2022年醫(yī)學(xué)專題-種子健康檢驗(yàn)資料

3種子(zhǒngzi)健康檢驗(yàn)3.1種傳病害(bìnghài)檢驗(yàn)的意義3.2種傳病害檢驗(yàn)的方法第一頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.1種傳病害(bìnghài)檢驗(yàn)的意義3.1.1播種無(wú)病種子（1）檢疫性病害禁止進(jìn)境；（2）國(guó)內(nèi)檢疫性病害，調(diào)運(yùn)種子時(shí)要做好檢疫工作。（3）對(duì)于普通病害，寄主攜帶(xiédài)病原體超過(guò)一定限度，不能用作種子繁殖和推廣第二頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.1種傳病害檢驗(yàn)(jiǎnyàn)的意義3.1.2提高種子消毒的效果種子所帶病原物的種類、數(shù)量、潛伏部位等，處理與否，選擇藥劑和方法都會(huì)不一樣。（1）種子表面與內(nèi)部(nèibù)帶菌；（2）種子帶菌作為唯一初侵染來(lái)源；（3）種子帶菌，土壤或糞肥帶菌，種傳和土傳（4）初侵染來(lái)源多，再侵染頻繁的病害第三頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.1.3防止檢疫性病原生物的傳播與為害（1）一旦發(fā)現(xiàn)帶有危險(xiǎn)性病原生物，禁止調(diào)運(yùn)和作種子；發(fā)現(xiàn)傳進(jìn)新區(qū)，銷毀或防除(fángchú)（2）有些病原物的不同生理小種或病毒的不同株系問(wèn)題，也應(yīng)進(jìn)行檢驗(yàn)3.1種傳病害(bìnghài)檢驗(yàn)的意義第四頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2種傳病害檢驗(yàn)(jiǎnyàn)的方法3.2.1種傳病害的產(chǎn)地檢驗(yàn)(jiǎnyàn)3.2.2種傳病害的室內(nèi)檢驗(yàn)第五頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.1種傳病害的產(chǎn)地(chǎndì)檢驗(yàn)確定種子是否帶病或帶何種病，首先要進(jìn)行田間檢驗(yàn)（產(chǎn)地檢驗(yàn)），尤其是對(duì)于種子上不表現(xiàn)癥狀(zhèngzhuàng)，室內(nèi)無(wú)快速、準(zhǔn)確、有效的檢驗(yàn)方法。產(chǎn)地檢驗(yàn)的開展：第六頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.1種傳病害(bìnghài)的產(chǎn)地檢驗(yàn)3.2.1.1搞好病情調(diào)查和疫情普查（1）檢測(cè)有無(wú)檢疫性對(duì)象如有，目前發(fā)生種類、地區(qū)和為害面積；檢疫性對(duì)象的發(fā)生規(guī)律，銷毀或防除劃為疫區(qū)封鎖(fēnɡsuǒ)（2）普通病害為害的時(shí)期及受害的程度，造成的損失第七頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.1種傳病害(bìnghài)的產(chǎn)地檢驗(yàn)3.2.1.2建立優(yōu)質(zhì)種子繁育基地（1）基地所采用的種子來(lái)源于無(wú)病區(qū)，保證不帶任何(rènhé)檢疫對(duì)象（2）所有種子要進(jìn)行消毒處理（3）產(chǎn)地檢驗(yàn)存在檢疫對(duì)象，應(yīng)撤消基地第八頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.1種傳病害(bìnghài)的產(chǎn)地檢驗(yàn)我國(guó)：（1）基地?zé)o檢疫對(duì)象；（2）種子來(lái)自非疫區(qū)；（3）專人負(fù)責(zé)，防止(fángzhǐ)檢疫性或危險(xiǎn)性病害傳入；（4）一旦傳入，就地銷毀第九頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.1種傳病害的產(chǎn)地(chǎndì)檢驗(yàn)3.2.1.3隔離試種檢驗(yàn)1）不易發(fā)現(xiàn)癥狀或病原體；2）國(guó)外引種；3）減少(jiǎnshǎo)病害初侵染來(lái)源，保證生產(chǎn)上的安全，先進(jìn)行隔離試種，觀察發(fā)病率隔離種植區(qū)在相對(duì)封閉或嚴(yán)密的地區(qū)進(jìn)行試種（隔蟲，土壤消毒），保證植株發(fā)病只能來(lái)源于種子第十頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.1種傳病害(bìnghài)的產(chǎn)地檢驗(yàn)3.2.1.4實(shí)施產(chǎn)地田間檢驗(yàn)（1）檢疫性病害，發(fā)生流行季節(jié)，病情癥狀較明確階段進(jìn)行普查；（2）非檢疫性病害，分期進(jìn)行系統(tǒng)調(diào)查，查看各生育期的發(fā)病程度，了解(liǎojiě)種子帶菌情況。