tǒng)糾錯(cuò)功效使試驗(yàn)不具備可行性。基因毒性雜質(zhì)第7頁(yè)TTC可接收其風(fēng)險(xiǎn)攝入量普通被定義為ThresholdofToxicologicalConcern(TTC)。詳細(xì)含義為：1.5μg/天TTC值。相當(dāng)于人天天攝入1.5μg基因毒性雜質(zhì)，被認(rèn)為對(duì)于大多數(shù)藥品來(lái)說(shuō)是能夠接收風(fēng)險(xiǎn)（使人一生致癌風(fēng)險(xiǎn)小于100000分之一，現(xiàn)實(shí)生活中人一生得癌癥概率四分之一）。按照這個(gè)閾值，能夠依據(jù)預(yù)期每日攝入量計(jì)算出活性藥品中可接收雜質(zhì)水平。TTC是一個(gè)風(fēng)險(xiǎn)管理工具，它使用是概率方法。所以TTC不能被了解為絕對(duì)無(wú)風(fēng)險(xiǎn)保障?；蚨拘噪s質(zhì)第8頁(yè)TTC意思是：假如有一個(gè)基因毒性雜質(zhì)，而且我們對(duì)它毒性大小不了解，假如它每日攝入量低于TTC值，那么，該基因毒性雜質(zhì)致癌風(fēng)險(xiǎn)將不會(huì)高于100000分之一概率。一些特定情況，TTC值高于1.5μg/day也是能夠接收。比如藥品短期接觸，即治療一些申明預(yù)期在5年以下一些嚴(yán)重疾病，或者這種雜質(zhì)是一個(gè)已知物質(zhì)，人類在其它方式上對(duì)它攝入量會(huì)更高（比如在食品上）。這個(gè)需要依據(jù)實(shí)際情況再進(jìn)行推算?；蚨拘噪s質(zhì)第9頁(yè)EMA對(duì)基因毒性雜質(zhì)分類EMA對(duì)基因毒性雜質(zhì)指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)適合用于上市申請(qǐng)和臨床研究。一、有足夠試驗(yàn)數(shù)據(jù)閾值對(duì)于有足夠（試驗(yàn)性）數(shù)據(jù)來(lái)支持閾值界定基因毒性雜質(zhì)：可參考“Q3CNoteforguidanceonimpurities:ResidualSolvents”中2級(jí)溶劑要求，計(jì)算出了一個(gè)“允許日攝入量（PDE—permitteddailyexposure）”基因毒性雜質(zhì)第10頁(yè)基因毒性雜質(zhì)第11頁(yè)二、無(wú)足夠試驗(yàn)依據(jù)閾值沒(méi)有足夠（試驗(yàn)性）證據(jù)來(lái)支持閾值界定基因毒性雜質(zhì)可接收劑量評(píng)價(jià)應(yīng)該包含藥學(xué)和毒理學(xué)評(píng)價(jià)。普通來(lái)說(shuō)，假如不可能防止毒性，那么藥學(xué)評(píng)價(jià)辦法應(yīng)該以盡可能低控制水平為指導(dǎo)。基因毒性雜質(zhì)第12頁(yè)藥學(xué)研究應(yīng)依據(jù)現(xiàn)有處方和生產(chǎn)技術(shù)，提供生產(chǎn)方法合理性。申請(qǐng)人應(yīng)該指明包括到全部含有基因毒性或有致癌性化學(xué)物質(zhì)，如所用試劑、中間體、副產(chǎn)品等。實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)盡可能防止使用該類物質(zhì)。基因毒性雜質(zhì)第13頁(yè)假如在合成路線、起始物料方面沒(méi)有更加好選擇，則需要提供一個(gè)正當(dāng)理由。即物質(zhì)中能引發(fā)基因毒性和致癌性結(jié)構(gòu)部分在化學(xué)合成路線上是不可防止。加入基因毒性雜質(zhì)被認(rèn)為是不可防止，那么應(yīng)該采取技術(shù)伎倆盡可能降低基因毒性雜質(zhì)在產(chǎn)品中含量，使其符合安全需要或使其降低到一個(gè)合理水平。對(duì)于活性中間體、反應(yīng)物、以及其它化合物化學(xué)穩(wěn)定性都應(yīng)進(jìn)行評(píng)定。應(yīng)該有合理分析方法去檢測(cè)和量化這些雜質(zhì)殘留量。基因毒性雜質(zhì)第14頁(yè)毒理學(xué)研究為一個(gè)不存在閥值基因毒性致癌物定義一個(gè)安全攝入量水平（零風(fēng)險(xiǎn)觀點(diǎn)）是不可能，而且從活性藥品成份中完全除去基因毒性雜質(zhì)經(jīng)常是極難做到。這么就要求我們建立一個(gè)可接收風(fēng)險(xiǎn)水平，比如對(duì)一個(gè)低于可忽略風(fēng)險(xiǎn)每日攝入量進(jìn)行評(píng)價(jià)。不過(guò)這些方法都需要有足夠長(zhǎng)久致癌性研究數(shù)據(jù)。基因毒性雜質(zhì)第15頁(yè)TTC用于計(jì)算未做研究化學(xué)物質(zhì)接觸量，這些化學(xué)物質(zhì)不會(huì)有顯著致癌性或者其它毒性。TTC理論不能夠應(yīng)用于那些毒性數(shù)據(jù)（長(zhǎng)久研究）充分致癌物質(zhì)，也不能夠做高風(fēng)險(xiǎn)毒性物質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)?；蚨拘噪s質(zhì)第16頁(yè)用藥時(shí)間與毒性雜質(zhì)程度基因毒性雜質(zhì)第17頁(yè)含有多個(gè)基因毒性雜質(zhì)評(píng)定EMA：結(jié)構(gòu)不一樣，單個(gè)雜質(zhì)程度應(yīng)小于1.5ug/day.

