滅菌及染菌的防治生

關(guān)于滅菌及染菌的防治生第1頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五2第一節(jié)滅菌概述消毒---滅菌消毒是指用物理或化學(xué)方法殺死物料、容器、器具內(nèi)外的病原微生物。一般只能殺死營養(yǎng)細(xì)胞而不能殺死細(xì)菌芽孢。

滅菌是用物理或化學(xué)方法殺死或除去環(huán)境中所有微生物，包括營養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌芽孢和孢子。消毒不一定能達(dá)到滅菌要求，滅菌則可達(dá)到消毒的目的。

第2頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五3高溫滅菌輻射作用過濾作用高滲作用超聲波一、物理滅菌因素－高溫火焰灼燒法烘箱熱空氣滅菌法干熱滅菌法煮沸消毒法巴氏消毒法間歇滅菌法高壓蒸汽滅菌法濕熱滅菌（消毒）法高溫滅菌（消毒）法低溫維持法（LTH）高溫瞬時法（HTST）超高溫瞬時法（UTP）濕熱的滅菌條件：多數(shù)細(xì)菌和真菌的營養(yǎng)細(xì)胞：60℃左右處理5-10min；酵母菌和真菌的孢子：80℃才能被殺死；細(xì)菌的芽孢：121℃處理15min。第3頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五4輻射滅菌(RadiationSterilization)是利用電磁輻射產(chǎn)生的電磁波殺死大多數(shù)物質(zhì)表面或內(nèi)部微生物的一種有效方法。用于滅菌的電磁波有微波，紫外線(UV)、X-射線和γ-射線等4二、輻射作用第4頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五5紫外線

原理：波長200-300nm的紫外線具有殺菌作用。其中260~266nm波長UV與DNA吸收光譜一致。其主要作用于DNA，使一條DNA鏈上相鄰的兩個胸腺嘧啶共價結(jié)合形成二聚體，干擾DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)菌變異和死亡，并可殺滅病毒。特點(diǎn)：穿透力較弱應(yīng)用：物體表面及空氣消毒，如無菌室、接種箱

第5頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五6空氣和不耐熱的液體培養(yǎng)基的滅菌采用比細(xì)菌小的篩子或濾膜作各種過濾器，當(dāng)空氣或液體流經(jīng)篩子或濾膜時，微生物不能通過濾孔而被阻留在一側(cè)，從而達(dá)到滅菌的目的。三、過濾除菌第6頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五7是一種機(jī)械的作用因素，每秒超過2萬次振動的聲波即為超聲波。常用的超聲波發(fā)生器能產(chǎn)生20-100千赫的聲波?？墒辜?xì)菌細(xì)胞壁裂解而死亡。四、超聲波殺菌法第7頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五8原理：許多化學(xué)藥劑滲透到微生物細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行氧化、還原、水解等化學(xué)作用，引起細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)變性、酶類失活或細(xì)胞溶解而殺滅微生物。使用范圍：器皿、雙手和廠房、實驗室、無菌室等環(huán)境滅菌，空間的消毒和溶氧電極等器具的消毒。不適合用于培養(yǎng)基的滅菌。常用的滅菌劑：如甲醛、苯酚、高錳酸鉀、潔爾滅、氯化汞等。五、化學(xué)物質(zhì)滅菌第8頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五9常用的滅菌劑有效濃度化學(xué)物質(zhì)名稱有效濃度新潔爾滅(苯扎溴銨)0.25%甲醛37%杜滅芬0.25%戊二醛2%高錳酸鉀0.1%-0.25%苯酚0.1%-0.15%漂白粉5%過氧乙酸0.02%-0.2%酒精75%焦碳酸二乙酯0.01%-0.1%煤酚皂（來蘇爾）1%—5%

*第9頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五10六、臭氧滅菌

利用臭氧的氧化作用殺滅微生物細(xì)胞。臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧氣(O2)和單個氧原子(O)，后者具有很強(qiáng)的活性，對細(xì)菌有極強(qiáng)的氧化作用。

