不能錯(cuò)過的膠乳標(biāo)記干貨

2/2不能錯(cuò)過的膠乳標(biāo)記干貨！01膠乳微球的凝集問：保存在瓶子里的膠乳微球發(fā)生凝集沉淀現(xiàn)象該如何處理？通常情況下膠乳微球在2-8℃保存是可以很好的處于懸浮狀態(tài)，但如果長(zhǎng)時(shí)間靜置的情況下仍會(huì)由于重力的作用而發(fā)生沉淀現(xiàn)象，在使用前用旋渦振蕩以及水浴超聲的方式將微球進(jìn)行重懸。問：微球在偶聯(lián)過程中發(fā)生凝集該如何處理？微球在偶聯(lián)過程中發(fā)生凝集主要分為以下幾種情況：1.當(dāng)加入EDC后發(fā)生凝集：建議降低微球在反應(yīng)體系中的濃度，同時(shí)EDC需緩慢加入，并在加入之后將微球充分混勻；2.當(dāng)加入抗體后發(fā)生凝集：建議嘗試使用水浴超聲的方式看是否可以使微球重懸，如這種凝集現(xiàn)象是可逆的則繼續(xù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；如不能使微球重懸則考慮提高抗體的濃度再實(shí)驗(yàn)，或嘗試使用其他偶聯(lián)緩沖體系。02膠乳微球的偶聯(lián)效率問：在偶聯(lián)反應(yīng)之后，發(fā)現(xiàn)抗體與微球的偶聯(lián)效率低，可能的原因有哪些？可能的原因有以下幾種情況：1.EDC的活性不高，建議檢查EDC是否已經(jīng)潮解失效，同時(shí)EDC和NHS都需現(xiàn)配現(xiàn)用；2.抗體的量不足，建議提高偶聯(lián)時(shí)抗體的濃度；3.反應(yīng)緩沖液不適合，建議調(diào)整緩沖液的pH值或更換其他緩沖液；4.反應(yīng)過程中帶入了含有氨基基團(tuán)的其他蛋白，并與目的抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)，建議嚴(yán)格檢查所使用的試劑避免微球的非特異性吸附。問：在微球偶聯(lián)抗體之后，發(fā)現(xiàn)其非特異性吸附較高，可能的原因有哪些？可能的原因有以下幾種情況：1.微球表面基團(tuán)含量不高，建議使用表面基團(tuán)更高的微球；2.微球在偶聯(lián)過程中發(fā)生凝集，聚集的微球容易導(dǎo)致非特異性吸附，建議在偶聯(lián)時(shí)使用水浴超聲的方式使微球保持懸浮狀態(tài)；3.微球沒有封閉完全，建議延長(zhǎng)微球封閉的時(shí)間或更換其他封閉效果好的封閉劑。03其他相關(guān)問題問：?jiǎn)慰寺】贵w和多克隆抗體在與膠乳微球結(jié)合過程中有什么區(qū)別？由于單克隆抗體與多克隆抗體具有不同的等電點(diǎn)，在與微球結(jié)合的過程中表現(xiàn)是不一樣的。多克隆抗體在其等電點(diǎn)時(shí)的偶聯(lián)效果較好，這是因?yàn)樵谠損H值條件下抗體的結(jié)構(gòu)處于最佳狀態(tài)，同時(shí)在微球表面所占據(jù)的面積也最小。單克隆抗體要比多克隆抗體具有更好的特異性，但是其與微球的結(jié)合力要相對(duì)弱一些，同時(shí)單克隆抗體通常情況下并不能有效的形成免疫復(fù)合物，單克隆抗體的疏水性隨著抗體的成熟度的不同而有所不同。另外，某些單克隆抗體的等電點(diǎn)比較低，在這種低pH條件下膠乳微球會(huì)變的不太穩(wěn)定而容易引起聚集，因此如果想在相同條件下獲得很好的偶聯(lián)效果需要調(diào)整相應(yīng)的緩沖液以及pH值等。問：膠乳微球偶聯(lián)抗體之后在2-8℃保存一個(gè)多月后發(fā)生失活，可能的原因是什么？可能由以下幾個(gè)方面引起的：1.保存緩沖液中封閉劑的濃度：當(dāng)封閉劑的濃度過高時(shí)會(huì)與抗體發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)現(xiàn)象；2.抗體的偶聯(lián)效率：在偶聯(lián)時(shí)使用更高濃度的抗體會(huì)提高其偶聯(lián)效率，使封閉劑不容易與微球發(fā)生反應(yīng)；3.使用PBS緩沖液保存，其他緩沖液可能會(huì)對(duì)溶液的穩(wěn)定性產(chǎn)生影響。另外需要注意的是隨著保存時(shí)間的推移溶液中的蛋白會(huì)變的更容易吸附到微球的表面，這種抗體活性的喪失可能就是這個(gè)原因引起的，因?yàn)殡S著更多蛋白被吸附分子間變的更加的緊密，導(dǎo)致抗體的構(gòu)象發(fā)生改變從而失活，如果確實(shí)是這樣的話，那么在偶聯(lián)時(shí)應(yīng)該提高