藥物分析第八章

藥物分析第八章第一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第一節(jié)無菌檢查無菌技術(shù)指在整個微生物檢驗過程中，控制微生物污染的一系列操作方法和措施。包括紫外可見分光光度法無菌實驗器材無菌環(huán)境無菌操作第二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日1、無菌環(huán)境（1）定義用各種方法控制實驗空間內(nèi)微生物數(shù)量，使其達(dá)到無菌要求。（2）凈化工作臺包括無菌實驗室無菌柜第三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日2、無菌實驗器材包括滅菌器材消毒器材玻璃器皿、接種針、注射器、試管、培養(yǎng)基等凳子。試管架、天平、工作臺、容器、工作人員手等第四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日一、概述1、概念指檢查藥典要求無菌藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料、及其它品種是否無菌的一種方法。2、檢查意義是藥品安全性檢查項目之一，保證人民用藥安全無菌檢查第五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日包括紫外可見分光光度法燒傷或嚴(yán)重創(chuàng)傷的軟膏劑與乳膏劑植入劑注射劑眼用制劑燒傷或創(chuàng)傷氣霧劑、噴霧劑、散劑3、范圍不得檢出細(xì)菌、放線菌、霉菌及酵母菌等活菌。第六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日包括需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基（硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基）選擇性培養(yǎng)基一、檢查前的準(zhǔn)備工作（一）培養(yǎng)基真菌培養(yǎng)基第七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日（一）相關(guān)規(guī)定1.檢驗數(shù)量一次試驗所用供試品最小包裝容器的數(shù)量2。檢驗量一次檢驗所用供試品總量三、供試品的檢查

第八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日3、陽性對照目的：是檢查陽性菌在加入供試品的培養(yǎng)基中能否生長,以驗證供試品有無抑菌活性物質(zhì)和試驗條件是否符合要求。4、陰性對照不得有菌生長第九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日包括直接接種法薄膜過濾法（二）檢查方法第十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日（一）直接接種法1、供試品制備液體試樣固體試樣青霉素類藥放射性藥試樣第十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日2、檢查操作取供試品接種→需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基6管陽性對照：金黃色葡萄球菌對照用菌液1ml另供試品接種→真菌培養(yǎng)基5管30～35℃20～25℃培養(yǎng)7天觀察記錄：是否有菌生長陽性對照管在24小時內(nèi)應(yīng)有菌生長

第十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日（二）薄膜過濾法1、濾器準(zhǔn)備全封閉過濾系統(tǒng)開放式薄膜過濾器第十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日2、過濾操作有抗菌供試品→0.9％NaCl→薄膜過濾無抗菌供試品→薄膜過濾陽性對照管：細(xì)菌：30～35℃培養(yǎng)24～48h真菌：20～25℃培養(yǎng)24～72h有菌生長第十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日四、無菌檢查結(jié)果判定1、若供試品均澄清或雖顯混濁，但經(jīng)證明無菌生長陽性對照管顯混濁有菌生長，陰性對照管澄清符合規(guī)定2.如供試品中任何1管顯混濁并確證有菌生長不符合規(guī)定第十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第二節(jié)藥品的微生物限度檢查一、概述1、定義系指非規(guī)定滅菌制劑及其原、輔料受到微生物污染程度的一種檢查方法。2、檢查意義是保證藥品有效性、安全性，保證藥品質(zhì)量的重要錯施。第十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日3、范圍包括常用口服制劑與一般外用制劑及其原、輔料。4、檢查內(nèi)容（1）染菌量檢查:細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)及酵母菌數(shù)測定（2）控制菌檢查：大腸桿菌、沙門菌、金黃色葡萄球菌及銅綠假單胞菌

5、限度標(biāo)準(zhǔn)不得撿出控制菌

第十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日5、試驗前的準(zhǔn)備1.開啟紫光燈和空氣過濾裝置，至少30min。檢查環(huán)境潔凈度10000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域進(jìn)行。2.人員穿戴無菌服，進(jìn)入無菌操作室。4.操作前乙醇棉球消毒→啟封→檢查瓶蓋、瓶口有無生霉、長螨第十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日二、供試液制備1、取樣隨機抽樣，一般為檢驗量的3倍量。每批供試品檢驗量一般為10g或10ml2、方法：稀釋處理

第十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日三、檢查法1、細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)通常以每g或每ml供試藥品作為計量單位

計數(shù)方法：平皿菌落計數(shù)法取系列稀釋的供試品接種在適宜的瓊脂平板培養(yǎng)基上，以適宜的溫度進(jìn)行培養(yǎng)，觀察肉眼可見的細(xì)菌霉菌及酵母菌菌落數(shù)第二十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日2、控制菌檢查（1）大腸桿菌檢查藥品中檢出大腸桿菌表明該藥受糞便污染，服用后有可能被腸道致病菌或寄生蟲卵等病原體感染

①原理利用目標(biāo)菌所共有的限定酶作用底物產(chǎn)生的分解產(chǎn)物具有顏色或熒光，以此作為指示系統(tǒng)來鑒定目標(biāo)菌第二十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日366nm紫外線下觀察左:供試品管中:陽性對照管右:MUG培養(yǎng)基本底對照管第二十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日3、結(jié)果判斷

MUGIndole結(jié)果陰性陰性報告未檢出大腸桿菌陽性陽性報告檢出大腸桿菌陽性陰性需要進(jìn)一步做檢查陰性陽性需要進(jìn)一步做檢查第二十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日