不存在任何有毒殘留物，故稱無污染消毒劑。臭氧不但對各種細(xì)菌(包括大腸桿菌、銅綠假單胞菌及雜菌等)有極強(qiáng)的殺滅能力，而且對殺死霉菌也很有效。臭氧滅菌是新近發(fā)展起來的一種消毒方式，具有使用安全、安裝靈活、殺菌作用明顯的特點(diǎn)，主要用于潔凈室及凈化設(shè)備的消毒。第10頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五滲透壓滅菌七、滲透壓滅菌滲透壓滅菌利用高滲透壓溶液進(jìn)行滅菌的方法。在高濃度的食鹽或糖溶液中細(xì)胞因脫水而發(fā)生質(zhì)壁分離，不能進(jìn)行正常的新陳代謝，結(jié)果導(dǎo)致微生物的死亡。第11頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五12

一、培養(yǎng)基滅菌

指從培養(yǎng)基中殺滅有生活能力的細(xì)菌營養(yǎng)體及其孢子，或從中將其除去。

工業(yè)規(guī)模的液體培養(yǎng)基滅菌，殺滅雜菌比除去雜菌更為常用。

第二節(jié)培養(yǎng)基滅菌第12頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五1313工業(yè)上具體措施包括：

①使用的培養(yǎng)基和設(shè)備須經(jīng)滅菌；

②好氧培養(yǎng)中使用的空氣應(yīng)經(jīng)除菌處理；

③設(shè)備應(yīng)嚴(yán)密，發(fā)酵罐維持正壓環(huán)境；

④培養(yǎng)過程中加入的物料應(yīng)經(jīng)過滅菌；

⑤使用無污染的純粹種子。二、培養(yǎng)基滅菌的措施第13頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五1414三、培養(yǎng)基滅菌的要求（1）達(dá)到要求的無菌程度（10-3）；（2）盡量減少營養(yǎng)成分的破壞，在滅菌過程中，培養(yǎng)基組分的破壞，是由兩個基本類型的反應(yīng)引起的：培養(yǎng)基中不同營養(yǎng)成分間的相互作用；對熱不穩(wěn)定的組分如氨基酸和維生素等的分解。第14頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五1515濕熱滅菌原理蒸汽具有很強(qiáng)的穿透能力，而且在冷凝時會放出大量的冷凝熱，很容易使蛋白質(zhì)凝固而殺死各種微生物。

滅菌條件121℃，30min。

滅菌缺點(diǎn)同時會破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分，甚至產(chǎn)生不利于菌體生長的物質(zhì)。四、培養(yǎng)基的濕熱滅菌

濕熱滅菌的效果，取決于致死溫度和致死時間。滅菌優(yōu)點(diǎn)蒸汽來源容易，操作費(fèi)用低，本身無毒；蒸汽有強(qiáng)的穿透力，滅菌易于徹底；蒸汽有很大的潛熱；操作方便，易管理。第15頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五16致死時間：是在致死溫度下或以上殺滅微生物所需時間。濕熱滅菌中的相關(guān)定義：致死溫度：是殺滅微生物的極限溫度。在致死溫度以上，溫度愈高，致死時間愈短。第16頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五17在實際生產(chǎn)中，由于不能完全了解雜菌的數(shù)量和種類。因此要以相對熱阻大的芽孢桿菌作為滅菌的依據(jù)。熱阻（對熱抵抗力）：微生物在某一特定條件（一定的溫度、加熱方式）的死亡時間。相對熱阻：指在相同條件下兩種微生物熱阻的比值。微生物相對熱阻營養(yǎng)細(xì)胞和酵母1.0細(xì)菌芽孢3×106霉菌孢子2~10病毒和噬菌體1~5第17頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五高溫對培養(yǎng)基的不利影響：▲會產(chǎn)生混濁或形成不溶性沉淀▲營養(yǎng)成分被破壞（PO4-3存在，葡萄糖生成酮糖，菌不利用）；▲色澤加深（褐變?nèi)绠a(chǎn)生氨基糖等）；▲改變培養(yǎng)基的pH值（通常下降0.2）；▲形成有害物質(zhì)，抑制微生物生長；消除有害影響的措施▲采用特殊的加熱滅菌法▲過濾除菌法▲加入螯合劑五、高溫對培養(yǎng)基的影響及其防止措施第18頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五19微生物的種類微生物細(xì)胞中水分對滅菌的影響細(xì)胞含水越多，蛋白質(zhì)變性的溫度越底微生物細(xì)胞菌齡對滅菌的影響老細(xì)胞水分含量低、低齡細(xì)胞水分含量高培養(yǎng)基中微生物數(shù)量對滅菌的影響六、影響滅菌的因素