結(jié)構(gòu)相同，總基因雜質(zhì)程度定為1.5ug/day.FDA（和EMA類似）：?jiǎn)蝹€(gè)雜質(zhì)造成癌癥風(fēng)險(xiǎn)機(jī)率應(yīng)該小于100000分之一；有相同作用機(jī)制結(jié)構(gòu)相同雜質(zhì)，其含量總和應(yīng)該參考TTC值進(jìn)行評(píng)定。基因毒性雜質(zhì)第18頁(yè)判斷是否為基因毒性雜質(zhì)經(jīng)過(guò)Carcinogenicpotencydatabase(CPDB)數(shù)據(jù)庫(kù)查詢，數(shù)據(jù)庫(kù)中現(xiàn)有1574種致癌物質(zhì)列表。鏈接/chemnameindex.html，還可查詢到關(guān)于基因毒性方面研究出版物?；蚨拘噪s質(zhì)第19頁(yè)基因毒性雜質(zhì)第20頁(yè)基因毒性雜質(zhì)第21頁(yè)判斷是否為基因毒性雜質(zhì)可經(jīng)過(guò)文件、計(jì)算機(jī)毒理學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)；常經(jīng)過(guò)MDL-QSAR,MC4PC,DerekforWindows軟件來(lái)評(píng)價(jià)是否含有structuralalert，F(xiàn)DA、EMEA等官方機(jī)構(gòu)也采取這類軟件用來(lái)判斷?；蚨拘噪s質(zhì)第22頁(yè)DerekforWindows數(shù)據(jù)庫(kù)：能夠預(yù)算某個(gè)化學(xué)藥品對(duì)人類（或其它哺乳動(dòng)物）是否含有毒性，在世界范圍內(nèi)已被許多制藥企業(yè)，化學(xué)企業(yè)和學(xué)術(shù)研究機(jī)構(gòu)所采取?？商峁┮韵?種信息。在沒(méi)有試驗(yàn)數(shù)據(jù)情況下，提供某個(gè)化學(xué)藥品潛在毒性信息；建立最值得關(guān)注潛在有毒物質(zhì)；提供降低藥品毒性化學(xué)修飾方法提供毒性預(yù)測(cè)依據(jù)

基因毒性雜質(zhì)第23頁(yè)基因毒性雜質(zhì)磺酸鹽風(fēng)險(xiǎn)評(píng)定EMEA/44714/臨床研究發(fā)覺(jué)甲磺酸酯DNA烷基化作用會(huì)造成誘變效應(yīng)，其中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯已經(jīng)有這方面報(bào)導(dǎo)，所以有理由懷疑其它低分子量磺酸（如對(duì)甲苯磺酸）烷基酯可能也存在著類似毒性影響。盡管無(wú)數(shù)據(jù)表明這些酯對(duì)人毒性影響，然后依然有上述基因毒性物質(zhì)以雜質(zhì)形式存在于含磺酸酯類藥品活性成份藥品中潛在風(fēng)險(xiǎn)。基因毒性雜質(zhì)第24頁(yè)甲磺酸烷基酯，如甲磺酸甲酯（MMS）和甲磺酸乙酯（EMS），是甲磺酸與甲醇，乙醇，或其它低級(jí)醇形成酯。尤其是在以甲磺酸鹽或甲磺酸酯形式存在藥品活性成份中或其合成過(guò)程中用到了甲磺酸藥品活性成份中，甲磺酸烷基酯會(huì)被視為潛在雜質(zhì)。在以羥乙基磺酸鹽，苯磺酸鹽和對(duì)甲苯磺酸鹽形式存在藥品活性成份中也會(huì)發(fā)覺(jué)類似磺酸烷基酯或芳基酯污染。需說(shuō)明出現(xiàn)這些污染風(fēng)險(xiǎn)?；蚨拘噪s質(zhì)第25頁(yè)

