實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告圖文

1/1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告圖文實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)課程

實(shí)驗(yàn)報(bào)告

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容:

1.小鼠的基本實(shí)驗(yàn)操作

2.小鼠皮膚移植試驗(yàn)、睪丸(或卵巢摘除術(shù)

3.豚鼠和兔的一般操作技術(shù)

4.大鼠實(shí)驗(yàn)的基本操作

5.大鼠性周期觀察和大鼠急性肺水腫模型建立

6.小鼠無(wú)菌取胎術(shù)

7.Beagle犬的一般操作和沙鼠、金黃地鼠、裸小鼠的特性

實(shí)驗(yàn)一小鼠的基本實(shí)驗(yàn)操作

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?通過(guò)實(shí)際操作,掌握小鼠的一般操作方法,包括小鼠的抓取和固定、性別鑒定、編號(hào)、去毛、給藥、采血、麻醉、處死,尤其是染色法編號(hào)、灌胃、眼球摘除法采血、腹腔注射、脊椎脫臼法處死。

二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:昆明小鼠4只(2雌2雄

三、實(shí)驗(yàn)步驟

1、抓取和固定

2、性別鑒定

3、編號(hào)(染色法

4、去毛(脫毛劑法

5、給藥:消化道、腹腔注射、尾靜脈注射

6、采血:眼眶后靜脈叢、尾靜脈、眼球摘除法、斷頭法

7、麻醉:氯胺酮腹腔麻醉

8、處死:脊椎脫臼法、過(guò)量麻醉

9、解剖:

9.1生殖系統(tǒng):

9.1.1雄性:睪丸、附睪、輸精管、鼠蹊腺(在膀胱下方,膠質(zhì)狀,透明

9.1.2雌性:雙角子宮、卵巢

9.2腎上腺、胰腺、膽囊、甲狀腺

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、抓取和固定:

抓取:抓小鼠的尾根部

固定:抓住小鼠的尾根部,讓小鼠在粗糙平面上爬行,后拉尾跟部,右手的拇指和食指抓住小鼠兩耳及其間的頸部皮膚,小指和無(wú)名指將尾巴固定在手掌面。

2、性別鑒定:

觀察肛門(mén)與生殖器間的距離和二者之間的毛發(fā)。雄性:距離長(zhǎng),毛發(fā)密(和其

他部位一樣;雌性:距離短,毛發(fā)稀疏。

3、編號(hào):

3.1染色法:

3.1.1用苦味酸(黃色在小鼠背面染色

3.1.2逆毛發(fā)生長(zhǎng)方向染色,自毛根開(kāi)始

3.1.3可編1-10號(hào)(10號(hào)為不編號(hào)

3.2去毛:脫毛劑:8%Na2S,自毛發(fā)根部涂抹

3.3給藥:

3.3.1灌胃法:左手抓取小鼠固定后,右手持特制灌胃針,沿一側(cè)口角進(jìn)針,緊貼咽后壁,頭后仰以便伸直消化道,進(jìn)針2/3后灌生理鹽水0.5ml

3.3.2注射給藥:

3.3.2.1腹腔注射:

3.3.2.1.1從下腹部的兩側(cè)進(jìn)針

3.3.2.1.2進(jìn)針時(shí)針與腹部成45°。進(jìn)針后稍微晃動(dòng)針,如無(wú)粘滯感則可注射藥物

3.3.2.2尾靜脈注射:一人固定小鼠,另一人用左手中指和拇指將尾拉直,食

指托住尾部,消毒后右手持帶4號(hào)針頭的注射器在圖示A(背面,實(shí)為動(dòng)脈

位置進(jìn)針注射0.5ml生理鹽水。注射完畢拔出針頭,用無(wú)菌棉球壓迫止血。尾動(dòng)脈細(xì)小,且貼近皮膚,未注射成功。

小鼠尾靜脈切面圖

3.4采血

3.4.1:從眼角內(nèi)側(cè)0.5cm處

進(jìn)針。(右圖

3.4.2眼球摘除法:左手抓取

用固定小鼠,右手持彎頭鑷在

眼球根部將眼球摘除,頭朝下,

眼眶內(nèi)血迅速流出。

3.5麻醉:

0.5%氯胺酮腹腔麻醉:本小鼠重25g,按100mg/kg的藥量給藥,8分鐘麻醉成功

3.6處死:

3.6.1脊椎脫臼法:按住頭部,將尾根部向后上方以短促的力量拉即可致死3.6.2過(guò)量麻醉:追加0.5%氯胺酮過(guò)量(5ml腹腔麻醉

3.7解剖:

3.7.1生殖系統(tǒng):

3.7.1.1雄性:尋

找到睪丸、附睪、

輸精管、鼠蹊腺

3.7.1.2雌性:雙

角子宮、卵巢

3.7.2腎上腺:米粒大

小

3.7.3胰腺:位于胃下方,類(lèi)似于脂肪組織,渾濁狀

3.7.4膽囊:芝麻大小,淺綠色,半透明

3.7.5甲狀腺:緊貼環(huán)狀軟骨

五、實(shí)驗(yàn)討論

1、小鼠抓取的感受:

小鼠性情較溫順,一般不會(huì)咬人,比較容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其它粗糙表面上,在小鼠向前掙扎爬行時(shí),用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚,將小鼠置于左手掌心、無(wú)名指和小指夾其背部皮膚和尾部,即可將小鼠完全固定。在一些特殊的實(shí)驗(yàn)中,如進(jìn)行尾靜脈注射時(shí),可使用特殊的固定裝置進(jìn)行固定,如尾靜脈注射架或粗的玻璃試管。如要進(jìn)行手術(shù)或心臟采血應(yīng)先行麻醉再操作,如進(jìn)行解剖實(shí)驗(yàn)則必須先行無(wú)痛處死后再進(jìn)行。

2、小鼠尾靜脈注射感受:

首先,注射前尾巴用稍熱的水浸泡幾分鐘,有利于注射;其次,先遠(yuǎn)后盡,不要一開(kāi)始就從尾根部,那樣失敗了不好辦;再次,進(jìn)血管后注意保持穩(wěn)定,針尖很容易刺穿血管的。

尾靜脈就在尾巴的正左右兩邊,先用酒精用力擦,可以去掉部分角質(zhì),然后按住近心端讓充血,就很容易看到了。進(jìn)針大概1~2厘米是最合適的。

尾靜脈注射時(shí),可用45~50度的溫水浸潤(rùn)半分鐘或用酒精擦拭,可使血管擴(kuò)張,同時(shí)也可軟化表皮角質(zhì)。以左手拇指和食指夾住鼠尾,使靜脈充盈,中指幫助無(wú)名指和小指捏住鼠尾末梢,右手持注射器(連5號(hào)細(xì)針頭,針頭與靜脈夾角一般小于30度,從距尾尖2-3厘米處進(jìn)針,此處皮薄易進(jìn)入,先抽回血,見(jiàn)到血后再緩慢注入少量藥液,如無(wú)阻力,表示針頭已進(jìn)入靜脈,可繼續(xù)注入。一般推注速度為0.05-0.10ml/秒,一次注入量為0.05-

0.25ml/10g體重。如反復(fù)注入,應(yīng)盡可能從尾末端開(kāi)始,以后向尾根部方向移動(dòng)注射。

實(shí)驗(yàn)二小鼠皮膚移植試驗(yàn)、睪丸(或卵巢摘除術(shù)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

1.掌握近交系小鼠常用的皮膚移植試驗(yàn)(尾~背植皮法,尾~尾植皮法。

2.掌握小鼠卵巢摘除術(shù)和大鼠睪丸摘除術(shù)

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1、近交系小鼠常用的皮膚移植試驗(yàn)

1.1尾~背植皮法

1.2尾~尾植皮法

2、小鼠卵巢摘除術(shù)

2.1固定體位、麻醉

2.2卵巢摘除

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、近交系小鼠常用的皮膚移植試驗(yàn)

1.1尾~背植皮法:

1.1.1將近交系小鼠(受體固定后(已

麻醉,背部剪毛(約1.5cm×1.5cm大小,75%酒精常規(guī)消毒。用眼科剪在此部位剪開(kāi)一個(gè)0.3cm×0.3cm大小的方形洞備用。

1.1.2將近交系小鼠(供體固定后(已

麻醉,75%酒精常規(guī)消毒鼠尾。用眼科剪

沿尾靜脈剪開(kāi)一條縫,用止血鉗將皮膚剝

下,剪成0.5cm×0.5cm大小,刮掉皮片

上的結(jié)締組織。

1.1.3將供體皮片(0.5cm×0.5cm大小覆蓋在受體背部的方形洞(0.3cm×0.3cm大小內(nèi),鋪平,用棉球吸去滲出的血液,使植皮緊貼受體的創(chuàng)面,并與宿主的