第19頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五培養(yǎng)基成分對滅菌的影響：油脂、蛋白質(zhì)增加微生物的耐熱性，高濃度的鹽類，色素等可削弱其耐熱性。培養(yǎng)基的成份油脂、糖類及蛋白質(zhì)等組成的高濃度有機(jī)物會包于細(xì)胞的周圍形式一層薄膜、影響熱的傳導(dǎo)，所以可采用較高的滅菌溫度以及稍長的滅菌時間；低濃度有機(jī)物滅菌溫度可適當(dāng)降低。低濃度(1.0％～2.0％)的氯化鈉溶液對微生物有保護(hù)作用，但隨著濃度的增加，保護(hù)作用隨之降低，易引起細(xì)胞蛋白質(zhì)變性，當(dāng)濃度達(dá)到8％～10％以上時，微生物的耐熱性顯著減弱，有利于滅菌。第20頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五培養(yǎng)基中的顆粒：固體顆粒的存在影響熱穿透。培養(yǎng)基中不宜含有過多顆粒物質(zhì)，因為顆粒內(nèi)部容易潛藏微生物，而顆粒物質(zhì)本身就是一道隔熱層，使微生物不易受熱被殺滅。顆粒愈大，滅菌難度愈大。蒸汽中空氣的存在降低蒸汽分壓和滅菌溫度。但是如果罐內(nèi)空氣排除不完全，壓力表所顯示的壓力不單是罐內(nèi)蒸汽壓力，還包括了空氣分壓。此時罐內(nèi)的實際溫度就低于壓力表顯示壓力所對應(yīng)的溫度，以致造成滅菌溫度不夠而滅菌不徹底。第21頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五培養(yǎng)基中氫離子濃度對滅菌的影響：培養(yǎng)基中氫離子濃度直接影響滅菌的效果。培養(yǎng)基的酸堿度越大，所需殺滅微生物的溫度越低。pH6~8時，微生物最耐熱。pH小于6時，氫離子易滲入細(xì)胞內(nèi)，改變細(xì)胞的生理反應(yīng)促使其死亡。所以培養(yǎng)pH值愈低，所需滅菌時間愈短。泡沫的多少：培養(yǎng)基內(nèi)的泡沫對滅菌不利。因為泡沫中的空氣形成隔熱層，影響熱量傳遞，使熱量難以滲透進(jìn)去，不易殺死泡沫中的微生物，所以對容易產(chǎn)生泡沫的培養(yǎng)基，在滅菌前應(yīng)適當(dāng)加入少量消泡劑。第22頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五23分批滅菌連續(xù)滅菌七、培養(yǎng)基滅菌的方法第23頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五24

分批滅菌是將配制好的培養(yǎng)基輸入發(fā)酵罐內(nèi)，用直接蒸汽加熱，達(dá)到滅菌要求的溫度和壓力后維持一定時間，再冷卻至發(fā)酵要求的溫度，這一工藝過程稱為分批滅菌或?qū)嵐逌缇?/p>

1.分批滅菌（batchsterilization）第24頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五25過程包括：升溫、保溫和冷卻三階段。各階段對滅菌的貢獻(xiàn)：

20%、75%、5%。24016012080時間（min)050100150溫度升溫冷卻保溫培養(yǎng)基分批滅菌過程中的溫度變化情況分批滅菌的設(shè)計在發(fā)酵罐中，進(jìn)行實罐滅菌，是典型的分批滅菌。第25頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五26