田間檢驗(yàn)為無(wú)病或輕病的會(huì)不會(huì)變成重病種？第十一頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2種傳病害檢驗(yàn)(jiǎnyàn)的方法3.2.2種傳病害(bìnghài)的室內(nèi)檢驗(yàn)3.2.2.1取樣3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)方法第十二頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.1取樣(qǔyàng)一批種子，全部檢驗(yàn)是不可能的；只能取其中一部分進(jìn)行檢驗(yàn)分析。如果抽取的樣品不能代表(dàibiǎo)全部種子實(shí)際情況，即便檢驗(yàn)過(guò)程精細(xì)，也不能反映該批種子正確的結(jié)果。（1）取樣的基本原則：樣品必須具有代表性

A確定取樣點(diǎn)；B樣點(diǎn)必須全面均勻；C各點(diǎn)所取樣品數(shù)量應(yīng)該基本一致。第十三頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.1取樣(qǔyàng)（2）樣品的種類小樣：整批的種子堆或倉(cāng)庫(kù)中，用扦樣器或徒手從不同部位、不同樣點(diǎn)每次取出來(lái)的小量樣品原始樣品：把由一批或部分(bùfen)種子所扦取出來(lái)的小樣全部混合起來(lái)組成。平均樣品：原始樣品分樣器混合，再?gòu)闹腥〕鱿喈?dāng)數(shù)量的樣品。代表性強(qiáng)。第十四頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.1取樣(qǔyàng)試樣：平均樣品經(jīng)過(guò)混合，稱出一定量種子，供室內(nèi)檢驗(yàn)使用的樣品抽取小樣和原始(yuánshǐ)樣品是取樣工作中最重要的一環(huán)。如果數(shù)量與部位抽取不恰當(dāng)，會(huì)影響樣品的代表性。第十五頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.1取樣(qǔyàng)（3）取樣(qǔyàng)的方法劃批：作物、品種、年度、來(lái)源、國(guó)家、運(yùn)輸工具、時(shí)間A袋裝種子取樣法B散裝種子取樣法第十六頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.1取樣(qǔyàng)A袋裝種子(zhǒngzi)取樣法10袋以下扦取總袋數(shù)的1/211-20袋扦取6袋21-40袋扦取7袋41-60袋扦取8袋61-80袋扦取9袋81-100袋扦取10袋101袋以上每增加20袋多扦取1袋第十七頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.1取樣(qǔyàng)樣袋分布均勻：樣袋呈堆積(duījī)狀態(tài)，在堆樁的上、中、下各部分別取樣；且每袋取樣時(shí)，不能局限在某一部位扦樣：小粒種子用單管扦樣器，大粒種子用雙管扦樣器第十八頁(yè)，共五十六頁(yè)。B散裝種子(zhǒngzi)取樣法分區(qū)設(shè)點(diǎn)：25平方米，5點(diǎn)取樣；相鄰區(qū)域，實(shí)行取樣點(diǎn)合并設(shè)在各區(qū)界限上按堆分層：不足2米，分上下2層；2-3米，分上、中、下3層；3米以上增加1層扦取小樣：分層定點(diǎn)后，按上、中、下的順序取樣。第十九頁(yè)，共五十六頁(yè)。第二十頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.1取樣(qǔyàng)（4）取樣重量：40000粒（平均樣品）：依據(jù)千粒重來(lái)計(jì)算最低重量實(shí)驗(yàn)室定量樣品的扦?。