邊緣密切吻合。

1.1.4無(wú)菌紗布覆蓋植皮區(qū),膠布包扎(此步驟本實(shí)驗(yàn)中省略。

1.1.51~3周后觀察結(jié)果

1.2尾~尾植皮法(本實(shí)驗(yàn)中為自體尾~尾移植:

1.2.1將近交系小鼠固定后(已麻醉,75%酒精常規(guī)消毒尾部皮膚。

1.2.2固定鼠尾的根部,用4號(hào)手術(shù)刀在鼠尾背部切開(kāi)一0.5cm×0.5cm大小的皮片,盡量不損傷局部血管,用止血鉗將皮膚剝下。

1.2.3將皮片旋轉(zhuǎn)180°,鑲嵌在創(chuàng)面上,棉球吸去局部滲出的血液和組織液,使

其盡可能緊貼,可以不包扎。

1.2.41~3周后觀察結(jié)果(100天

2、小鼠卵巢摘除術(shù)

2.1固定體位、麻醉:

選雌性小鼠,取左側(cè)臥位,以左腹外側(cè)區(qū)(左肋弓下緣為手術(shù)區(qū),局部剪毛,75%酒精消毒兩遍后,用0.5%氯胺酮以100mg/kg的劑量(本實(shí)驗(yàn):0.5ml進(jìn)行腹腔麻醉,5分鐘后小鼠靜臥于手術(shù)臺(tái)上,呼吸深大而有節(jié)律,頻率略快,四肢肌肉松弛,麻醉成功。

2.2卵巢摘除:

用手術(shù)刀在左肋緣下,取腹正中線平行方向切開(kāi)皮膚1cm,暴露腹腔內(nèi)容物。撥開(kāi)腸管,找到右腎。在右腎下方找到右側(cè)卵巢和右側(cè)子宮角。游離右側(cè)卵巢并摘除。局部消毒,縫合腹膜、腹壁肌肉和皮膚。

按上述方法摘除左側(cè)卵巢(另一位同學(xué)操作。

四、實(shí)驗(yàn)討論

1、近交系小鼠常用的皮膚移植試驗(yàn)

1.1皮膚移植實(shí)驗(yàn)是用于鑒定近交系動(dòng)物組織相容性基因是否一致的簡(jiǎn)單而可靠的方

法。

1.2尾~背植皮法:將小鼠尾部皮膚移植到同品系的異體小鼠的背部,通過(guò)觀察移植皮

片和背部其他區(qū)域的毛發(fā)稀疏和皮膚光澤異同來(lái)鑒定二者的組織相容性。如果組織相容性好,植皮色澤與周?chē)恢?沒(méi)有充血或炎癥,移植皮片毛少而光澤。若組織相容性基因不純合,尾皮在術(shù)后1~3周內(nèi)被排斥,,植皮脫落,背部留下一塊傷痕。另外,供體皮片應(yīng)略大于受體創(chuàng)面以充分吻合,以免因皮片邊緣缺血壞死而導(dǎo)致愈合后創(chuàng)面周邊皮膚不連續(xù)。

1.3自體尾~尾植皮法:可以鑒定植皮的脫落是否是手術(shù)失敗而造成。移植時(shí)應(yīng)將皮片

旋轉(zhuǎn)180°,以利于術(shù)后通過(guò)毛發(fā)生長(zhǎng)的方向觀察植皮是否存活。

2、小鼠卵巢摘除術(shù)、大鼠睪丸摘除術(shù)

2.1小鼠卵巢摘除術(shù):進(jìn)入腹腔后,可以先找到腎臟。然后在腎臟下方查找卵巢并摘除。

2.2行卵巢或睪丸摘除術(shù)時(shí)應(yīng)將兩側(cè)的卵巢或睪丸均摘除。

實(shí)驗(yàn)三豚鼠和兔的一般操作技術(shù)

1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過(guò)實(shí)際操作,掌握豚鼠和兔的一般操作方法和尸體解剖及病理取材方法,包括豚鼠和兔的抓取和固定、編號(hào)、性別鑒定、灌胃、給藥途徑、麻醉、采血和處死等方法。