全過程包括升溫、保溫、降溫三個過程。滅菌時間：t總=t1+t2+t3

滅菌作用：Δ總=Δ加熱+Δ維持+Δ降溫如果知道t1和t3，合理設(shè)計維持時間t2、亦能減少滅菌過程中培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的破壞。第26頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五271.不需專門的滅菌設(shè)備，設(shè)備投資少2.滅菌后再次染菌的危險性較小3.發(fā)酵罐內(nèi)有攪拌，加熱時上下翻騰滅菌較均勻4.適于起泡性強(qiáng)、黏度大和含固形物較多的培養(yǎng)基滅菌優(yōu)點(diǎn)第27頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五28升溫時間保溫時間冷卻時間缺點(diǎn)加熱和冷卻時間長，發(fā)酵罐的周轉(zhuǎn)率低，不能適應(yīng)大規(guī)模連續(xù)生產(chǎn)的要求，適于小型發(fā)酵廠生產(chǎn)。對培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份破壞大不能采用高溫快速滅菌工藝第28頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五29又稱連消，即培養(yǎng)基在發(fā)酵罐外經(jīng)過一套滅菌設(shè)備連續(xù)的加熱滅菌，冷卻后送入已滅菌的發(fā)酵罐內(nèi)的工藝過程。2.連續(xù)滅菌（continuoussterilization）第29頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五30發(fā)酵罐蒸汽蒸汽冷卻水無菌培養(yǎng)基配料罐泵加熱塔維持罐冷卻管

連續(xù)滅菌的基本設(shè)備一般包括（1）配料預(yù)熱罐，將配制好的料液預(yù)熱到60-70℃

，以避免連續(xù)滅菌時由于料液與蒸汽溫度相差過大而產(chǎn)生水汽撞擊聲；（2）連消塔，連消塔的作用主要是使高溫蒸汽與料液迅速接觸混和，并使料液的溫度很快升高到滅菌溫度（126-132℃）；（3）維持罐，連消塔加熱的時間很短，光靠這段時間的滅菌是不夠的，維持罐的作用是使料液在滅菌溫度下保持5-7min，以達(dá)到滅菌的目的；（4）冷卻管，從維持罐出來的料液要經(jīng)冷卻排管進(jìn)行冷卻，生產(chǎn)上一般采用冷水噴淋冷卻，冷卻到40-50℃后，輸送到預(yù)先已滅菌的罐內(nèi)。由連消塔、維持罐和冷卻器組成的連消系統(tǒng)第30頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五31可采用高溫快速滅菌工藝，營養(yǎng)成分破壞的少；發(fā)酵罐非生產(chǎn)占用時間縮短，容積利用率提高；熱能利用合理，適合實行自動化控制；不適合用于粘度大或固形物含量高的培養(yǎng)基的滅菌；增加一套連續(xù)滅菌設(shè)備，增多了操作環(huán)節(jié)，增加了染菌的幾率。特點(diǎn)第31頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五32分批滅菌與連續(xù)滅菌優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)連續(xù)滅菌1.高溫短時滅菌，培養(yǎng)基營養(yǎng)成分損失少。2.發(fā)酵罐占用時間縮短，利用率高。

1.設(shè)備復(fù)雜，操作麻煩,

染菌機(jī)會多。2.不適合含大量固體物料的滅菌。分批滅菌1.設(shè)備要求低，不需另外加熱、冷卻裝置。2.操作要求低，適合小批量生產(chǎn)規(guī)模3.適合含大量固體物料滅菌1.培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)損失大，滅菌后培養(yǎng)基質(zhì)量下降2.發(fā)酵罐的利用率較低3.不適合大規(guī)模生產(chǎn)滅菌第32頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五33分批滅菌連續(xù)滅菌實驗室采用濕熱滅菌法：121℃，20-30min大規(guī)模生產(chǎn)33第三節(jié)發(fā)酵罐的滅菌

第33頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五34第34頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五35

