重慶市萬州分水中學高考生物第1章《基因工程》復習考點二基因工程操作步驟新人教版選修3

"重慶市萬州分水中學高考生物第1章《基因工程》復習考點二基因工程的操作步驟新人教版選修3"察看基因工程的操作過程，剖析每一步驟的操作程序①從基因文庫中獲取獲取目的基因—②利用PCR技術(shù)擴增③經(jīng)過化學方法人工合成①目的基因②啟動子(2)基因表達載體的建立—構(gòu)成③停止子④標記基因?qū)⒛康幕驅(qū)胧荏w細胞—方法①植物：農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)變法、基因槍法、花粉管通道法②動物：顯微注射技術(shù)③微生物：感覺態(tài)細胞法(4)目的基因的檢測與判定①利用DNA分子雜交技術(shù)檢測目的基因的有無②利用分子雜交技術(shù)檢測目的基因的轉(zhuǎn)錄③利用抗原—抗體雜交技術(shù)檢測目的基因的翻譯④利用個體生物學水平的判定檢測重組性狀的表達易錯警告基因工程操作的8個易錯點目的基因的插入位點不是任意的基因表達需要啟動子與停止子的調(diào)控，所以目的基因應插入到啟動子與停止子之間的部位?；蚬こ滩僮鬟^程中只有第三步(將目的基因?qū)胧荏w細胞)沒有堿基互補配對現(xiàn)象第一步存在逆轉(zhuǎn)錄法獲取DNA，第二步存在黏性尾端連結(jié)現(xiàn)象，第四步檢測存在分子水平雜交方法。原核生物作為受體細胞的長處：生殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少。一般狀況下，用同一種限制酶切割質(zhì)粒和含有目的基因的片段，但有時可用兩種限制酶分別切割質(zhì)粒和目的基因，這樣可防止質(zhì)粒和質(zhì)粒之間、目的基因和目的基因之間的連結(jié)。目的基因進入受體細胞內(nèi)，而且在受體細胞內(nèi)保持穩(wěn)固和表達的過程，稱為轉(zhuǎn)變。轉(zhuǎn)變的實質(zhì)是目的基因整合到受體細胞染色體基因組中。不熟習標記基因的種類和作用：標記基因的作用——挑選、檢測目的基因能否導入受體細胞，常有的有抗生素抗性基因、發(fā)光基因(表達產(chǎn)物為帶顏色的物質(zhì))等。對受體細胞模糊不清：受體細胞常用植物受精卵或體細胞(經(jīng)組織培育)、動物受精卵(一般不用體細胞)、微生物(大腸桿菌、酵母菌)等。要合成糖蛋白、有生物活性的胰島素則一定用真核生物酵母菌(需內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體的加工、分泌)；一般不用支原體，原由是它營寄生生活；必定不可以用哺乳動物成熟的紅細胞，原由是它無細胞核，不可以合成蛋白質(zhì)。(8)還應注意的問題有：①基因表達載體中，啟動子(DNA片段)≠開端密碼子(RNA)；停止子(DNA片段)≠停止密碼子(RNA)。②基因表達載體的建立是最核心、最重點的一步，在體外進行。3．以下相關(guān)基因工程操作的表達中，正確的選項是()A．用同種限制酶切割載體與目的基因可獲取同樣的黏性尾端B．以蛋白質(zhì)的氨基酸序列為依照合成的目的基因與原基因的堿基序列同樣C．檢測到受體細胞含有目的基因就標記著基因工程操作的成功D．用含抗生素抗性基因的質(zhì)粒作為載體是由于其抗性基因便于與外源基因連結(jié)答案A分析一種氨基酸能夠由多種密碼子控制，所以以蛋白質(zhì)的氨基酸序列為依照合成的目的基因與原基因往常不一樣；只有目的基因表達，使受體表現(xiàn)出目標性狀或獲取目標產(chǎn)物才標記著基因工程操作的成功；抗生素抗性基因作為標記基因，用于檢測目的基因能否導入受體細胞。4．浙江大學農(nóng)學院喻景權(quán)教講課題組研究發(fā)現(xiàn)，一栽種物激素——油菜素內(nèi)酯能促使農(nóng)藥在植物體內(nèi)的降解和代謝。用油菜素內(nèi)酯辦理后，很多參加農(nóng)藥降解的基因(如P450基因和紅霉素抗性基因)的表達和酶活性都獲取提升，在這些基因“指導”下合成的蛋白酶能把農(nóng)藥漸漸轉(zhuǎn)變?yōu)樗苄晕镔|(zhì)或低毒甚至無毒物質(zhì)，有的則被直接排出體外。某課題組進一步進行了以下的實驗操作，請回答以下問題：獲取油菜素內(nèi)酯合成酶基因的方法有____________________________________。步驟①用PCR技術(shù)擴增基因時用到的耐高溫酶往常是指______________________________；步驟②用到的酶有___________________________________________________________________________________________________________________________________。圖中導入重組質(zhì)粒的方法是____________，在導入以前應用一定濃度的__________________辦理受體細菌。導入重組質(zhì)粒2此后，常常還需要進行檢測和挑選，可用____________________制成探針，檢測能否導入了重組基因，在培養(yǎng)基中加入________________可將含有目的基因的細胞挑選出來。(4)請你為該課題命名：____________________________________________________。答案(1)從cDNA文庫中獲取、從基因組文庫中獲取、人工合成目的基因或PCR擴增技術(shù)(任選此中兩項即可)TaqDNA聚合酶限制酶和DNA連結(jié)酶轉(zhuǎn)變法氯化鈣溶液紅霉素抗性基因紅霉素研究油菜素內(nèi)酯可否促使土壤中農(nóng)藥的分解分析進行基因工程操作時，第一要獲取目的基因，其方法有多種：從cDNA文庫中獲取、從基因組文庫中獲取、人工合成目的基因或PCR擴增技術(shù)等。在建立基因表達載體的過程中，用到的工具酶有限制酶和DNA連結(jié)酶。圖中的受體細胞是細菌，故用轉(zhuǎn)變法導入基因表達載體，導入后，需查驗和挑選。從圖中能夠看出，最后是通過比較實驗來查驗轉(zhuǎn)基因細菌對土壤中殘留農(nóng)藥的分解能力。1．獲取目的基因(1)直接分別從基因組文庫中獲?。杭从孟拗泼高M行切割、分別從cDNA文庫中獲?。杭蠢胢RNA反轉(zhuǎn)錄形成利用PCR擴增技術(shù)：獲取大批目的基因人工化學合成：合用于分子較小的基因。2．基因表達載體的建立——基因工程的核心目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)固存在，而且能夠遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。(2)基因表達載體構(gòu)成目的基因啟動子：為RNA聚合酶辨別和聯(lián)合的部位，驅(qū)動轉(zhuǎn)錄mRNA停止子：使轉(zhuǎn)錄停止的一段有特別構(gòu)造的DNA短片段標記基因：為了鑒識受體細胞中能否含有目的基因建立過程3．將目的基因?qū)胧荏w細胞生物種類植物動物微生物常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)變法顯微注射技術(shù)感覺態(tài)細胞法受體細胞體細胞受精卵原核細胞將目的基因插入到Ti質(zhì)將含有目的基因的表達C