2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:新西蘭兔,豚鼠(各1只

3.實(shí)驗(yàn)步驟

3.1豚鼠的抓取和固定

抓取豚鼠應(yīng)先用手掌抓住背部,將手張開(kāi),用拇指和食指握住頸部,再拿起來(lái)。

3.2豚鼠的性別鑒定

將豚鼠抓取后,觀察肛門(mén)與生殖器之間的距離,距離近者為雌性,距離遠(yuǎn)者為雄性。

3.3豚鼠的給藥

腹腔注射:自下腹部?jī)蓚?cè)進(jìn)針,可避免刺傷肝、脾或膀胱。

3.4豚鼠的采血

心臟采血法:由助手抓取豚鼠,左手固定頭部和兩前肢,右手固定兩后肢和尾部,

使胸部突出。操用酒精消毒皮膚,在左側(cè)第3~4肋間用左手食指觸摸心臟搏動(dòng)。

右手持連有4~5號(hào)針頭的注射器,選擇心臟搏動(dòng)最強(qiáng)處穿刺。當(dāng)針頭刺入心臟內(nèi)時(shí),血液回流進(jìn)注射器,即可進(jìn)行采血。

3.5豚鼠的解剖

觀察器官:脾臟、小腸和大腸、肝臟、膽囊、胃、十二指腸和胰腺、腎上腺、腎臟、膀胱、睪丸、附睪或子宮、卵巢、肝臟、心臟、甲狀腺、腦、垂體。

3.6兔的抓取和固定

右手抓住頸部的被毛與皮膚,提起兔,然后用左手托住它的臀部。

3.7兔的性別鑒定

左手抓去兔子的背部皮膚,右手拇指和食指把生殖器附近的皮膚扒開(kāi),雄兔可見(jiàn)有

一圓孔,里面露出陰莖;雌兔此處為一條朝向尾巴的長(zhǎng)縫,呈橢圓形間歇,下端有陰道開(kāi)口處。雌兔有8~12個(gè)乳頭。

3.8兔的給藥

3.8.1經(jīng)口灌胃法:灌胃時(shí)用一木制張口器橫放于上下腭之間,用繩固定。這時(shí)

可用左手抓住動(dòng)物的嘴,右手將一適當(dāng)粗細(xì)的導(dǎo)尿管由張口器中央小孔插

入,進(jìn)入食管和胃。將裝有藥液的注射器接上導(dǎo)尿管,即可慢慢灌入胃內(nèi)。

3.8.2注射給藥:耳緣靜脈注射法:將兔固定好。把去耳緣部被毛,用二甲苯擦

拭耳緣,促使靜脈充盈。用左手拇指和食指壓住耳根部,右手持連有4號(hào)

針頭的注射器,順血管平行方向刺入靜脈,進(jìn)針約1cm,如有血液回流,

即可進(jìn)行注射。注射完畢,拔出針頭,用棉球壓迫止血。

3.9兔的采血:耳緣靜脈采血法:采血方法同兔耳緣靜脈注射法。

3.10兔的處死:

空氣栓塞法:從兔的靜脈內(nèi)注入一定量的空氣,使之發(fā)生空氣栓塞。

3.11兔的解剖:觀察器官:脾臟、小腸和大腸、肝臟、膽囊、胃、十二指腸和胰

腺、腎上腺、腎臟、膀胱、睪丸、附睪或子宮、卵巢、肝臟、心臟、甲狀腺、腦、

垂體。

4.實(shí)驗(yàn)討論

4.1豚鼠生性膽小,不咬人,抓時(shí)不能太粗野,更不能用力抓腰腹,否則容易造成肝破

裂而引起死亡。

4.2家兔比較馴服,不咬人,但爪尖利,不正確的抓取容易被其抓傷。抓取時(shí)不要抓其

兩耳,也不要托拉四肢或提握腰部。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行固定,如需耳靜脈采血、注

射時(shí),可用兔盒固定;如要測(cè)量血壓、呼吸等實(shí)驗(yàn)和手術(shù)時(shí),可將兔固定在兔手術(shù)