培養(yǎng)基的滅菌如果是采用連續(xù)滅菌法，則發(fā)酵罐應(yīng)在加入滅菌的培養(yǎng)基前先行單獨(dú)滅菌。通常是用蒸汽加熱發(fā)酵罐的夾套或蛇管并從空氣分布管中通入蒸汽，充滿整個容器后，再從排氣管中緩緩排出。容器內(nèi)的蒸汽壓力保持1公斤，20分鐘。在保溫結(jié)束后，關(guān)鍵是隨即通入無菌空氣，使容器保持正壓，防止形成真空而吸入帶菌的空氣。第35頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五3636第四節(jié)空氣除菌一、無菌空氣的概述在發(fā)酵工業(yè)中，絕大多數(shù)是利用好氣性微生物進(jìn)行純種培養(yǎng)，空氣則是微生物生長和代謝必不可少的條件。無菌空氣的制備就成為發(fā)酵工程中的一個重要環(huán)節(jié)。發(fā)酵工業(yè)應(yīng)用的“無菌空氣”是指通過除菌處理使空氣中含菌量降低在一個極低的百分?jǐn)?shù)，從而能控制發(fā)酵污染至極小機(jī)會。此種空氣稱為“無菌空氣”。第36頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五37空氣中微生物的分布特點(diǎn)⑴不同地區(qū)：城市多，農(nóng)村少；主風(fēng)向多，上游少。⑵不同高度：位置越高，數(shù)量越少，所以采用高空采風(fēng)一般每升高10米，微生物數(shù)量下降一個數(shù)量級。⑶不同季節(jié)：冬季少，夏季多，夏季約4000-6000個/立方米，為冬季的2倍。第37頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五38輻射滅菌加熱滅菌化學(xué)藥品殺菌靜電除菌介質(zhì)過濾將有機(jī)體蛋白質(zhì)變性而破壞其活力，從而殺滅空氣中的微生物空氣除菌：除去或者殺死空氣中的微生物。二、空氣除菌方法第38頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五39二、空氣除菌方法（一）輻射滅菌（二）化學(xué)殺菌

用新潔爾滅，苯酚等噴灑或用甲醛熏蒸，硫磺熏蒸，進(jìn)行空氣滅菌，滅菌時間長，滅菌不徹底，空氣濕度大，也只限于靜止空間的滅菌。

利用高能射線來進(jìn)行滅菌，如紫外線，γ射線等，其殺菌時間長，只能用于靜止空間的滅菌，如無菌室的滅菌，對于流動的空氣效果差。第39頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五40（三）加熱滅菌加熱滅菌即將空氣加熱到一定溫度后，保溫一定時間，將微生物殺死的方法。

優(yōu)點(diǎn)：加熱滅菌效果迅速，如細(xì)菌芽胞。

缺點(diǎn)：迅速加熱和冷卻費(fèi)用高，周期長時，穩(wěn)態(tài)難以維持。第40頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五41利用高壓20-50KV電壓進(jìn)行除菌，微生物的細(xì)胞與孢子大都帶有電荷，即使不帶電荷，在高壓電場中也會被電離，帶電的細(xì)胞或孢子在高壓電場中被吸附，達(dá)到除菌的目的。

該方法除菌能耗雖不高，每處理1000立方米空氣僅耗電0.2-0.8KW，但所需的電壓高，操作不安全，且除菌效率不高，在85%-99%之間，制備的無菌空氣不符合要求。（四）靜電除菌第41頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五42（五）介質(zhì)過濾除菌

