顯微鑒的基本操作技能專家講座

第一節(jié)顯微標本片制作顯微鑒的基本操作技能專家講座第1頁一、組織透化劑及應用：1、組織透化劑：使細胞組織內含物溶解除去或透明清楚、色素氧化退色、皺縮細胞壁膨脹透明試劑。2、作用：（1）浸潤作用。（2）溶解、分解或氧化作用

顯微鑒的基本操作技能專家講座第2頁3、常見透化劑：（1）水合氯醛特點：①能滲透組織細胞內，使干燥而皺縮細胞發(fā)生膨脹；②能溶解多數(shù)組織內含物；③對觀察草酸鈣結晶極為適宜；④不加熱可立刻觀察菊糖。（2）氫氧化鉀（氫氧化鈉）溶液特點：（1）5%水溶液為強力透化劑；②能快速溶解除去淀粉和蛋白質，且能使細胞壁膨脹，作用持久；③對纖維素性細胞壁組織有解離作用；④透化后需將其洗去；⑤慣用于解離組織標本片。顯微鑒的基本操作技能專家講座第3頁二、組織封藏劑及應用：1、組織封藏劑：能保持原制片要求，利于組織和細胞形狀、顏色和內含物觀察溶液。2、作用：保持原制片要求。3、常見封藏劑：（1）蒸餾水加酚、苯甲酸、樟腦等防霉。特點：①能保持原形、原色，對皺縮細胞壁可恢復原狀態(tài)；②用蒸餾水裝片可觀察淀粉粒；③可使黏液溶解，并破壞糊粉粒。顯微鑒的基本操作技能專家講座第4頁（2）稀甘油加入酚等防霉。特點：①保持2～3天；②用稀甘油裝片可觀察糊粉粒、淀粉粒、油滴、樹脂等；③可在透化后滴加，以防水合氯醛析出結晶。顯微鑒的基本操作技能專家講座第5頁三、顯微標本片：1、粉末標本片：以粉末裝片，粉末有細度要求。2、表面標本片：3、切片標本片：中藥判定中最多一類。4、解離組織標本片。四、粉末標本裝片：1、暫時性粉末標本片：暫時性，用完之后就洗掉，載玻片、蓋玻片可重復使用。過程：（1）粉末加封藏劑、蓋蓋玻片、清潔、觀察。顯微鑒的基本操作技能專家講座第6頁（2）粉末加水合氯醛溶液加熱透化三次，加稀甘油封藏、蓋蓋玻片、清潔、觀察。2、永久性粉末標本片：做法較復雜，普通我們在外面購置就是永久性裝片，只要不損壞，能夠一直看。顯微鑒的基本操作技能專家講座第7頁五、表面標本片：主要用于葉片、萼片、花瓣和雄蕊等表皮表面特征觀察。1、整體封藏法：取材料剪取正反2小片，加水合氯醛加熱透化3次，加稀甘油封藏，蓋蓋玻片，清潔，觀察。2、表皮撕離法：適合用于較厚葉片、萼片、花瓣等。顯微鑒的基本操作技能專家講座第8頁六、切片制片法：這類與粉末裝片用得最多，有橫切和縱切。1、機器切片法：生活中極少用，只有生產廠家大量生產時利用。2、徒手切片法：試驗室慣用此法。（1）材料預處理：清潔，（除去非藥用部分，選取適當切片部分。）切成適當大小塊，軟化。顯微鑒的基本操作技能專家講座第9頁軟化方法：①在吸濕器中放置12～24h。②過硬，水浸或煮12h。③特硬，高壓鍋煮20min。如天麻。④過軟，浸入高濃度乙醇中20min。顯微鑒的基本操作技能專家講座第10頁軟化注意事項：①需觀察糊粉粒、黏液、菊糖等水可溶性物質，不可與水接觸。②需觀察揮發(fā)油、樹脂等，不能與高濃度乙醇或其它有機溶劑接觸。顯微鑒的基本操作技能專家講座第11頁（2）材料分割：切薄片。（3）材料挾持：方便切片，慣用胡蘿卜、馬鈴薯。（4）徒手切片刀：雙面和單面，雙面切較柔軟，單面切較硬，單面應用較多。顯微鑒的基本操作技能專家講座第12頁（5）持刀方法：右手持刀，刀身放平，刀口向切片者。（6）切片：材料和刀口蘸水，切掉不整齊一段，同左前外方向右內方快速拉切，臂用力。（7）取片：合乎需要馬上浸入水中。（8）透化：置載玻片中央加水合氯醛加熱透化。（9）封藏：加稀甘油封藏，蓋蓋玻片。（10）清潔觀察。