固定臺(tái)上。

4.3室溫較高時(shí),雄性豚鼠的睪丸會(huì)從腹腔降到陰囊內(nèi),此時(shí)易于區(qū)別。

4.4兔耳緣靜脈采血法,每次采血量為1.0~

5.0mL。由于兔的體型較大,心臟采血較豚

鼠容易,一次采取全血量的1/6~1/5,一周后可重復(fù)采血。如采血致死,可采

50~100mL。

4.5使用空氣栓塞法,兔需要20~40mL空氣。本法方法簡(jiǎn)單、迅速,但由于動(dòng)物死于急

性循環(huán)衰竭,各臟器凝血十分明顯。

4.6解剖時(shí)可發(fā)現(xiàn),豚鼠的腸道長(zhǎng)度為體長(zhǎng)的10倍,盲腸特別發(fā)達(dá),占腹腔容積的1/3。

兔的盲腸比例亦大,回腸和盲腸相接處膨大形成一個(gè)厚壁的圓囊,稱(chēng)為圓小囊,實(shí)

質(zhì)為淋巴球囊,為兔所特有。雌兔有2個(gè)完全分離的子宮。兔頸部有減壓神經(jīng)獨(dú)力

分支。

左圖為豚鼠翻開(kāi)腸道后暴露腹膜后器官,可見(jiàn)雙條形的子宮。

右圖為兔圓小囊結(jié)構(gòu),位于回結(jié)腸交界處。

5.實(shí)驗(yàn)感受:

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基本操作是科研操作的基本技術(shù),熟練掌握各種動(dòng)物手術(shù)對(duì)于完成科研任務(wù)有重要的作用。

實(shí)驗(yàn)四大鼠實(shí)驗(yàn)的基本操作

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

通過(guò)實(shí)際操作,掌握大鼠的一般操作方法,包括大鼠的抓取和固定、性別鑒定、編號(hào)、去毛、給藥、采血、麻醉、處死。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1、抓取和固定

2、性別鑒定

3、編號(hào)(染色法

4、去毛(剪毛

5、給藥:消化道、腹腔注射、尾靜脈注射

6、采血:眼眶后靜脈叢、尾靜脈、眼球摘除法、斷頭法

7、麻醉:氯胺酮腹腔麻醉

8、處死:脊椎脫臼法、過(guò)量麻醉

9、解剖:

9.1生殖系統(tǒng):

9.1.1雄性:睪丸、附睪、輸精管、鼠蹊腺(在膀胱下方,膠質(zhì)狀,透明

9.1.2雌性:雙角子宮、卵巢

9.2腎上腺、胰腺、膽囊、甲狀腺

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、抓取和固定:左手抓住大鼠的尾根部,右手的食指和無(wú)名指卡住大鼠頭部?jī)蓚?cè),右手的拇指和食指同時(shí)捏住大鼠的左上肢。或一手一把抓住頭部?jī)蓚?cè)及雙上肢根部

2、性別鑒定(同小鼠:觀察肛門(mén)與生殖器間的距離和二者之間的毛發(fā):

2.1雄性:距離長(zhǎng),毛發(fā)密(和其他部位一樣

2.2雌性:距離短,毛發(fā)稀疏

3、編號(hào):

3.1染色法(最常用:

3.1.1用苦味酸(黃色在大鼠背面染色

3.1.2逆毛發(fā)生長(zhǎng)方向染色,自毛根開(kāi)始

3.1.3因?yàn)榇笫篌w形大,一般一籠內(nèi)養(yǎng)1~5只,1~5號(hào)編號(hào)同小鼠(實(shí)驗(yàn)一所示,

3.2同時(shí)結(jié)合籠子的編號(hào)加以區(qū)別

4、去毛:

4.1剃毛:可用電動(dòng)剃須刀剔除大鼠毛發(fā)

4.2剪毛:剪毛之前先用酒精濕潤(rùn)

5、給藥:

采用灌胃法:左手抓取小鼠固定后,雙下肢及尾部另請(qǐng)一人協(xié)助。右手持特制灌胃針,沿一側(cè)口角進(jìn)針,緊貼咽后壁,頭后仰以便伸直消化道,順利進(jìn)針后灌生理鹽水0.5ml

6、注射:

6.1腹腔注射:

6.1.1妥善固定大鼠后,從下腹部的兩側(cè)進(jìn)針

6.1.2進(jìn)針時(shí)針與腹部成45°,進(jìn)針后稍微晃動(dòng)針并回抽,如無(wú)粘滯感且沒(méi)有回血

則可注射藥物

6.2肌肉注射:大鼠下肢肌肉發(fā)達(dá),可在大腿外側(cè)進(jìn)行肌肉注射

6.3尾靜脈注射:一人固定大鼠,另一人用左手中指和拇指將尾拉直,食指托住尾部,

消毒后右手持帶4號(hào)針頭的注射器在圖示A(背面,實(shí)為動(dòng)脈位置進(jìn)針注射0.5ml生理鹽水。注射完畢拔出針頭,用無(wú)菌棉球壓迫止血。尾動(dòng)脈細(xì)小,且貼近皮膚,注射難度較大。