藥品活性成份生產(chǎn)是否包括到在甲磺酸（或羥乙基磺酸，苯磺酸，對(duì)甲苯磺酸）或?qū)?yīng)酰氯存在情況下，使用了低級(jí)脂肪酯，如甲醇，乙醇，正丙醇或異丙醇情況？假如是這種情況話，甲磺酸烷基酯或類似苯磺酯烷基酯和對(duì)甲苯磺酸烷基酯形成可能性是否已被降至最低？是否存在有效精制步驟？

設(shè)備（尤其是接觸到磺酸試劑設(shè)備）清洗程序是否包括到低級(jí)脂肪醇使用？

是否有適宜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和已驗(yàn)證分析方法能夠證實(shí)藥品活性成份中磺酸烷酯或磺酸芳基酯雜質(zhì)處于TTC以下？基因毒性雜質(zhì)第26頁(yè)是否檢驗(yàn)了起始物料，如甲磺酸鹽（苯磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽，羥乙基磺酸），中烷基磺酸酯或芳基磺酸酯雜質(zhì)（如甲磺酸中EMS和MMS）及對(duì)應(yīng)酰氯？是否有這些雜質(zhì)適宜標(biāo)準(zhǔn)和驗(yàn)證過(guò)方法？當(dāng)被磺酸酯或相關(guān)物質(zhì)所污染了磺酸作為起始物料用于藥品活性成份時(shí)，是否能確保藥品活性成份中潛在基因毒性雜質(zhì)不超出其TTC值？應(yīng)該要考慮各種烷基或芳基取代磺酸酯雜質(zhì)累加風(fēng)險(xiǎn)。基因毒性雜質(zhì)第27頁(yè)

如在藥品活性成份生產(chǎn)最終一步合成步驟用到了磺酸衍生物，應(yīng)將其納入風(fēng)險(xiǎn)分析。

是否對(duì)回收溶劑中磺酸酯類雜質(zhì)富集和殘留進(jìn)行了控制？

是否能排除以甲磺酸鹽，羥乙基磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽或苯磺酸鹽形式存在藥品活性成份，或其相關(guān)制劑，在儲(chǔ)存過(guò)程中形成烷基或芳基磺酸酯？