顯微鑒的基本操作技能專家講座第13頁七、解離組織標本片：薄壁組織點大部分用氫氧化鉀法；質地堅硬，木化組織較多用硝鉻酸法。1、氫氧化鉀法：供試樣置試管中加氫氧化鉀，加熱，傾去堿液，用水洗，放于載玻片上，用解剖針撕開，加稀甘油，蓋上蓋玻片。顯微鑒的基本操作技能專家講座第14頁2、供試樣置于試管中，加硝鉻酸試液適量，放置，傾去酸液，加水洗，放于載玻片上，用解剖針撕開，加稀甘油，蓋上蓋玻片。顯微鑒的基本操作技能專家講座第15頁第二節(jié)顯微測量法顯微測量：應用顯微鏡測量尺在顯微鏡下測量微細物體大小。顯微測量尺分為目鏡測微尺和載物臺測微尺。1、目鏡測量尺：安裝在目鏡內一個測量尺。2、載物臺測量尺：載玻片中央粘貼測量尺。顯微鑒的基本操作技能專家講座第16頁3、兩尺關系及應用：臺微尺是不變，每小格10um；目微尺隨目鏡和物鏡改變而改變。4、目微尺標定：（1）將臺微尺放置在載物臺上，目微尺放入目鏡鏡筒內。（2）先低倍鏡，將目微尺刻度移至視野中央。（3）旋轉目鏡，使兩尺平行。顯微鑒的基本操作技能專家講座第17頁（4）移動臺微尺，使目微尺零端與臺微尺刻度某刻度線相重合。（5）再找兩尺第二條重合刻度線，數(shù)兩條重合線間兩尺小格數(shù)，統(tǒng)計。（6）計算出目微尺每一格在該物鏡條件下相當長度（um）標定值=臺微尺小格數(shù)×10um/目微尺小格數(shù)。顯微鑒的基本操作技能專家講座第18頁5、測量方法：（1）將需測量載玻片放于載物臺上。（2）用目微尺測量目標物小格數(shù)，統(tǒng)計。（3）計算：實際長度um=測得小格數(shù)×標定值顯微鑒的基本操作技能專家講座第19頁第三節(jié)顯微繪圖法顯微繪圖法方法又分為平描和應用顯微描繪器描繪。一、平描：只憑肉眼描繪1、依據觀察到實物進行繪圖。2、繪圖要求：（1）要排列整齊、部位適中、百分比恰當。（2）要做到形狀、百分比、倍數(shù)正確。（3）以點、線表示。顯微鑒的基本操作技能專家講座第20頁（4）圖中各部分用阿拉伯數(shù)字表示，在圖下端注明標號名稱。3、繪圖用具：16開白紙或A4白紙。鉛筆。顯微鑒的基本操作技能專家講座第21頁4、繪圖：圖類型普通分粉末圖及組織圖。（1）粉末圖：繪出其粉末特征。（2）組織詳圖：較詳細，需要全部組織全部繪出，較難，普通不繪此種圖。（3）組織簡圖：以線條表示，清楚，一目了然。試驗室常繪出圖，但不實用于出版、做研究等。二、顯微描繪器描繪：分放映裝置和描繪器。顯微鑒的基本操作技能專家講座第22頁第四節(jié)慣用顯微化學分析一、細胞壁性質判別：1、木質化細胞壁：加間苯三酚試液，放置，加鹽酸，顯紅色或紫紅色。2、木栓化或角質化細胞壁：加蘇丹Ⅲ試液或紫草試液，微熱，顯橘紅色至紫色。3、纖維素細胞壁：（1）加氯化鋅碘試液濕潤，放置，再加硫酸溶液，顯藍色或紫色。4、硅質化細胞壁：顯微鑒的基本操作技能專家講座第23頁二、細胞內含物質性質判別：1、淀粉粒：（1）加碘試液顯藍色或紫色。（2）用甘油醋酸試液裝片，末糊化在顯微鏡下顯偏光。2、菊糖：加a-萘酚乙醇溶液，再加硫酸，顯紫紅色并溶解。3、脂肪油、揮發(fā)油、樹脂：（1）加蘇丹Ⅲ試液或紫草試液，均顯橘紅色到紫紅色。顯微鑒的基本操作技能專家講座第24頁（2）加90%乙醇，脂肪油和樹脂不溶解，揮發(fā)油溶解。4、糊粉粒：（1）加碘試液，顯棕色或黃棕色。（2）加三硝基苯酚試液，顯黃色。（3）加硝酸汞試液，顯磚紅色。5、黏液：（1）加墨汁，黏液呈無色透明塊狀。（2）加釕紅試液，顯紅色。顯微鑒的基本操作技能專家講座第25頁

6、草酸鈣結晶：（1）加稀鹽酸溶解而無氣泡產生。（2）加硫酸逐步溶解，片刻后析出針狀硫酸鈣結晶。