大鼠尾靜脈切面圖

7、采血:

7.1眼眶后靜脈叢:從眼角外下方或前下方進(jìn)針,然后立即拔針,用自制毛細(xì)管取血。

7.2眼球摘除法:未嘗試

7.3尾靜脈采血:按摩大鼠尾部使靜脈充盈,用注射針頭刺破血管后,擠壓尾部取血,

血量較少,僅采集到一滴。

8、麻醉:

0.5%氯胺酮腹腔麻醉:本雌性大鼠重350g,按100mg/kg的藥量給藥,10分鐘麻醉成功9、處死:

9.1脊椎脫臼法:按住頭部,將尾根部向后上方以短促的較大的力量拉即可致死

9.2過(guò)量麻醉:追加0.5%氯胺酮過(guò)量(2ml腹腔麻醉

10、解剖:

10.1顱部:

10.1.1視交叉:將大鼠過(guò)量麻醉致死后,剪開(kāi)顱頂部皮膚,暴露顱骨,用鑷子咬

除顱頂部骨,充分暴露大腦半球。用鑷子從額部將腦組織翻至枕后,可見(jiàn)位于顱底

的視交叉、視神經(jīng)和視束(白色纖維

10.1.2垂體:夾斷視神經(jīng),充分暴露顱底,可見(jiàn)位于垂體窩中的垂體,色白,米

粒大小。

10.2頸部:

甲狀腺:緊貼環(huán)狀軟骨,較小鼠明顯。

10.3腹部:

10.3.1腎上腺:米粒大小

10.3.2胰腺:位于胃下方,類(lèi)似于脂肪組織,渾濁狀

10.3.3膽囊:缺如

10.3.4睪丸:大鼠睪丸體積較大

10.3.5子宮:子宮為雙角型,雙側(cè)卵巢被大量脂肪組織所包裹

11、稱(chēng)重:

四、實(shí)驗(yàn)討論

1、抓取和固定:

(1大鼠牙齒和爪子銳利,個(gè)頭大,抓取時(shí)要小心,不要被其抓傷或咬傷。(2初學(xué)者為確保安全,可佩戴棉紗手套。(3提尾部時(shí)應(yīng)靠近尾根部提取,以防大鼠身體搖晃,或扭頭過(guò)來(lái)咬人。(4一手不容易固定時(shí),可另請(qǐng)另一人協(xié)助操作。

2、性別鑒定:同小鼠。另外健康雄性大鼠的體重明顯超過(guò)同齡雌性大鼠4、編號(hào):

(1常用苦味酸染色法,也可用專(zhuān)門(mén)打孔器進(jìn)行耳部打孔編號(hào)。

(2大鼠體形大,籠養(yǎng)數(shù)量有限,可結(jié)合染色和籠子編號(hào)以區(qū)別,方便實(shí)驗(yàn)。5、給藥:采用灌胃法:

(1為最常用的給藥方法。(2待固定穩(wěn)當(dāng)后再進(jìn)針。

(2如進(jìn)針不順,須暫停操作,以免激若大鼠,妨礙實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。6、注射:

6.1腹腔注射:注意妥善固定,最好一人固定頭部和上肢,另請(qǐng)一人固定雙下肢和尾部,以免進(jìn)針時(shí)大鼠掙扎妨礙操作6.2肌肉注射:要選擇肌肉豐滿耳無(wú)大血管通過(guò)的大腿外側(cè)進(jìn)針

6.3尾靜脈注射:尾靜脈鱗片厚,雖然肉眼可見(jiàn)血管,但成功率低,一般少用。

胃脾臟腎臟肺

肝臟睪丸心臟

雙角子宮

7、采血

尾靜脈采血:對(duì)動(dòng)物損傷小,采血后感染率低,適用于大鼠的血糖監(jiān)測(cè)。

8、麻醉:對(duì)于不同個(gè)體,由于對(duì)麻醉藥的耐受性不同,在麻醉過(guò)程中應(yīng)隨時(shí)檢查動(dòng)物的呼

吸和外周血液循環(huán)、心跳等反應(yīng),劑量不夠時(shí)可適當(dāng)加量

9、處死方法選擇原則:

(1盡量避免因處死方法不當(dāng)而造成病理?yè)p害,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果

(2盡量使動(dòng)物快速、安靜、無(wú)痛苦死亡

10、解剖:

(1顱部:大鼠視神經(jīng)發(fā)達(dá),很容易找到視交叉。

(2膽囊:缺如,這是與小鼠的不同之處。

實(shí)驗(yàn)五大鼠性周期觀察和大鼠急性肺水腫模型建立

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:SD大鼠1只(雌

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

1.通過(guò)實(shí)際操作掌握大鼠陰道涂片的制作方法和性周期觀察。

2.通過(guò)實(shí)驗(yàn)掌握大鼠急性肺水腫模型的建立,了解誘發(fā)型動(dòng)物模型的制作方法。

【實(shí)驗(yàn)步驟】

一、大鼠性周期觀察

1、固定大鼠:左手抓取大鼠,食指和中指卡緊大鼠頸部,拇指和無(wú)名指握住胸部,小指固

定腹部,右手拉住尾部和雙下肢,稍用力后拉,充分暴露雌鼠的陰部。

2、采集陰道分泌液、涂片:另一人用滴管吸生理鹽水2滴,插入大鼠陰道深部,沖洗3次,

吸出沖洗液,分別滴1滴在兩個(gè)載玻片上,用第3塊玻片推片,自然晾干(10分鐘。

3、染色和鏡檢:用姬姆薩染液染色30分鐘,細(xì)流水小心沖洗,然后在顯微鏡下觀察。

二、大鼠急性肺水腫模型的建立

1、氯化銨腹腔注射:按上述方法固定大鼠后,抽取6%氯化銨3.5ml(本大鼠重量360g,按

1ml/100g藥量,從左側(cè)下腹部進(jìn)針,無(wú)粘滯感后注射氯化銨。8分鐘后僅見(jiàn)大鼠活動(dòng)減少無(wú)其他異常改變,又追加6%氯化銨0.5ml

2、尸體解剖:大鼠出現(xiàn)興奮、肌肉震顫,繼而死亡后立即尸體解剖,直接打開(kāi)胸腔,結(jié)扎

氣管交叉稍上方,自結(jié)扎處上方剪斷氣管,游離周?chē)M織和心臟,取出肺臟,觀察形態(tài)學(xué)改變,并在臺(tái)式稱(chēng)上稱(chēng)重。

3、計(jì)算肺重量系數(shù)=肺臟重量(g/大鼠體重(g×100%。

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】

一、大鼠性周期觀察

陰道脫落細(xì)胞涂片、染色、鏡檢:

顯微鏡下看到大鼠發(fā)情間期的部分改變:有核細(xì)胞和少量上

皮細(xì)胞,也看到少量白細(xì)胞。右圖所示為20×顯微鏡下觀察到的

情況。

二、大鼠急性肺水腫模型的建立

1.腹腔注射6%氯化銨3.5ml后大鼠的活動(dòng)明顯減少,呼吸急促,出現(xiàn)肌無(wú)力,靜俯于桌上。

20分鐘后首先出現(xiàn)張口呼吸,點(diǎn)頭樣呼吸,口唇紫紺,鼻翼煽動(dòng),約15秒鐘后出現(xiàn)肌肉震顫,持續(xù)約30s,然后發(fā)生抽搐、昏迷,最后死于呼吸衰竭。如下圖所示。