喝绻骄鶚悠窋?shù)量(shùliàng)還太多，可采用正方形四分法：樣品倒在平板，厚度不超過(guò)1cm，用正方形四分法扦取所需要的份數(shù)和數(shù)量(shùliàng)（粒數(shù)）第二十一頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.1取樣(qǔyàng)（5）取樣注意事項(xiàng):A取樣器、分樣器、容器、用具等要滅菌B棉花、花生等種子不能用扦樣器取樣原因：防止(fángzhǐ)病菌污染，保證檢驗(yàn)結(jié)果的正確性；防止(fángzhǐ)傷種，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性第二十二頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2種傳病害(bìnghài)的室內(nèi)檢驗(yàn)3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)方法肉眼檢驗(yàn)；過(guò)篩檢驗(yàn)；比重檢驗(yàn)；解剖檢驗(yàn)；洗滌檢驗(yàn)；漏斗分離檢驗(yàn)；保濕萌芽檢驗(yàn)；分離培養(yǎng)檢驗(yàn)；整胚檢驗(yàn)；接種檢驗(yàn)；化學(xué)染色檢驗(yàn)；熒光反應(yīng)檢驗(yàn)；噬菌體檢驗(yàn)；血清學(xué)檢驗(yàn)；病毒電子顯微鏡檢驗(yàn)；分子雜交分析(fēnxī)；PCR體外擴(kuò)增DNA種子健康檢測(cè)的6個(gè)要求：特異性、靈敏性、快速性、簡(jiǎn)單性、成本效率性、可靠性第二十三頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)(shìnèi)檢驗(yàn)方法（1）肉眼檢驗(yàn)應(yīng)用于具有明顯癥狀的種子，或者病原物容易識(shí)別，個(gè)體(gètǐ)較大的種傳病害。混雜于種子間的蟲癭，菌癭，菌核或菟絲子；種子表面孢子量大的（腥黑穗）；感病后有明顯癥狀的病粒，小麥黑胚?。ㄅ卟坑胁∽儯┑诙捻?yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法方法：從平均樣品中取出一半種子作試樣，放在白紙或玻璃板上，用肉眼或5-10倍的擴(kuò)大鏡檢查，取出病原體或病粒，稱其重或計(jì)其粒數(shù)，計(jì)算病害感染率。注意：無(wú)癥狀表現(xiàn)的不一定是無(wú)病種子；不同病害相似癥狀，同一病害不同或多種癥狀；無(wú)法判斷(pànduàn)有無(wú)活力或致病性。第二十五頁(yè)，共五十六頁(yè)。大豆(dàdòu)灰斑病大豆(dàdòu)紫斑病第二十六頁(yè)，共五十六頁(yè)。小麥粒(màilì)線蟲病第二十七頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法（2）過(guò)篩檢驗(yàn)適用于較大病原體，其形狀、大小與種子不同。如菌癭、病核、蟲癭及赤霉病粒等。方法：從平均樣品中取出一半種子作試樣，用規(guī)定孔徑的篩子過(guò)篩，不同作物種子所用篩孔不同，最后計(jì)算(jìsuàn)病害感染率。一般采用圓孔篩。每千克樣品的檢驗(yàn)對(duì)象含量=（檢驗(yàn)對(duì)象數(shù)量/試樣重量）×1000第二十八頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)(shìnèi)檢驗(yàn)方法（3）比重檢驗(yàn)病原體與種子大小相仿，但比重存在差異，如菌核、菌癭、蟲癭(chóngyǐng)小麥粒線蟲的蟲癭，用20%鹽水進(jìn)行懸浮。第二十九頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)(shìnèi)檢驗(yàn)方法（4）解剖檢驗(yàn)適用于表面(biǎomiàn)無(wú)明顯癥狀，診斷比較困難的種子，可以了解病菌的潛伏場(chǎng)所。方法：切片、染色、觀察馬鈴薯環(huán)腐病，切開，用手?jǐn)D壓，維管束部分有菌膿溢出，制片高倍鏡下觀察。小麥線蟲病的蟲癭和腥黑穗病的菌癭（黑粉，冬孢子，腥味）第三十頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法（5）洗滌檢驗(yàn)適用(shìyòng)于種子表面帶病而肉眼看不見的種子病害。方法：取樣，洗滌，振蕩，離心，懸浮，記載病原體種類及每視野的孢子數(shù)，并計(jì)算每粒種子孢子負(fù)荷量。第三十一頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)(shìnèi)檢驗(yàn)方法（6）漏斗分離檢驗(yàn)此法專門用于種子(zhǒngzi)攜帶線蟲的檢驗(yàn)。具體方法（貝爾曼漏斗法）：