（2）銅綠假單胞菌檢查（綠膿桿菌）常見化膿性感染菌，可造成眼角膜潰瘍、失明，引起敗血癥等嚴(yán)重疾患

檢驗程序增菌→分離→純培養(yǎng)→革蘭染色鏡檢→生化實驗第二十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日

（3）金黃色葡萄球菌檢查（綠膿桿菌）致病力最強，能引起局部及全身化膿性炎癥，嚴(yán)重時可導(dǎo)致敗血癥

第二十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日驗證：計數(shù)方法的驗證

當(dāng)建立藥品的微生物限度檢查法時，應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法的驗證，以確認(rèn)所采用的方法適合于該藥品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)的測定。若藥品的組分或原檢驗條件發(fā)生改變可能影響檢驗結(jié)果時，計數(shù)方法應(yīng)重新驗證。

驗證時，按供試液的制備和細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)所規(guī)定的方法及下列要求進(jìn)行。對各試驗菌的回收率應(yīng)逐一進(jìn)行驗證。

第二十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日菌種

驗證試驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。

驗證方法

驗證試驗至少應(yīng)進(jìn)行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。

驗證試驗也可與供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)同時進(jìn)行。

第二十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日包括平皿法和薄膜過濾法。（一）細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)目的：檢測藥物在單位質(zhì)量或體積內(nèi)所存在的活菌數(shù)量，常用平皿法。驗證：驗證試驗至少應(yīng)進(jìn)行3次獨立的平行試驗，并分別計算各試驗菌每次試驗的回收率。

第二十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日（1）試驗組

平皿法計數(shù)時，取試驗可能用的最低稀釋級供試液1ml和50~100cfu試驗菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，按平皿法測定其菌數(shù)。薄膜過濾法計數(shù)時，取規(guī)定量試驗可能用的最低稀釋級供試液，過濾，沖洗，在最后一次的沖洗液中加入50~100cfu試驗菌，過慮，按薄膜過濾法測定其菌數(shù)。

第二十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日（2）菌液組

測定所加的試驗菌數(shù)。（3）供試品對照組

取規(guī)定量供試液，按菌落計數(shù)方法測定供試品本底菌數(shù)。（4）稀釋劑對照組

若供試液制備需要分散、乳化、中和、離心或薄膜過濾等特殊處理時，應(yīng)增加稀釋劑對照組，以考察供試液制備過程中微生物受影響的程度。試驗時，可用相應(yīng)的稀釋液替代供試品，加入試驗菌，使最終菌濃度為每1ml供試液含50~100cfu，按試驗組的供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)。第三十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日結(jié)果判斷

在3次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率（稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）應(yīng)均不低于70%。若試驗組的菌回收率（試驗組的平均菌落數(shù)減去供試品對照組的平均菌落數(shù)的值占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）均不低于70%，照該供試液制備方法和計數(shù)法測定供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)；若任一次試驗中試驗組的菌回收率低于70%，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗證。第三十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日操作要點：1.一個細(xì)菌、霉菌或酵母菌的菌落均可由一個或多個菌細(xì)胞生長繁殖而成，因此供試品中所測得的菌落數(shù)，實際為菌落形成單位數(shù)（cfu）2.供試品檢驗的全過程必須符合無菌技術(shù)要求。3.培養(yǎng)基、稀釋劑、實驗器具等的滅菌，按滅菌法的要求采用驗證合格的滅菌程序滅菌。4.作供試品稀釋時，每一稀釋級都要更換吸管。5.細(xì)菌培養(yǎng)48h，真菌培養(yǎng)72h，計數(shù)。如菌落極小，不易辨認(rèn)可適當(dāng)延長培養(yǎng)時間。再點計菌落數(shù)。第三十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日6.含蜂蜜、王漿的液體制劑，用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基測定霉菌數(shù)，用酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基測定酵菌數(shù)，并且合并計數(shù)。7.若同一稀釋級兩個平板的菌落平均數(shù)不小于15，則兩個平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。8.使用滅菌吸管時，管尖不要接觸可能污染的任何容器或用具。9.供試液稀釋及注皿時應(yīng)振搖后取均勻的供試液，以免造成實驗誤差。第三十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日10.培養(yǎng)基的分裝量不得超過容器的2/3以免滅菌時溢出。包裝時，塞子必須塞緊，以免松動或脫落造成染菌。11.培養(yǎng)基配制后應(yīng)在2h內(nèi)滅菌，避免細(xì)菌繁殖。12.滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2-25℃防止被污染，可在三周內(nèi)用畢。13.已溶化的培養(yǎng)基應(yīng)一次用完，一般開啟后不宜再用，更不要反復(fù)加熱溶化。第三十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日14.注皿時培養(yǎng)基應(yīng)在45±1℃，高于45℃時易造成細(xì)菌受損或致死，低于45℃時易凝固，影響混勻，因此使用前可用水浴保溫效果較好。15.傾注培養(yǎng)基于平皿中與樣品搖勻時，切勿濺到皿蓋邊和皿蓋上，以免影響實驗結(jié)果。第三十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日16.采用薄膜過濾法時，水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100ml，沖洗液、沖洗量及沖洗方法同方法驗證試驗。每片濾膜的總過濾量不宜過大，以避免濾膜上的微生物受損傷。第三十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日17.每張濾膜取相當(dāng)于1g或1ml供試品的供試液直接過濾或加至適量稀釋劑中混勻，過濾，用適宜的沖洗液沖洗濾膜，沖洗方法及沖洗量同“計數(shù)方法的驗證”，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基至少制備一張濾膜，濾膜貼于平板上時不得有空隙或氣泡，否則影響微生物生長。

