抗體純化磁珠

北京索萊寶科技有限公司北京索萊寶科技有限公司第第1頁，共4頁抗體純化磁珠（BeadsMagroseProteinA/GAntibodyPurification）規(guī)格：20T保存：2-8℃，保質(zhì)期1年產(chǎn)品內(nèi)容：BeadsProteinA/GNHSProteinA/G90%的抗體。15minminProteinA，MagroseProteinG產(chǎn)品特性：產(chǎn)品名稱MagroseProteinAMagroseProteinG磁珠粒徑30~150μm30~150μm磁珠濃度10%（v/v）10%（v/v）配基ProteinAProteinG介質(zhì)MagroseMagrose抗體結(jié)合能力25~30mgHumanIgG/mLGel25~30mgHumanIgG/mLGel保存溫度2~8℃2~8℃Binding/WashingbufferPBST（pH7.2~7.4）:137mMNaCl，2.7mMKCl,10mMNa2HPO4,2.0mMKH2PO4,0.1%Tween-20Elutionbuffer100mMGly,0.1%Tween-20,pH2.5Neutrilizationbuffer1.0MTris-HCl,pH9.0StoragebufferPBST（含0.05%NaN3）適用范圍：適用于血漿、腹水、組織培養(yǎng)上清液等樣品中的抗體純化，也可用于抗體固定及其它相關(guān)研究。操作步驟(以純化人血清IgG為例)：1、樣品處理：取人血清100μL至1.5mLEP管中，接著加入900μLBinding/Washingbuffer，充分混勻。2、磁珠預(yù)處理：將抗體純化磁珠漩渦振蕩30s，使磁珠充分重懸；取200μL10%（v/v）磁珠懸液1.5mLEP1mLBinding/Washingbuffer洗滌2注意：該步驟磁珠的用量可根據(jù)磁珠對目標抗體的最大結(jié)合量進行調(diào)節(jié)，當目標抗體的濃度大于結(jié)合量），若目標抗體濃度過低，如低于70μg/mL時，客戶為了提高抗體回收率，可增加磁珠用量，如提高至3倍磁珠用量。3、抗體吸附：在步驟2預(yù)處理的磁珠管中加入步驟1處理的樣品溶液，漩渦振蕩均勻，在室溫下（約25℃）置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)EP管，促使樣品和磁珠充分接觸并吸附，翻轉(zhuǎn)約15min后進行磁性分離，移棄上清液。4、磁珠洗滌EP1mLBinding/Washingbuffer，振蕩重懸磁珠后進行磁性分離，移棄上清液；該操作重復(fù)35、抗體洗脫EP0.5~1.0mLElutionbuffer，用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然后在室溫下（25℃）EP10minEPElutionbuffer0.6~1.2mg/mL，此時1次洗脫條件中95%Elutionbuffer用量過少，會導(dǎo)致部分抗體在第1次洗脫時仍然留在磁珠上，從而導(dǎo)致抗體回收率降低。6、抗體中和：在步驟5抗體洗脫液中加入一定量的Neutrilizationbuffer，一般為抗體洗脫體積的1/10，最終使洗脫的抗體pH值保持中性環(huán)境，以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。7、磁珠后處理：使用后的磁珠用Elutionbuffer洗滌2次，磁性分離，棄上清液；接著用Binding/Washingbuffer3200μLStoragebuffer2~8℃保存。磁珠再生1、磁珠多次使用后會有沉淀蛋白、強疏水性蛋白、脂蛋白等雜質(zhì)非特異性吸附到磁珠上，為了保證磁珠的使用效率，建議持續(xù)使用5次后進行磁珠再生處理。2、按約每1mL10%（v/v）磁珠加入1mL1%（v/v）TrironX-100磁珠再生緩沖液，振蕩均勻，在室溫下置于翻轉(zhuǎn)混合儀或者手工輕輕翻轉(zhuǎn)混合，10min后進行磁性分離，棄上清液。3、立即加入1mLBinding/Washingbuffer進行重懸，然后磁性分離，棄上清液，重復(fù)該操作3次。4、加入1mLStoragebuffer重懸磁珠，置于2~8℃保存。注意事項1、進行抗體純化操作之前，請務(wù)必認真閱讀本操作說明書。2、本產(chǎn)品須與磁性分離器配套使用。3、磁珠使用前應(yīng)充分振蕩均勻。4、磁珠應(yīng)保存在儲存溶液中，防止干燥。5、請勿將磁珠冷凍或離心，以免引起不可逆聚集。6、本產(chǎn)品僅供研究使用。常見問題及解答(FAQ)Q1：如何提高抗體與磁珠結(jié)合效率?A1：磁珠與抗體的結(jié)合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關(guān)，請確認抗體的類型與ProteinA配基的親和效率（附表），如抗體所屬亞型與ProteinA的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間（30~120min）、提高結(jié)合緩沖液的pH值（8~9）及降低離子強度（25~100mMNaCl）等方法提高親和效率，或選擇與目標抗體具有更高親和度的配基（如ProteinG或ProteinA/G）。Q2：如何提高抗體洗脫效率？A2ProteinA配基親和度太高導(dǎo)致抗體洗脫效率低，可以通過降低洗脫緩沖液的pH值（1.9~2.5）（2~3MMgCl2）pH（Tris、HEPES）調(diào)節(jié)pH至中性。Q3：如何避免磁珠在儲存或使用過程中可能出現(xiàn)的聚集情況？A3：磁珠應(yīng)保存在2~8℃，使用時應(yīng)避免由于污染而導(dǎo)致的不可逆聚集，或因干燥而導(dǎo)致的聚集。磁珠在pH的洗脫緩沖液中發(fā)生聚集屬于正常現(xiàn)象，不影響磁珠的正常使用。在Binding/Washingbufferbuffer（NP-40Tween-20TritonX-100）pHBinding/WashingbufferElutionbuffer2min，即可使磁珠恢復(fù)均勻狀態(tài)，以上處理均不影響磁珠的抗體結(jié)合效率。Q4：如何解決磁珠易粘附管壁的現(xiàn)象？A4：建議使用低吸附率的耗材進行磁珠操作。另外，在緩沖液中添加0.01%~0