介質(zhì)過濾是目前發(fā)酵工業(yè)上常使用的空氣除菌方法。它采用定期滅菌的干燥介質(zhì)來阻截流過的空氣中所含的微生物，從而制得無菌空氣。

常用的過濾介質(zhì)有棉花；活性炭或玻璃纖維、有機(jī)合成纖維、有機(jī)和無機(jī)燒結(jié)材料等。

第42頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五

特點(diǎn)：

利用過濾介質(zhì)阻截進(jìn)入的空氣的塵埃和微生物，除菌效率高，處理能力大，可以達(dá)到發(fā)酵生產(chǎn)所需用的無菌要求，且投資少，能耗低，工廠普遍采用。第43頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五空氣壓縮機(jī)過濾除菌工藝過程空氣前過濾空壓機(jī)冷卻分離加熱過濾44第44頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五兩級冷卻分離加熱除菌流程451粗過空濾器、2空壓機(jī)、3貯罐、4、6冷卻器、5旋風(fēng)分離器、7絲網(wǎng)分離器、8加熱器、9過濾器第45頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五46第五節(jié)染菌的防治發(fā)酵過程中除了生產(chǎn)菌以外，還有其它菌生長繁殖。設(shè)備滲漏、空氣帶菌、種子帶菌、滅菌不徹底及管理不善等是造成染菌的普遍原因。一、染菌概述第46頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五47競爭營養(yǎng)物質(zhì)，導(dǎo)致產(chǎn)量下降；產(chǎn)生一些代謝產(chǎn)物，改變發(fā)酵液的理化特性，使后提取困難，收率下降，質(zhì)量降低；雜菌可能會產(chǎn)生生長菌的抑制物或分解產(chǎn)物；感染噬菌體時，會造成菌體消失，發(fā)酵徹底失?。浑s菌雜菌大量繁殖后，會改變反應(yīng)液的pH值，使反應(yīng)異常。1.污染雜菌的危害：第47頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五482.污染不同種類和性質(zhì)的微生物的影響（1）污染噬菌體：噬菌體的感染力很強(qiáng)，傳播蔓延迅速，也較難防治，故危害極大。污染噬菌體后，可使發(fā)酵產(chǎn)量大幅度下降，嚴(yán)重造成斷種，被迫停產(chǎn)。第48頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五49（2）污染其它雜菌有些雜菌會使生產(chǎn)菌自溶產(chǎn)生大量泡沫，即使添加消泡劑也無法控制逃液，影響發(fā)酵過程的通氣攪拌。有的雜菌會使發(fā)酵液發(fā)臭、發(fā)酸，致使pH下降，使不耐酸的產(chǎn)品破壞。特別是染芽孢桿菌，由于芽孢耐熱，不易殺死，往往一次染菌后會反復(fù)染菌。第49頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五503.不同時間染菌對發(fā)酵的影響

污染時間是指用無菌檢測方法確準(zhǔn)的污染時間，不是雜菌竄入培養(yǎng)液的時間。雜菌進(jìn)入培養(yǎng)液后，需有足夠的生長、繁殖的時間才能顯現(xiàn)出來，顯現(xiàn)的時間又與污染菌量有關(guān)。污染的菌量多，顯現(xiàn)染菌所需的時間就短，污染菌量少，顯現(xiàn)染菌的時間就長。第50頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五51（1）種子培養(yǎng)期染菌由于接種量較小，生產(chǎn)菌生長一開始不占優(yōu)勢，而且培養(yǎng)液中幾乎沒有抗生素（產(chǎn)物）或只有很少抗生素（產(chǎn)物）。因而它防御雜菌能力低，容易污染雜菌。

如在此階段染菌，應(yīng)將培養(yǎng)液全部廢棄。

第51頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五52（2）發(fā)酵前期染菌：發(fā)酵前期最易染菌，且危害最大。原因：發(fā)酵前期菌量不很多，與雜菌沒有競爭優(yōu)勢；且還未合成產(chǎn)物（抗生素）或產(chǎn)生很少，抵御雜菌能力弱。在這個時期要特別警惕以制止染菌的發(fā)生。

染菌措施：可以用降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整補(bǔ)料量，用酸堿調(diào)pH值，縮短培養(yǎng)周期等措施予以補(bǔ)救。如果前期染菌，且培養(yǎng)基養(yǎng)料消耗不多，可以重新滅菌，補(bǔ)加一些營養(yǎng)，重新接種再用。第52頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五53（3）發(fā)酵中期染菌：會嚴(yán)重干擾產(chǎn)生菌的代謝。雜菌大量產(chǎn)酸，培養(yǎng)液pH下降；糖、氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時甚至?xí)挂旬a(chǎn)生的產(chǎn)物分解。有時也會使發(fā)酵液發(fā)臭，產(chǎn)生大量泡沫。