第三十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日

18.菌落數(shù)在100以內(nèi)時按實有數(shù)據(jù)報告。菌落數(shù)大于100時，取兩位有效數(shù)字報告，第三位按數(shù)字修約規(guī)則處理。第三十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第三節(jié)抗生素效價的微生物測定法抗生素微生物檢定法是國際上通用的、經(jīng)典的抗生素效價測定方法。自20世紀(jì)40年代建立至今，在各國藥典中被普遍采用。雖然伴隨著HPLC等化學(xué)分析技術(shù)的發(fā)展，一些抗生素品種的效價測定已被化學(xué)方法所取代，但由于以下原因：第三十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日微生物檢定法可直觀、特異地反映出抗生素藥品的抗菌活性；多組分抗生素由于不同活性組分生物活性的差異，化學(xué)測定結(jié)果難以準(zhǔn)確表征組分組成、含量和生物活性間的關(guān)系；許多抗生素品種由于各種原因目前沒有適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)分析方法表征其活性。

所以抗生素微生物檢定法目前在各國藥典中仍占有重要地位，且短期內(nèi)化學(xué)分析法不可能取代微生物檢定法。第四十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日

一、概述物理、化學(xué)方法：簡便、快速，本身純度不高，采用該法會引起偏差，因此，只有在純度較高時才用此法。微生物法：原理和臨床應(yīng)用的相一致，直接反映出抗生素的療效，且靈敏度較高，需用量較小，廣泛應(yīng)用。第四十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日1.定義－抗生素效價定義“活性”重量單位：以抗生素中所含特定的抗菌（抗腫瘤細(xì)胞、抗病毒）活性部分的重量作為效價單位。如堿性抗生素，以純堿的量作為有效部分的量；酸性抗生素，以純酸的量作為有效部分的量。第四十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日在抗生素的生產(chǎn)、研究和應(yīng)用等方面，均以抗生素活性成分的“活性”重量計量抗生素的效價單位，采用活性成分的“活性”重量1μg＝1效價單位的方法表示?？股匦r以“單位（u）”或“微克（μg）”表示。

第四十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日例：硫酸鏈霉素抗菌活性是以鏈霉素效價單位表示的，其鏈霉素的效價單位是以具活性成分鏈霉素堿的“活性”重量表示的，即1鏈霉素效價單位＝1微克鏈霉素堿，這里是“活性微克”而不是“重量微克”。第四十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日在制成鹽類或其他衍生物后，其相應(yīng)的折算效價，可以從分子量折算而得。如：硫酸鏈霉素的折算效價為第四十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日重量折算單位：以特定的純抗生素制品的某一重量為1單位而加以折算。如：青霉素G鈉以青霉素單位也稱牛津單位（Oxfordunit）表示其抗菌活性，最初的定義為“1個青霉素效價單位（u）為能在50毫升肉湯培養(yǎng)基中完全抑制金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株發(fā)育的最小青霉素劑量”。第四十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日抗生素微生物檢定法可分為：（1）稀釋法（2）比濁法（3）瓊脂擴(kuò)散法（管碟法和打孔法）各國藥典通常采用后兩種方法測定抗生素的效價。

第四十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日1.定義－稀釋法通過監(jiān)測等量的試驗菌菌液在不同濃度的抗生素液體培養(yǎng)基中的生長情況，觀察含不同濃度抗生素的液體培養(yǎng)基中有無細(xì)菌的生長，從而測定抗生素最低抑菌濃度（MIC）的方法，常用于新藥研制及臨床藥敏試驗等方面。

第四十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日1.定義－比濁法通過監(jiān)測等量的試驗菌菌液在不同濃度的抗生素液體培養(yǎng)基中的生長情況，利用分光光度法測定含不同濃度的抗生素的液體培養(yǎng)基的濁度，從而衡量抗生素抑菌效力的方法，可用于抗生素藥物的含量（效價）測定。

第四十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日1.定義－（瓊脂）擴(kuò)散法通過測定由不同濃度的抗生素溶液在含有試驗菌固體培養(yǎng)基中的擴(kuò)散，而在其表面所產(chǎn)生的抑菌圈的大小，衡量抗生素抑菌效力的方法，多用于抗生素藥物的含量（效價）測定。第五十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日抗生素微生物檢定方法比較：

第五十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日定義－管碟法

此法系根據(jù)抗生素在一定濃度范圍內(nèi)，對數(shù)劑量與抑菌圈直徑（面積）呈直線關(guān)系而設(shè)計，通過檢測抗生素對微生物的抑制作用，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品產(chǎn)生抑菌圈的大小，計算出供試品的效價。

