細(xì)胞表位的研究

關(guān)于細(xì)胞表位的研究第1頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五2第一部分

T細(xì)胞表位的基本概念第2頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五3抗原結(jié)合價(jià)Antigenicvalence

能與抗體分子結(jié)合的抗原表位的總數(shù)。半抗原——

單價(jià)抗原完全抗原——

多價(jià)抗原表位

Epitope

抗原決定基

AntigenicDeterminant

決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)，是與抗體或抗原受體結(jié)合的基本結(jié)構(gòu)單位。1、抗原表位的概念第3頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五42、抗原表位的類型順序表位（sequentialepitope)/線性表位

由連續(xù)性線性排列的短肽構(gòu)成。構(gòu)象表位(conformationtialepitope)/非線性表位短肽或多糖殘基在序列上不連續(xù)性排列，在空間上形成特定的構(gòu)象。第4頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五5T細(xì)胞表位與B細(xì)胞表位第5頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五63、共同抗原表位(commonepitope)不同抗原間含有的相同或相似的表位。交叉反應(yīng)(cross-reaction)

抗體或致敏淋巴細(xì)胞對(duì)具有相同或相似表位的不同抗原的反應(yīng)。第6頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五第7頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五MHCclassIpeptidesof8-10aminoacidsMHCclassIIpeptidesof>13aminoacidsb2-Ma-chainPeptidea-chainb-chainPeptide4.MHC分子和抗原肽的相互作用第8頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五

抗原肽和MHC相互作用的分子基礎(chǔ)

*錨定殘基（anchorresidue）

在抗原肽-MHC分子復(fù)合物中，抗原肽的兩個(gè)或兩個(gè)以上專司和MHC分子結(jié)合的氨基酸殘基稱為錨定殘基。

第9頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五YIMHC分子YIMHC分子PSASIKSPSAIKS共用模體第10頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五MHCI類分子胞外區(qū)的結(jié)構(gòu)第11頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五抗原肽和HLA相互作用的分子基礎(chǔ)MHC限制性;CD4與CD8表位的差別；人和其他動(dòng)物的差別第12頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五13第13頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五14T細(xì)胞表位的研究方法1.多肽片段的來(lái)源

降解；表達(dá)；人工合成2.MHC分子的結(jié)合

直接結(jié)合；預(yù)測(cè)3.抗原特異性T細(xì)胞的來(lái)源

感染或者免疫動(dòng)物或病人

篩選方法

細(xì)胞系的建立4.檢測(cè)指標(biāo)活化；增殖；細(xì)胞因子；殺傷作用第14頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五15T細(xì)胞表位的研究意義1.檢測(cè)刺激細(xì)胞使用Tetramer技術(shù)MHC2.疫苗表位疫苗3.治療第15頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五16第二部分SARS-CoVS蛋白T細(xì)胞表位的研究第16頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五17第17頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五1.SARS-CoVSDNA疫苗Zhi-yongYang(NIH)Nature.2004,428(1)第18頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五2.免疫方法8wfemaleBALB/cprimeatweek050ugDNAboosttwiceatweek3,62-3wafterprime4-6wafterboost1-2wafterboosttoobservetheeffectofprimeimmunizationtoobservetheeffectofboostimmunizationtoobservetheeffectoflongtermimmunization:mousesacrificed50ugDNAi.mi.m第19頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五3.單細(xì)胞懸液的準(zhǔn)備

淋巴結(jié)脾肺剪碎（消化），研磨，200目篩網(wǎng)過(guò)濾，裂解紅細(xì)胞，2×106/ml第20頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五4.SARS-CoVS蛋白多肽169條,17-19aa,10aa重疊

(NIHNIAIDVRC)P1S1-17P2S8-25P3S16-22P168S1200-1216P169S1207-1255第21頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五1.S抗原刺激以后IFN-

（圖A）和IL-2的產(chǎn)生（圖B）

結(jié)果與討論Theemptycirclesrepresenttheresultsintheabsenceofpeptidesandsolidcirclesrepresenttheresultsinthepresenceofpeptides.第22頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五23第23頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五24Fig.2.VerificationofpotentialSARSCoVSepitopesPotentialSARSCoVSepitopesP50,P51,P59andP60inpool3,andP141,P144,P151andP152inpool8wereusedtostimulatesplenocytesfromSARSCoVSDNAimmunizedBALB/cmice.IFN-γproductionwasdetectedbyELISA(A)andELISPOT(B),respectively.Eachsymbolrepresentstheresultsofanindividualexperiment(n=3~7).Inaddition,intracellularcytokinestaining(C)wasperformedtodetermineCD4+orCD8+Tcellpopulation.“0”representsthenon-peptidestimulatedcontrol.Numbersatthecornerineachsamplerepresentthepercentageofpositivecells.Representativeresultsofthreeindependentexperimentswereshown.第24頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五25Fig.3.Identificationofnewsynthetic10aaCD4andCD8epitopesTheoverlappedaminoacidsbetweenP50andP51(N50),andbetweenP59andP60(N60)weresynthesized.PeptidesN50andN60wereusedtostimulatesplenocytesfromSARSCoVSDNAvaccine-immunizedmice.P50andP60wereusedaspositivecontrols,respectively.ELISA(A)andELISPOT(B)wereperformedasdescribedabove.Furthermore,N50and60wereserialdilutedtostimulatesplenocytesfromtheDNAimmunizedmice,ELISPOT(C)wasperformedtodetectnumbersofantigenspecificIFN-γproducingcells.Experimentswerecarriedoutinduplicateandrepresentativeresultswereshown.“0”representsnon-peptide-culturednegativecontrol.第25頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五26Fig.4.SynergisticrolesofpeptideN50andN60inH-2bandH-2drestrictedmiceBALB/candC57BL/6micewereimmunizedbySARSCoVSDNAvaccineasdescribedpreviously.1-2weeksafterfinalboostvaccination,N50andN60wereadministratedaloneorcombinedtostimulatesplenocytesfrombothkindsofheterogeneousmiceatthesametimes.ELISA(A),ELISPOT(B)andFACS(C)wereperformedtodetectIFN-γ.“0”representsnon-peptidecontainednegativecontrol.Experimentsweredoneinduplicateandrepresentativeresultswereshown.第26頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五27第27頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五28Fig.6.N50andN60canelicitantigenspecificimmuneresponsesinvivoBALB/cmicewereprimedtwicewiththeDNAvaccines.3weekslater,miceweredividedintofourgroups(n=4),injectedbypeptides(N50andN60,50μgofeach)plusCpGODN(25μg),peptide,CpGODNandPBS,respectively.1-2weeksafterboostvaccination,singlecellsuspensionswerepreparedfromlymphnode(LN),spleenandlung.CellswerestimulatedbypeptideN50andN60plusanti-CD28.ELISA(A)andELISPOT(B)wereperformedtodetecttheantigenspecificIFN-γlevelsandcellsineachgroup.FACSwasperformedtodetectthefrequenciesofantigenspecificIFN-γand/orIL-2producingcellsinCD4+(C)andCD8+(D)Tcellpopulations,respectively.Experimentsweredoneinduplicateandrepresentativeresultswereshown.第28頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五29第29頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五30第30頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五第三部分SARS-CoVS蛋白CTL表位殘基的初步研究第31頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五32第32頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五錨定位殘基第33頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五34第34頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五35第35頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五36第36頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五37第37頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五38第38頁(yè)，共50頁(yè)，2023年，2月20日，星期五3