2.尸體解剖:肺腫脹,包膜緊張,大部分肺表面出現(xiàn)暗紅色斑塊,切開(kāi)有少量紅色泡沫樣

液體流出;胸腔內(nèi)有液體積聚,如下圖。

3.將氣管結(jié)扎后,稱(chēng)取全肺質(zhì)量,為

4.3g,實(shí)驗(yàn)前稱(chēng)取大鼠質(zhì)量為385g

則本實(shí)驗(yàn)中,

肺重量系數(shù)=肺臟重量(g/大鼠體重(g×100%=4.3g/385g×100%=1.11%>1%【實(shí)驗(yàn)討論】

1.大鼠性周期觀察

a大鼠性周期為4~5天,由于大鼠有晝伏夜行的習(xí)性,一般在下午不能看到大鼠的

發(fā)情期。本大鼠處于發(fā)情間期

b大鼠的陰栓一般在24小時(shí)后脫落。所以觀察期間籠具必須保持整潔,不能放置刨

木花?？吹疥幩ㄕf(shuō)明交配成功,受孕率為70~80%。

c大鼠春秋兩季的受孕率較夏冬兩季高。

d大鼠性周期陰道脫落細(xì)胞變化情況如下表所示

表1大鼠性周期陰道脫落細(xì)胞變化情況

2.大鼠急性肺水腫模型的建立

2.1按提供的氯化銨劑量(8ml/kg體重,即3ml腹腔注射后,大鼠未及時(shí)出現(xiàn)呼吸

運(yùn)動(dòng)改變,可能原因:

2.1.1稱(chēng)重欠準(zhǔn)確;

2.1.2藥品濃度未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)濃度;

2.1.3個(gè)體對(duì)藥物的反應(yīng)有差異。

可結(jié)合具體情況適量追加,實(shí)驗(yàn)中追加了0.5mlNH4Cl,很快就觀察到了呼吸急促、抽搐等現(xiàn)象。

2.2注射氯化銨前大鼠呼吸、運(yùn)動(dòng)均正常。注射足量氯化銨20分鐘后大鼠出現(xiàn)典型的

呼吸、運(yùn)動(dòng)改變。尸體解剖后肺臟也出現(xiàn)典型的肺水腫表現(xiàn),肺重量系數(shù)也達(dá)到肺水腫的標(biāo)準(zhǔn),實(shí)驗(yàn)成功,對(duì)比其它小組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,總結(jié)幾點(diǎn)經(jīng)驗(yàn):

2.2.1本組大鼠出現(xiàn)呼吸改變反應(yīng)的時(shí)間相對(duì)其它小組長(zhǎng),可能是引起肺水腫較顯著的原

因,因其呼吸、循環(huán)衰竭時(shí)間較長(zhǎng),病理改變較為明顯;

2.2.2解剖時(shí),本組在氣管位置即結(jié)扎,減少了一部分如氣管的泡沫狀液體的丟失;

2.2.3解剖較為及時(shí),在其死亡后第一時(shí)間即開(kāi)胸去肺;另外操作時(shí)也未將肺損壞,標(biāo)本

較為完整。

2.3氯化銨導(dǎo)致大鼠急性肺水腫的機(jī)制可能為

2.3.1氯化銨進(jìn)入體內(nèi)破壞了體液平衡,使得肺泡比毛細(xì)血管通透性增加,致肺泡壁氣-

血、氣-液屏障破壞,大量漿液滲向肺間質(zhì)及肺泡

2.3.2氨是神經(jīng)毒性物質(zhì),高濃度的氨與三羧酸循環(huán)中間產(chǎn)物結(jié)合,導(dǎo)致其無(wú)法正常運(yùn)轉(zhuǎn),

ATP生成收到嚴(yán)重阻礙,腦功能受損,從而引起大腦皮層功能抑制,皮層中樞興

奮性增高,引起機(jī)體抽搐,同時(shí)心肌收縮力加強(qiáng)、心率加快、心肌耗氧量增加,

使得皮膚、黏膜及內(nèi)臟小血管收縮,導(dǎo)致體循環(huán)血管和肺血管劇烈收縮使得心臟

后負(fù)荷明顯增加,打破Starling定律平衡引起動(dòng)力性水腫。

實(shí)驗(yàn)六小鼠無(wú)菌取胎術(shù)、

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:KM小鼠1只(懷孕15天后一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

通過(guò)示教了解無(wú)菌取胎術(shù)培育無(wú)菌小鼠的基本原理和操作步驟。二、實(shí)驗(yàn)步驟:

1.無(wú)菌待乳鼠準(zhǔn)備(省略

2.剖腹鼠的準(zhǔn)備:清潔級(jí)小鼠,預(yù)產(chǎn)期前1天(本實(shí)驗(yàn)估計(jì)在預(yù)產(chǎn)期前1周內(nèi)進(jìn)行手術(shù)

3.無(wú)菌取胎術(shù)

3.1用頸椎脫臼法將孕鼠處死。

3.2將孕鼠仰臥位固定,用剪刀沿腹中線剪開(kāi)腹部皮膚、腹肌和腹