將樣品放在漏斗內(nèi)的過(guò)濾紙上，在漏斗的排水口處套一像皮管，其上裝有螺旋節(jié)流夾，將種子用恒溫細(xì)噴霧24小時(shí)，多余的水會(huì)自種子與漏斗的邊緣流掉，這樣線蟲通過(guò)濾紙下沉到螺旋夾以上的橡皮管內(nèi)，然后打開螺旋節(jié)流夾搜集下沿液，便可檢驗(yàn)出線蟲并計(jì)算出含量。第三十二頁(yè)，共五十六頁(yè)。第三十三頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法（7）保濕萌芽檢驗(yàn)適用于種子攜帶病菌在種子萌芽階段開始為害，萌發(fā)期或幼苗早期表現(xiàn)癥狀，或種子未萌芽，種表長(zhǎng)出病菌的種傳病害?？梢詸z測(cè)種子的帶菌情況，發(fā)芽(fāyá)情況，種內(nèi)感染情況。第三十四頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法A保濕培養(yǎng)(péiyǎng)檢驗(yàn)（吸水紙，冷凍吸水紙，瓊脂平皿法）吸水紙法：吸水紙吸足無(wú)菌水，放入培養(yǎng)皿，種子排放在吸水紙上，放入20-28℃培養(yǎng)，12小時(shí)光照/黑暗，有時(shí)加入0.1-0.2%的2，4-D溶液代替水冷凍吸水紙法：10℃3天，20℃2天，-20℃冷凍過(guò)夜，然后20℃，12小時(shí)光照/黑暗，形成孢子，避免伸長(zhǎng)瓊脂平皿法：1.5-1.7%的瓊脂液，制成平板，將種子放入第三十五頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法B砂內(nèi)萌芽檢驗(yàn)法

河砂（1mm篩孔）及容器滅菌（干熱滅菌），注入冷開水至砂量的60%左右（17%含水量），低容器邊緣4厘米，排列種子，加砂覆蓋2-3厘米，25℃培養(yǎng)，幼芽連根拔出。檢測(cè)幼苗和未發(fā)芽種子癥狀以及種苗上有無(wú)(yǒuwú)孢子。C土內(nèi)萌芽檢驗(yàn)法D試管幼苗癥狀測(cè)定法第三十六頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)(shìnèi)檢驗(yàn)方法（8）分離培養(yǎng)(péiyǎng)檢驗(yàn)適用于種子內(nèi)部，不易發(fā)現(xiàn)和鑒定的病原菌，或種子雖有病斑，但無(wú)病征或種表攜帶的種傳病害。專性寄生物（病毒，白粉，銹菌等）除外

A分離潛伏于種表或深層的病菌；B確定病菌的潛伏部位；C了解種子外部攜帶的菌群；D了解種子感染和萌發(fā)的總體情況；E分離無(wú)性繁殖材料所攜帶的病菌第三十七頁(yè)，共五十六頁(yè)。第三十八頁(yè)，共五十六頁(yè)。細(xì)菌的分離培養(yǎng)培養(yǎng)基：肉汁胨培養(yǎng)基（牛肉浸膏3g，蛋白胨5-10g，瓊脂17-20g，水1000ml）劃線分離法：種表消毒磨碎，無(wú)菌水將細(xì)菌溢出(yìchū)，接種環(huán)蘸取劃線。將單個(gè)細(xì)菌分開，經(jīng)培養(yǎng)后形成單菌落，獲得純菌株。平板稀釋法：病原細(xì)菌數(shù)量大，稀釋培養(yǎng)使病原細(xì)菌與雜菌分開，形成純培養(yǎng)。培養(yǎng)皿4個(gè)，1ml無(wú)菌水，接種環(huán)攪勻，依次移入2、3、4皿，倒培養(yǎng)基（45℃）。第三十九頁(yè)，共五十六頁(yè)。第四十頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法（9）接種檢驗(yàn)有時(shí)在植物發(fā)病部位發(fā)現(xiàn)(fāxiàn)或混雜在進(jìn)境種子里的真菌，并不是引起該種病害的病原真菌，可能是由其他雜菌污染所造成的。第四十一頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法拌種接種(jiēzhòng)：種子和孢子拌勻浸種接種：菌絲段、孢子或細(xì)菌懸浮液花期接種：（花期侵入的病菌）小麥散黑穗病噴霧接種：細(xì)菌或懸浮液稀釋，22-28℃保溫針刺接種：需要傷口侵入的病原物剪葉接種：傷口侵入的細(xì)菌（水稻白葉枯病）摩擦接種：病毒，隔離條件下進(jìn)行，金剛砂土壤接種，蘸根接種，根部切傷接種，涂抹法第四十二頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法（10）化學(xué)染色檢驗(yàn)不同的化學(xué)品，對(duì)細(xì)菌、真菌、病毒等染色，鑒別有無(wú)病原體及其種類植物細(xì)菌性病害（革蘭氏染色）步驟：切開病部，擠壓挑取菌膿，結(jié)晶(jiéjīng)紫草酸胺液染色1分，碘液染色1分，95%的乙醇褪色30秒，番紅染10秒，干燥后鏡檢。