第五十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日2.原理－抑菌圈的形成兩種互動作用：一種是抗生素溶液向培養(yǎng)基內(nèi)呈球面狀擴(kuò)散作用；另一種是試驗菌的生長作用。當(dāng)培養(yǎng)到一定時間，瓊脂培養(yǎng)基中的兩種互動作用達(dá)到動態(tài)平衡時，瓊脂培養(yǎng)基中便形成透明的抑菌圈。即：在抑菌圈中因抗生素濃度高于抑菌濃度，試驗菌生長受到抑制，此處瓊脂培養(yǎng)基成透明狀；在抑菌圈邊緣抗生素濃度恰好等于抗生素最低抑菌濃度。第五十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日2.原理－量反應(yīng)平行線原理量反應(yīng)平行線原理：“在屬量反應(yīng)的指標(biāo)中，當(dāng)對數(shù)劑量和反應(yīng)呈直線關(guān)系，且供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的作用性質(zhì)相同時，供試品和標(biāo)準(zhǔn)品的兩條對數(shù)劑量和反應(yīng)關(guān)系直線相互平行”。第五十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日2.原理－量反應(yīng)平行線原理在抗生素微生物檢定法中，一定劑量范圍內(nèi)，抗生素對數(shù)劑量與其所致抑菌圈的大小呈直線關(guān)系。這就在理論上決定了，（活性）成分相同的標(biāo)準(zhǔn)品與供試品在一定劑量范圍內(nèi)產(chǎn)生的兩條劑量反應(yīng)直線相互平行，符合量反應(yīng)平行線原理的基本要求。第五十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日3.檢定方法分類一劑量法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法）二劑量法（2?2法）三劑量法（3?3法）第五十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日二劑量法（2?2法）：用標(biāo)準(zhǔn)品、供試品各兩個劑量，根據(jù)量反應(yīng)平行線原理，在相同試驗條件下，比較標(biāo)準(zhǔn)品和供試品二者對微生物產(chǎn)生的效力。二劑量法用于抗生素藥品效價的常規(guī)測定；3.1管碟法的操作步驟第五十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日3.1管碟法的操作步驟

預(yù)試驗→試驗準(zhǔn)備→雙碟底層的制備→供試品、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備→菌層的制備→滴加抗生素溶液→雙碟的培養(yǎng)→抑菌圈的測量→結(jié)果的可靠性檢驗及效價測定第五十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日預(yù)試驗：確定最佳的試驗條件：調(diào)整試驗菌的濃度、使用量、抗生素終濃度、培養(yǎng)基等，使抑菌圈的大小符合規(guī)定：高劑量濃度溶液所致的抑菌圈直徑在18～22mm。高劑量與低劑量的抑菌圈直徑之差最好不小于2mm。高低劑量之比為2:1（如高、低劑量所致的抑菌圈差別較小時，可用4:1的劑量比率）。第五十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日試驗準(zhǔn)備：雙碟、鋼管、毛細(xì)滴管、吸管的清洗及滅菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培養(yǎng)基、緩沖液的準(zhǔn)備、半無菌間的紫外消毒等。第六十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日雙碟底層的制備：每只雙碟加底層培養(yǎng)基約20ml，待培養(yǎng)基凝固，待用。第六十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日供試品、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：估計供試品的效價，根據(jù)試驗要求設(shè)計供試品、標(biāo)準(zhǔn)品溶液稀釋步驟，平行制備供試品、標(biāo)準(zhǔn)品相關(guān)劑量的溶液。第六十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日菌層的制備：菌層培養(yǎng)基：在培養(yǎng)基中添加一定量的菌懸液，振搖混勻。注意菌層培養(yǎng)基溫度；根據(jù)預(yù)試驗確定加入菌層培養(yǎng)基的菌液量。每只雙碟加入5ml菌層培養(yǎng)基。注意制備菌層的速度和平整度。第六十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日滴加抗生素溶液：注意標(biāo)準(zhǔn)品、供試品高、低劑量溶液滴加順序，保證滴加速度和加量的均勻一致。每組雙碟至少為8個，一般為10個。在每個雙碟的4個鋼管中，對角的兩個鋼管分別滴加高濃度和低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其余兩個對角位置的鋼管分別滴加相應(yīng)的高、低濃度的供試品溶液。第六十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日雙碟的培養(yǎng)：根據(jù)培養(yǎng)溫度的要求在培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)箱中水平疊放的雙碟數(shù)以不超過三層為宜。第六十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日抑菌圈的測量：

將培養(yǎng)好的雙碟取出，打開陶瓦蓋，將鋼管倒入1：1000新潔爾滅溶液或其他消毒液內(nèi)浸泡，檢查抑菌圈是否圓整，如有破圈或不圓整圈應(yīng)將碟棄去，切忌主觀挑選抑菌圈和雙碟，是結(jié)果造成偏離。抑菌圈測量儀的使用：每組試驗雙碟應(yīng)在相同的測量參數(shù)下進(jìn)行測量。手工測量：游標(biāo)卡尺第六十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日結(jié)果的可靠性檢驗及效價測定：抑菌圈測量儀提供計算結(jié)果或手工計算結(jié)果。第六十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日結(jié)果計算及判斷可靠性檢驗抗生素微生物檢定法前提條件是：標(biāo)準(zhǔn)品S和供試品T各對數(shù)劑量與反應(yīng)呈直線關(guān)系，且標(biāo)準(zhǔn)品S和供試品T的兩條直線平行。可靠性測驗是利用生物統(tǒng)計方法驗證標(biāo)準(zhǔn)品和供試品的量反應(yīng)關(guān)系是否顯著偏離直線、偏離平行。對在一定概率水平下不顯著偏離直線、不顯著偏離平行的實驗結(jié)果，認(rèn)為可靠，所得檢定結(jié)果有意義。