是否能排除以甲磺酸鹽，羥乙基磺酸鹽，對(duì)甲苯磺酸鹽或苯磺酸鹽形式存在藥品活性成份在制成最終制劑過(guò)程中形成烷基或芳基磺酸酯，如在制粒過(guò)程中使用了醇？是否有足夠靈敏方法能夠檢測(cè)到制劑中（處于TTC水平）這些雜質(zhì)？基因毒性雜質(zhì)第28頁(yè)基因毒性雜質(zhì)鹵代烴風(fēng)險(xiǎn)評(píng)定有數(shù)據(jù)表明氯乙烷、氯甲烷為基因毒性雜質(zhì)，所以有理由懷疑其它低分子鹵代烴類也有類似作用。在生產(chǎn)中應(yīng)該對(duì)其進(jìn)行對(duì)應(yīng)控制?；蚨拘噪s質(zhì)第29頁(yè)在氨基物鹽酸鹽使用醇類溶劑精制時(shí)候，基本都會(huì)產(chǎn)生鹵代烴。產(chǎn)生條件和溫度、水分、濃度、時(shí)間等相關(guān)系。對(duì)于控制低級(jí)鹵代烴方法能夠參考控制甲磺酸酯相關(guān)提議?；蚨拘噪s質(zhì)第30頁(yè)判斷是否為基因毒性雜質(zhì)高基因毒性致癌物：N-nitroso(亞硝基)azoxy(氧化偶氮基)aflatoxin-likecompound(黃曲霉素類)它們不能用TTC值方法來(lái)進(jìn)行評(píng)價(jià)。對(duì)這些種類物質(zhì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)需要特殊compound-specific毒性數(shù)據(jù)。可能在低于TTC值會(huì)有很強(qiáng)毒性。基因毒性雜質(zhì)第31頁(yè)序號(hào)基因毒性雜質(zhì)名稱雜質(zhì)程度產(chǎn)品名稱1保護(hù)基溴化物15ppm氯沙坦鉀2鄰氨基甲苯7.5ppm托拉塞米3間氨基甲苯7.5ppm托拉塞米4對(duì)氨基甲苯7.5ppm托拉塞米5鄰硝基甲苯7.5ppm托拉塞米6疊氮酸10ppm坎地沙坦酯7疊氮酸10ppm纈沙坦8溴代異丙烷15ppm氯吡格雷氫溴酸鹽9聯(lián)苯溴化物3.4ppm纈沙坦10聯(lián)苯溴化物四氮唑4ppm纈沙坦115-氰基苯酞25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽125-氨基苯酞25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽13硝基化合物25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽14氨基化合物25ppm西酞普蘭氫溴酸鹽15硫脲30ppm鹽酸吡格列酮16對(duì)氟硝基苯30ppm鹽酸吡格列酮17硝基吡格30ppm鹽酸吡格列酮基因毒性雜質(zhì)第32頁(yè)18酞嗪二酮0.04%RP-氯沙坦鉀19聯(lián)苯溴化物10ppmRP-氯沙坦鉀20二甲海因0.05%RP-氯沙坦鉀21保護(hù)基二溴物15ppmRP-氯沙坦鉀22氯沙坦鉀二氯物15ppmRP-氯沙坦鉀23二溴二甲海因15ppm氯沙坦鉀保護(hù)基溴化物24聯(lián)苯溴化物10ppm氯沙坦鉀25聯(lián)苯溴化物四氮唑12ppm氯沙坦鉀26游離肼10ppmRP-氯沙坦鉀27疊氮酸15ppm氯沙坦鉀28四丁基溴化銨25ppm鹽酸帕羅西汀29疊氮酸10ppm厄貝沙坦30對(duì)甲苯磺酸異丙酯8ppm氯沙坦鉀31溴離子229ppm艾他培南32對(duì)甲苯磺酸乙酯25ppm西酞普蘭33氟苯15ppm西酞普蘭34氯丙胺鹽酸鹽120ppm西酞普蘭35對(duì)氟溴苯50ppm西酞普蘭36甲磺酸乙酯75ppmS-西酞普蘭基因毒性雜質(zhì)第33頁(yè)38N-甲基吡咯烷酮53ppm厄貝沙坦39N，N-二甲基苯胺2ppm奎硫平40對(duì)甲苯磺酸乙酯37.5ppm奎那普利41對(duì)甲苯磺酸乙酯150ppm雷米普利42對(duì)甲苯磺酸乙酯37.5ppm依那普利43異亞丙基丙酮100ppm羅匹尼羅44間氯苯胺15ppm氫氯噻嗪45甲磺酸甲酯2ppm依普洛沙坦甲磺酸鹽46甲磺酸乙酯2ppm依普洛沙坦甲磺酸鹽473-硝基-2-叔丁氧甲酰氨基苯甲酸乙酯47ppm坎地沙坦酯482-氰基-4-溴甲基聯(lián)苯47ppm坎地沙坦酯492-[[(2-氰基聯(lián)苯基)-4-基]甲基]氧基-3-硝基苯甲酸乙酯47ppm坎地沙坦酯503-硝基鄰苯二甲酸47ppm坎地沙坦酯51鄰苯二胺鹽酸鹽5ppm替米沙坦52鄰氨硝基苯5ppm替米沙坦53鄰氟苯胺5ppm替米沙坦54氯沙坦鉀二氯代物15ppmRP-氯沙坦鉀55保護(hù)基溴化物15ppmRP-氯沙坦鉀基因毒性雜質(zhì)第34頁(yè)致癌警示結(jié)構(gòu)基因毒性雜質(zhì)第35頁(yè)經(jīng)過(guò)日服劑量和可控制雜質(zhì)濃度來(lái)計(jì)算是否超出TTC值基因毒性雜質(zhì)第36頁(yè)基因毒性雜質(zhì)第37頁(yè)基因毒性雜質(zhì)第38頁(yè)Q&A假