措施：降溫培養(yǎng)，減少補(bǔ)料，密切注意代謝變化情況。如果發(fā)酵單位到達(dá)一定水平可以提前放罐，或者抗生素生產(chǎn)中可以將高單位的發(fā)酵液輸送一部分到染菌罐，抑制雜菌。第53頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五54（4）發(fā)酵后期染菌：發(fā)酵液內(nèi)已積累大量的產(chǎn)物，特別是抗生素，對雜菌有一定的抑制或殺滅能力。因此如果染菌不多，對生產(chǎn)影響不大。如果染菌嚴(yán)重，又破壞性較大，可以提前放罐。第54頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五1、防止種子帶菌制備種子時對沙土管及搖瓶嚴(yán)格加以控制。沙土制備時要多次間歇滅菌注意接種時的無菌操作子瓶、母瓶的移種和培養(yǎng)無菌室和搖床間都要保持清潔。無菌室內(nèi)要供給恒溫恒濕的無菌空氣，還要裝紫外燈用以滅菌，或用化學(xué)藥品滅菌。二.染菌的防止第55頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五無菌室要求有紫外燈：打開紫外燈，照半小時，關(guān)燈后15分鐘再接種。用消毒藥水如新潔而滅擦桌子、拖地，開啟超凈臺的通風(fēng)，接種時必須在超凈臺上操作。超凈臺裝有一臺鼓風(fēng)機(jī)，進(jìn)風(fēng)口有一粗過濾器，出風(fēng)口有高效過濾器，保證無菌風(fēng)從超凈臺吹出，外界有菌空氣不可能進(jìn)入接種區(qū)域，保證無菌條件。接種人員必須穿好無菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干凈。第56頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五2．防止設(shè)備滲漏發(fā)酵設(shè)備及附件由于化學(xué)腐蝕、電化學(xué)腐蝕，物料與設(shè)備摩擦造成機(jī)械磨損以及加工制作不良等原因會導(dǎo)致設(shè)備及附件滲漏。設(shè)備上一旦滲漏，就會造成染菌，例如冷卻盤管、夾套穿孔滲漏，有菌的冷卻水便會通過漏孔而進(jìn)入發(fā)酵罐中招致染菌。閥門滲漏也會使帶菌的空氣或水進(jìn)入發(fā)酵罐而造成染菌。第57頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五3．防止培養(yǎng)基滅菌不徹底培養(yǎng)基滅菌方法——高壓蒸汽滅菌分批滅菌121℃，30分鐘連續(xù)滅菌罐溫125－130℃

，30－45分鐘培養(yǎng)基滅菌前含有大量雜菌，滅菌時如果蒸汽壓力不足，就達(dá)不到要求的溫度；滅菌時產(chǎn)生大量泡沫或發(fā)酵罐中有污垢堆積，就會窩藏大量雜菌，造成滅菌不徹底。第58頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五防止方法：緩慢開啟蒸汽閥門，或加入少量消泡劑。滅菌時還會因設(shè)備安裝或污垢堆積造成一些“死角”。這些死角蒸汽不能有效達(dá)到，常會窩藏耐熱芽孢桿菌，所以設(shè)備安裝要注意不能造成死角，發(fā)酵設(shè)備要經(jīng)常清洗，鏟除污垢。第59頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五4．防止空氣引起的染菌空氣冷卻器的列管穿孔泄露，冷卻水會滲入到空氣中，造成染菌。棉花-活性炭過濾器長期使用后，棉花和活性炭的體積被壓縮而松動，如果上下端棉花鋪得厚薄不均，厚的一邊阻力大空氣不暢通，薄的一邊空氣容易通過，久而久之，薄的一邊長期受空氣頂吹而使棉花活性炭改變位置，造成過濾器失效。第60頁，共68頁，2023年，2月20日，星期五5、發(fā)酵染菌后的措施染菌后的培養(yǎng)基必須滅菌后才可放下水道。滅菌方法：可通蒸汽滅菌，也可加入過氧乙酸等化學(xué)滅菌劑攪拌半小時，才放下水道。否則由于各罐的管道相通，會造成其它罐的染菌，而且直接放下水道也會造成空氣的污染而導(dǎo)致其它罐批染菌。凡染菌的罐要找染菌的原因，對癥下藥，該罐也要徹底清洗，進(jìn)行空罐消毒，才可進(jìn)罐。染菌厲害時，車間環(huán)境要用石灰消毒，空