第六十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日重試判定抑菌圈大小的要求可靠性檢驗：符合可靠性檢驗各項規(guī)定后，才能認(rèn)為試驗結(jié)果可靠，方可進(jìn)行效價和可信限率計算?？尚畔蘼剩汗┰嚻沸r測定結(jié)果（PT）的可信限率除特殊規(guī)定外，不得大于5%。實測效價與估計效價：試驗計算所得效價應(yīng)在估計效價的±10%以內(nèi)，即：試驗所得效價低于估計效價的90%或高于估計效價的110%，則檢驗結(jié)果僅作為初試，應(yīng)調(diào)整供試品估計效價，予以重試。效價測定結(jié)果不符合規(guī)定時，需換人加倍復(fù)試。

第六十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日三劑量法（3?3法）：用標(biāo)準(zhǔn)品、供試品各三個劑量，根據(jù)量反應(yīng)平行線原理，在相同試驗條件下，比較標(biāo)準(zhǔn)品和供試品二者對微生物產(chǎn)生的效力。三劑量法用于抗生素藥品的仲裁或標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)定。第七十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日基本要點中劑量點的抑菌圈直徑應(yīng)在15～18mm。三個劑量之比為1:0.8（1.25:1）。點樣每組雙碟至少為9個，一般為15個。在每個雙碟的6個鋼管中，互相間隔的3個鋼管分別滴加高、中、低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，其余3個鋼管內(nèi)分別滴加相應(yīng)的高、中、低濃度的供試品溶液。按SH→TH→SM→TM→SL→TL或TH→SH→TM→SM→TL→SL順序，分別滴加標(biāo)準(zhǔn)品和供試品高、中、低劑量溶液。第七十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日三劑量法雙碟、鋼管與抑菌圈位置圖S3：標(biāo)準(zhǔn)品高劑量S2：標(biāo)準(zhǔn)品中劑量S1：標(biāo)準(zhǔn)品低劑量T3：供試品高劑量T2：供試品中劑量T1：供試品低劑量第七十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日抑菌圈的測量雙碟在規(guī)定溫度下培養(yǎng)一定時間后，采用抑菌圈測量儀測量每組試驗雙碟抑菌圈的直徑。結(jié)果計算及可靠性檢驗第七十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日管碟法特點

優(yōu)點：基本操作和設(shè)計適用于各種抗生素，試驗結(jié)果較穩(wěn)定；樣品用量少，靈敏度高；適合于大批樣品的測定。第七十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日缺點:凡具有抗菌活性的物質(zhì)都會干擾測定結(jié)果；試驗過程長，需第二天才有結(jié)果；操作手工化，需熟練人員才能得到較正確的結(jié)果；受擴(kuò)散因素的影響，如培養(yǎng)基原材料的質(zhì)量，一般瓊脂中的雜質(zhì)可能影響擴(kuò)散速度及效價強度。第七十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日0個（cp2000)

1個（cp2005）22個（cp2010)比濁法第七十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日濁度法：是利用抗生素在液體培養(yǎng)基中對試驗菌生長的抑制的作用，通過測定培養(yǎng)后細(xì)菌濁度值的大小，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品對試驗菌生長抑制的程度，以測定供試品效價的一種方法。第七十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日基本原理：細(xì)菌接種于澄清的營養(yǎng)豐富的液體培養(yǎng)基中，在一定的溫度下培養(yǎng)一段時間，變渾濁，其渾濁程度與細(xì)菌數(shù)的增加、細(xì)菌群體質(zhì)量的增加和細(xì)菌群體細(xì)胞容積的增大之間存在著直接的關(guān)系。當(dāng)一定的光束照射其已經(jīng)渾濁的液體培養(yǎng)基時，通過測定其透過率就知道細(xì)菌生長情況，在一定的抗生素濃度范圍內(nèi)，劑量響應(yīng)為一直線。因此，在劑量響應(yīng)曲線的直線范圍內(nèi)，可設(shè)計比濁法測定抗生素含量。第七十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日比濁法的操作步驟：

預(yù)試驗→試驗準(zhǔn)備→供試品、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備→菌液培養(yǎng)基的制備→加抗生素溶液→比色管的培養(yǎng)→菌濃度的測量→結(jié)果的可靠性檢驗及效價測定第七十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日預(yù)試驗：確定最佳的試驗條件：調(diào)整試驗菌的濃度、使用量、抗生素終濃度、培養(yǎng)基等，使高、低劑量濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液所致的菌液濃度的吸收值在0.3~0.7范圍；高、低劑量濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液所致的菌液濃度的吸收值的差值大于0.1為佳。第八十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日試驗準(zhǔn)備：比色管、攪拌轉(zhuǎn)子、塞子的清洗及滅菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培養(yǎng)基、緩沖液的準(zhǔn)備、半無菌間的紫外消毒等。