馬鈴薯環(huán)腐病，陽(yáng)性，紫色，青枯病菌陰性，紅色第四十三頁(yè)，共五十六頁(yè)。曲利苯藍(lán)未被侵染(qīnrǎn)被侵染(qīnrǎn)小麥(xiǎomài)散黑穗病第四十四頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法（11）熒光反應(yīng)檢驗(yàn)植物細(xì)胞中含有各種核酸，在紫外線下能發(fā)生熒光，細(xì)菌、真菌、病毒等有熒光反應(yīng)，并且它們比正常組織的熒光反應(yīng)要強(qiáng)。凡感染環(huán)腐病的馬鈴薯塊莖切面均呈現(xiàn)綠色的熒光，凡無(wú)病的薯塊則呈現(xiàn)紫色熒光；而革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌為害的薯塊都為黃色、藍(lán)色或綠色。菜豆日燒病菌和菜豆細(xì)菌性疫病菌在浮白色或淺黃色豆粒上產(chǎn)生藍(lán)白色熒光。注意(zhùyì)：少數(shù)有病種子有時(shí)不發(fā)光，而健康種子可能會(huì)發(fā)較強(qiáng)光。第四十五頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)(shìnèi)檢驗(yàn)方法（12）血清學(xué)檢驗(yàn)

血清學(xué)方法是病毒診斷和鑒定(jiàndìng)的基礎(chǔ)方法。其基本原理是抗體與抗原之間的?；越Y(jié)合。方法：酶聯(lián)免疫吸附法、斑點(diǎn)免疫結(jié)合測(cè)定法、免疫擴(kuò)散、免疫電泳、熒光免疫免疫膠體金技術(shù)。第四十六頁(yè)，共五十六頁(yè)。ELISA流程(liúchéng)IndirectELISADirectELISA第四十七頁(yè)，共五十六頁(yè)。3.2.2.2室內(nèi)檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法（13）PCR檢測(cè)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerasechainreaction,PCR)技術(shù)(jìshù)已廣泛用于病毒、細(xì)菌、真菌、植原體、害蟲和雜草等檢測(cè)。方法：提取病原物的DNA，設(shè)計(jì)特異性引物，利用PCR技術(shù)進(jìn)行相應(yīng)真菌種類的鑒定。因其靈敏度高、特異性強(qiáng)，已經(jīng)成為實(shí)驗(yàn)室對(duì)有害生物檢疫的重要手段。第四十八頁(yè)，共五十六頁(yè)。產(chǎn)地檢驗(yàn)與室內(nèi)(shìnèi)檢驗(yàn)的關(guān)系：（1）有些種子帶病無(wú)明顯癥狀，不能分離培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)室無(wú)法檢驗(yàn)，需產(chǎn)地檢驗(yàn)，尤其檢疫性病害（2）產(chǎn)地檢驗(yàn)主要靠肉眼，比較粗放（3）產(chǎn)地檢驗(yàn)現(xiàn)場(chǎng)即可確定留種用的種子，但種子在收獲、脫粒、加工、貯藏、轉(zhuǎn)運(yùn)等過(guò)程中，會(huì)將無(wú)病種子變成有病。第四十九頁(yè)，共五十六頁(yè)。種子病害檢驗(yàn)(jiǎnyàn)小結(jié)1一種病原生物的檢驗(yàn)可以用多種檢驗(yàn)方法；2一種檢驗(yàn)方法可以用作多種病原生物的檢驗(yàn)；3進(jìn)行病原生物檢驗(yàn)時(shí)多種檢驗(yàn)方法綜合利用，以便及時(shí)快速地得出準(zhǔn)確(zhǔnquè)的結(jié)論第五十頁(yè)，共五十六頁(yè)。真菌：肉眼，過(guò)篩，比重，解剖，洗滌，保濕萌芽，分離培養(yǎng)，整胚，接種，熒光反應(yīng)等細(xì)菌：解剖，保濕萌芽，分離培養(yǎng)，接種，化學(xué)染色，熒光反應(yīng)，噬菌體等病毒：保濕萌芽，接種，熒光反應(yīng)，血清學(xué)，電子顯微鏡觀察(guānchá)，分子雜交分析，PCR體外擴(kuò)增DNA等線蟲：肉眼，過(guò)篩，比重，解剖，洗滌，漏斗分離等寄生性種子植物：肉眼，過(guò)篩等第五十一頁(yè)，共五十六頁(yè)。3