第八十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日供試品、標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：估計供試品的效價，根據(jù)試驗要求設(shè)計供試品、標(biāo)準(zhǔn)品溶液稀釋步驟，平行制備供試品、標(biāo)準(zhǔn)品相關(guān)劑量的溶液。第八十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日菌液培養(yǎng)基的制備：根據(jù)預(yù)試驗確定加入液體培養(yǎng)基的菌液量，注意制備菌液與培養(yǎng)基充分混勻。加抗生素溶液：在比色管中定量加入抗生素溶液后，再定量加入菌液培養(yǎng)基，混勻后，在規(guī)定溫度培養(yǎng).第八十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日菌濃度的測量：在530nm或其他波長(580nm)處測定各比色管的菌液濃度，注意測定時間的一致性。結(jié)果的可靠性檢驗及效價結(jié)果第八十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日注意事項：加菌量的影響：加菌量的多少（0.25%、0.5%、1.0%），影響培養(yǎng)至適宜的菌液測定濃度所用的時間，加菌量過少，則測定時可利用的濃度范圍窄。各抗生素各濃度之間的吸收度的差值在0.1以上為佳，此時菌液對不同濃度的抗生素敏感，測定誤差較低。第八十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日比色池的清潔：測定用的比色管需用硝酸－硫酸（5：95）浸泡并用蒸餾水沖洗干凈，不要有污漬和劃痕，與分光光度計的試管要匹配，要清除抗生素殘留和清洗液的痕跡，除去纖維等雜質(zhì)。第八十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日時間的一致性：主要是使每管的培養(yǎng)時間相等，實驗時在試管中加入含試驗菌液的培養(yǎng)基后，應(yīng)立即加入標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液，混合均勻。必要時可先將培養(yǎng)基冷卻至2～4℃左右，再接種菌種，并在此溫度下，將含菌培養(yǎng)基加至各試管中，可避免加注試管先后的誤差。培養(yǎng)終止時將各管同時放入冰浴中，并盡快加入甲醛溶液滅活，使各試驗管的培養(yǎng)時間一致。

第八十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日培養(yǎng)溫度控制：溫度的均勻性直接影響試驗菌的生長速率。美國藥典28版中對管碟法的培養(yǎng)溫度要求為±0.5％，而比濁法的溫度要求±0.1％，更為嚴(yán)格。一般恒溫水浴的各部位仍有差異，應(yīng)有攪拌裝置，使培養(yǎng)溫度均勻。培養(yǎng)管的材質(zhì)和管壁的厚度及體積大小應(yīng)均勻一致，若厚薄不均可能影響溫度的傳導(dǎo)，使培養(yǎng)溫度不均一。在水浴中供試品溶液和標(biāo)準(zhǔn)品溶液的放置位置最好按隨機區(qū)組分配，以抵消溫度的差異。第八十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日菌液需新鮮配制：當(dāng)天使用，若放在冰箱放置一段時間后再使用，所測定的數(shù)據(jù)不穩(wěn)定，誤差大（金葡）。因為菌液在放置一段時間后，細(xì)菌老化死亡，但測定的吸收值不變，從而影響試驗時活菌的量，使結(jié)果產(chǎn)出偏差。注意菌種使用不超過5代。

第八十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日比濁法的特點：優(yōu)點：與管碟法比較，比濁法具有快速，試驗過程3～4小時，加上其他操作，可在當(dāng)天獲得結(jié)果；采用液體培養(yǎng)基，無擴(kuò)散因素的影響，試驗的靈敏度高，結(jié)果的精密度和正確度都較瓊脂擴(kuò)散法好。第九十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日缺點：對試驗儀器的性能及試驗器具的要求較高，如培養(yǎng)溫度要求一致，比色管的清潔等。任何影響液體培養(yǎng)基內(nèi)微生物生長的因素都會影響抗生素效價的測定。第九十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第四節(jié)生化藥物效價的生物測定法防病治病的三大藥源：化學(xué)藥物生化藥物生物藥物生物技術(shù)藥物生物制品中藥第九十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日生物藥物：利用生物體、生物組織或器官等成分，綜合運用生物學(xué)、生物化學(xué)、微生物學(xué)、免疫學(xué)、物理化學(xué)和藥學(xué)的原理和方法制備的一大類藥物。包括：生化藥物、生物合成藥物、生物制品。第九十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日生化藥物：動植物及微生物提取、分離的天然生物活性物質(zhì)及半合成得到生命基本物質(zhì)及其衍生物等。

應(yīng)用前景：方便臨床應(yīng)用；彌補某些藥物的市場空缺；有利于臨床治療；有利于人體健康，前景非常廣闊。第九十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日種類：1.氨基酸、多肽與蛋白質(zhì)類；2.藥用酶類和輔酶類；3.多糖類；4.脂質(zhì)類；5.核酸及其降解物和衍生物類藥物。第九十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日常見的生化藥物：復(fù)合氨基酸、腦多肽、牛纖維蛋白原、水蛭素、生長素、催乳素、天花粉蛋白、輔酶Q10、蛋白水解酶、凝血酶、肝素、硫酸軟骨素A、靈芝多糖、透明質(zhì)酸、黃芪多糖、人參多糖、膽酸類、RNA、DNA、ATP、5-氟尿嘧啶、6-巰基嘌呤、阿糖腺苷、環(huán)胞苷等。第九十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日生化藥物的特點：1.分子量大，不是定值。肝素（抗凝血）12000～15000（未分級）低分子肝素（抗血栓）﹤8000（低分子量）右旋糖苷7064000～76000不定值第九十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日2.結(jié)構(gòu)確認(rèn)難，需采用生化法確認(rèn)（氨基酸序列分析、肽圖）例：重組人粒細(xì)胞刺激因子注射液（Ch·P）原液檢定：肽圖：至少每半年檢定一次N-末端氨基酸序列：至少每年檢定一次第九十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日3.需檢查生物活性例：細(xì)胞色素C溶液【檢查】活力照細(xì)胞色素C活力測定法測定，不得低于95.0%。尿激酶【檢查】凝血質(zhì)樣活性物質(zhì)凝血質(zhì)樣活性為零值時的供試品酶活力，按每1ml中供試品的單位表示，每1ml應(yīng)大于150單位。

第九十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日4.要求檢查安全性5.需做效價的測定例：肝素鈉【效價測定】照肝素生物測定法測定，應(yīng)符合規(guī)定，測得的結(jié)果應(yīng)為標(biāo)示量的91.0%～110.0%檢定用的生物體：新鮮兔血或兔、豬血漿。第一百頁，共一百三十頁，2022年，8月28日第五節(jié)安全性檢查雜質(zhì)來源：原料藥（包括制備中間體、副反應(yīng)產(chǎn)物等）輔料及試劑生產(chǎn)工藝降解產(chǎn)物雜質(zhì)特點：化學(xué)結(jié)構(gòu)不清楚

沒有合適的理化檢測方法

對生物體可產(chǎn)生特殊的生理作用影響到用藥的安全第一百零一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日一、安全性檢查項目包括：細(xì)菌內(nèi)毒素檢查熱原檢查異常毒性檢查升壓與降壓物質(zhì)檢查過敏反應(yīng)檢查溶血與凝聚試驗?zāi)康模?/p>

控制藥品中存在的、可對生物體產(chǎn)生特殊的生理作用并影響到用藥安全的某些痕量雜質(zhì)。第一百零二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日異常毒性檢查一、方法系將一定劑量的供試品溶液注入小鼠體內(nèi)或口服給藥,在規(guī)定的時間內(nèi)觀察小鼠出現(xiàn)的死亡情況,以判定供試品是否符合規(guī)定的一種方法。異常毒性是檢查藥品在生產(chǎn)制造過程中外來引入的異物或藥物降解產(chǎn)生的不正常毒性反應(yīng)，主要與生產(chǎn)工藝水平有關(guān)，而不是檢查藥物本身毒性。第一百零三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日二、適用品種生化藥注射劑(如肽、蛋白質(zhì)、酶及輔酶、多糖、脂質(zhì)等)及抗生素類注射劑；某些中藥注射劑；在藥品生產(chǎn)工藝進(jìn)行較大改變后，特別是改變提煉、精制工藝時，需要在生產(chǎn)過程中追蹤檢查各工藝段的半成品及成品的毒性試驗。第一百零四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日三、相關(guān)進(jìn)展目前異常毒性檢查法僅中國藥典和英國藥典有收載；國外藥典中，對大多數(shù)生物提取的生化藥或由現(xiàn)代生物技術(shù)得到的組份單一、結(jié)構(gòu)明確的產(chǎn)品,一般不設(shè)定異常毒性檢查項；WHO生物測定專家委員會在1997年曾開會討論異常毒性檢查的必要性問題，認(rèn)為其缺乏專屬性和科學(xué)性，在實施GMP條件下生產(chǎn)的藥品應(yīng)當(dāng)取消該項檢查。第一百零五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日供試用的小鼠應(yīng)健康合格，體重17～20g在試驗前及試驗的觀察期內(nèi)，均應(yīng)按正常飼養(yǎng)。做過本試驗的小鼠不得重復(fù)使用。供試品溶液的制備除另有規(guī)定外，用氯化鈉注射液按個品種項下規(guī)定的濃度制成供試品溶液。檢查法除另有規(guī)定外，取小鼠5只，按各該藥品項下規(guī)定的給藥途徑，每只小鼠分別給予供試品0.5ml。給藥途徑有以下幾種：靜脈注射將供試品溶液注入小鼠尾靜脈，應(yīng)在4～5秒內(nèi)勻速注射完畢。規(guī)定緩慢注射品種可延長至30秒。第一百零六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日腹腔注射將供試品溶液注入小鼠腹腔。皮下注射將供試品溶液注入小鼠腹部或背部兩側(cè)皮下?？诜o藥將供試品溶液通過適宜的導(dǎo)管，灌入小鼠胃中。結(jié)果判斷除另有規(guī)定外，5只小鼠在給藥后48h內(nèi)不得死亡。如有死亡，應(yīng)另取體重18～19g小鼠10只復(fù)試，全部小鼠在48小時內(nèi)不得有死亡。第一百零七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日細(xì)菌內(nèi)毒素檢查一、方法：

系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。在GMP條件下，無內(nèi)毒素即無熱原，控制內(nèi)毒素就是控制熱原，這是用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替熱原檢查法的依據(jù)。第一百零八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日二、適用品種：制劑：靜脈注射、鞘內(nèi)注射原料：無菌分裝原料靜脈注射用的抗生素類原料不可滅菌制劑的原料（如生化藥品、生物制品）制備分裝過程無法控制內(nèi)毒素的注射劑的原料第一百零九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日因此，細(xì)菌內(nèi)毒素廣泛存在于自然界中。如自來水中含內(nèi)毒素的量為1至100EU/ml。當(dāng)內(nèi)毒素通過消化道進(jìn)入人體時并不產(chǎn)生危害，但內(nèi)毒素通過注射等方式進(jìn)入血液時則會引起不同的疾病。內(nèi)毒素小量入血后被肝臟枯細(xì)胞滅活，不造成機體損害。內(nèi)毒素大量進(jìn)入血液就會引起發(fā)熱反應(yīng)—“熱原反應(yīng)”。因此，生物制品類、注射用藥劑、化學(xué)藥品類、放射性藥物、抗生素類、疫苗類、透析液等制劑以及醫(yī)療器材類（如一次性注射器，植入性生物材料）必須經(jīng)過細(xì)菌內(nèi)毒素檢測試驗合格后才能使用。第一百一十頁，共一百三十頁，2022年，8月28日2005年版中國藥典規(guī)定168個品種進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，并收錄了2種細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法：包括凝膠法和光度測定法兩種方法。凝膠法利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來定性檢測或半定量內(nèi)毒素。第一百一十一頁，共一百三十頁，2022年，8月28日光度測定法包括濁度法和顯色基質(zhì)（比色）法，系分別利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化及產(chǎn)生的凝固酶使特定底物釋放出呈色團(tuán)的多少來定量測定內(nèi)毒素。比色法又可分為終點顯色法和動態(tài)比色法。檢查時，可使用任何一種方法進(jìn)行試驗，當(dāng)測定結(jié)果有爭議時，一般以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)。第一百一十二頁，共一百三十頁，2022年，8月28日熱原檢查一、方法系將一定劑量的供試品溶液,靜脈注射家兔體內(nèi),在規(guī)定的時間內(nèi),觀察家兔體溫升高的情況,以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。熱原檢查是一種限度試驗，反映了熱原質(zhì)引起哺乳動物復(fù)雜的升溫反應(yīng)過程，具有直觀、代表性好的優(yōu)點，是一種成熟方法，各國藥典均有收載。第一百一十三頁，共一百三十頁，2022年，8月28日二、適用品種

主要用于生物制品、抗生素、生化藥品類注射劑及在生產(chǎn)過程中容易被微生物污染或適宜微生物繁殖化學(xué)藥品的注射劑；做靜脈注射的注射液，尤其是劑量較大的靜脈滴注藥，更要注意熱原檢查。某些抗生素、抗腫瘤藥品、放射性藥品等影響家兔正常體溫,因此不適宜采用熱原檢查法。目前存在著細(xì)菌內(nèi)毒素檢查逐步替代熱原檢查的趨勢。第一百一十四頁，共一百三十頁，2022年，8月28日三、熱原檢查熱原通常是磷脂多醇與蛋白質(zhì)結(jié)合而成的復(fù)合物。磷脂多醇是復(fù)合物的活性中心，致熱作用最強。是能夠致熱的微生物的尸體及其代謝產(chǎn)物，即細(xì)菌的一種內(nèi)毒素。細(xì)菌、霉菌、病毒均可產(chǎn)生熱原。熱原最主要特性為耐熱性，其為由磷脂、脂多糖和蛋白質(zhì)所組成的復(fù)合物，存在于細(xì)菌的細(xì)胞和固體膜之間。第一百一十五頁，共一百三十頁，2022年，8月28日脂多糖是內(nèi)毒素的主要成分，具很強的熱原活性。熱原具耐熱性、濾過性、水溶性、不揮發(fā)性、被吸附性。當(dāng)熱原被輸入人體后，約0.5h后，使人發(fā)冷寒戰(zhàn)、高熱、出汗、惡心、嘔吐、昏迷甚至危及生命，可于注射劑滅菌時根據(jù)其特性徹底破壞熱原。

第一百一十六頁，共一百三十頁，2022年，8月28日注入人體的注射劑中含有熱原量達(dá)1μg/kg就可引起不良反應(yīng)，發(fā)熱反應(yīng)通常在注入1小時后出現(xiàn)，可使人體產(chǎn)生發(fā)冷、寒顫、發(fā)熱、出汗、惡心、嘔吐等癥狀，有時體溫可升至40℃以上，嚴(yán)重者甚至昏迷、虛脫，如不及時搶救，可危及生命。該現(xiàn)象稱為“熱原反應(yīng)”。

第一百一十七頁，共一百三十頁，2022年，8月28日《中國藥典》2005年版規(guī)定熱原檢查采用家兔法，由于家兔對熱原的反應(yīng)與人基本相似，所以用家兔來檢測熱原，為保障藥品質(zhì)量和用藥安全發(fā)揮了重要作用。本法系將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時間內(nèi)，觀察家兔體溫升高的情況，以判定供試品中所含熱原的限度是否符合規(guī)定。

第一百一十八頁，共一百三十頁，2022年，8月28日供試用的家兔應(yīng)健康無傷，體重1.7～3.0kg，雌兔應(yīng)無孕。預(yù)測體溫前7日即應(yīng)用同一飼料飼養(yǎng),在此期間內(nèi)，體重應(yīng)不減輕，精神、食欲、排泄等不得有異?，F(xiàn)象。每一家兔的使用次數(shù)，用于一般藥品的檢查，不應(yīng)超過10次。

第一百一十九頁，共一百三十頁，2022年，8月28日試驗前的準(zhǔn)備

在作熱原檢查前1～2日，供試用家兔應(yīng)盡可能處于同一溫度的環(huán)境中，實驗室和飼養(yǎng)室的溫度相差不得大于5℃，實驗室的溫度應(yīng)在17～25℃,在試驗全部過程中，應(yīng)注意室溫變化不得大于3℃，防止動物騷動并避免噪音干擾。家兔在試驗前至少1小時開始停止給食并置于適宜的裝置中，直至試驗完畢。

試驗用的注射器、針頭及一切和供試品溶液接觸的器皿,應(yīng)置烘箱中用25