肺癌靶點檢測研究進展演示文稿

肺癌靶點檢測研究進展演示文稿1當(dāng)前1頁，總共25頁。優(yōu)選肺癌靶點檢測研究進展當(dāng)前2頁，總共25頁。2007年首次在非小細胞肺癌中發(fā)現(xiàn)EML4-ALK融合基因EML4EML4–ALKvariant1HELP1496981WDBasic14961059110581620TMKinaseALKEML4-ALKNMP-ALKNature2007;448:561–72007年首次在非小細胞肺癌中發(fā)現(xiàn)EML4-ALK融合類型，并證實為肺癌的驅(qū)動基因。并且越來越多的研究表明ALK融合在NSCLC當(dāng)中以較為穩(wěn)定的頻率出現(xiàn)，大約5%。當(dāng)前3頁，總共25頁。Permanentproliferation&inhibitionofapotosisEML4-ALKfusionprotein

silencedby

crizotinibProliferation&survival

uponligandbinding

toALKALK融合突變在蛋白水平的變化配體ALK受體細胞外細胞內(nèi)正常ALK信號細胞外永久擴增和凋亡抑制細胞外克唑替尼抑制EML4-ALK融合蛋白病理性

ALK信號克唑替尼

作用模式

配體與ALK結(jié)合后，擴增和存活由于與EML4融合，ALK激酶區(qū)異常激活多效蛋白?

肝素結(jié)合細胞因子?當(dāng)前4頁，總共25頁。隨著ALK靶向抑制劑的發(fā)現(xiàn)，ALK基因越來越多的受到重視2007,Soda&Mano首次發(fā)現(xiàn)EML4-ALK基因2009,AliceT.Shaw首次出現(xiàn)EML4-ALK陽性非小細胞肺癌的稱謂，并將其定義為NSCLC的獨特亞型2010,KwakEL:證實克唑替尼治療有效，但仍沿用EML4-ALK陽性非小細胞肺癌的稱謂SodaM,etal.Nature2007;448(7153):561-566.ShawAT,etal.JClinOncol2009;27:4247-4253.KwakEL,etal.NEnglJMed2010;363:1693-1703.當(dāng)前5頁，總共25頁。NSCLC臨床病理分型的演變AdenocarcinomaSquamous-cellcarcinomaLargecellcarcinoma組織分型

CurrentStandardofNSCLCCareNon-squamousNSCLC分型現(xiàn)狀SquamousEGFRWTEGFRMuSquamousEGFRMuKRASMuALK+Othernon-squamousWTSquamous2012NCCN2014NCCNEGFRMuALK+KRASMuOthernon-squamousWTSquamousROS1+2010NCCNNCCNGuidelines,NSCLC,Version4.

2014HornL,etal.ClinOncol.2009驅(qū)動基因分型

早期當(dāng)前6頁，總共25頁。NSCLC分子分型與治療決策密切相關(guān)HER2EGFRmutantsALKROS/RETb-rafK-rasChemotherapyandPCIAdenoLCC/NOSSCCSCLCK-ras當(dāng)前7頁，總共25頁。ALK陽性非小細胞肺癌有哪些特點？當(dāng)前8頁，總共25頁。ALK陽性NSCLC具有鮮明的臨床及病理特征特征EGFR突變EML4/ALK組織學(xué)腺癌TTF1+腺癌TTF1+亞型非粘液型粘液型吸煙狀態(tài)不吸煙不吸煙人種東亞所有人種發(fā)病年齡66歲52歲性別女性無差異ShawAT,etal.JClinOncol2009;27:4247-4253.85.4%的ALK陽性NSCLC年齡<65歲(PROFILE1007)當(dāng)前9頁，總共25頁。與EGFR突變?nèi)巳合啾龋珹LK融合人群年齡更輕ALK陽性患者的中位年齡比EGFR陽性患者中位年齡小15歲當(dāng)前10頁，總共25頁。低年齡組ALK陽性率高于EGFR在低于51歲的人群中，ALK陽性率高于EGFR陽性率，可達18.5%，所以對于年輕患者來說，在標(biāo)本限制的情況下建議先檢測ALK靶點。ScientificReports;LiZhang,2014當(dāng)前11頁，總共25頁。中國ALK突變的發(fā)生率有多高？AuthorALKincidencePublicationsZhangX,WuYLetal.11.6%(12/103)MolCancer2009Wong,etal.(Hongkong)4.9%(13/265)Cancer2009LiH,ChenHQ,etal.3.0%(7/230smokers,AC)LungCancer2012SunY,ChenH,JiH,etal.5.8%(3/52surgicalAC,non-smokers)JCO2010WuSG,YangPC,etal.(Taiwan)34%(39/116,AC,WTEGFR)JTO2012RikovaK,etal4.7%(6/137)Cell2007WangZ,WangJ,etal.9.7%(11/113,StageIV

)Oncology2012RenS,ZhouC,etal.9.6%(10/104,Female,AC,non-smoker)CellBiochemBiophys.2012;Cancer2012早期患者（手術(shù)標(biāo)本）ALK陽性率4.5%，晚期患者ALK陽性率8%-10%，胸水標(biāo)本的ALK陽性率可達11%。當(dāng)前12頁，總共25頁。不同人種中克唑替尼的療效的差異ID患者數(shù)ORR(%)PFS（月）所有亞裔(%)所有非亞裔亞裔中國所有非亞裔亞裔中國PROFILE100114941(28)60.854.876.9-9.7---PROFILE100525993(36)59.8547073.98.1---PROFILE1007347157(45)65-74.7757.77.18.1-PROFILE1014343157(46)747270-10.9-13.6-Fei-YuNiu,Yi-LongWu.OncoTargetsandTherapy2May2015

亞裔或者中國患者，ORR維持在70%以上；克唑替尼一線治療亞裔患者，中位PFS達到13.6個月當(dāng)前13頁，總共25頁。什么樣的人群需要進行ALK檢測？當(dāng)前14頁，總共25頁。

更新內(nèi)容2011版2015版對臨床實踐影響診斷病理報告內(nèi)容未提及分子病理診斷結(jié)果診斷內(nèi)容包括腫瘤部位、組織學(xué)亞型、累及范圍（支氣管、胸膜、脈管、神經(jīng)、伴隨病變類型、肺內(nèi)播散灶、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等）、切緣及必要的特殊染色、免疫組化結(jié)果或分子檢測結(jié)果。包含的信息應(yīng)滿足臨床分期的需要，并給出pTNM分期。規(guī)范診斷：標(biāo)準NSCLC診斷需盡可能注明EGFR&ALK基因狀態(tài)（如：右肺上葉腺癌T3N2M1（骨）---IV期ALK融合基因陽性）NSCLC驅(qū)動基因檢測未推薦EGFR&ALK檢測對于晚期NSCLC、腺癌或者含腺癌成分的其他類型肺癌，應(yīng)在診斷的同時常規(guī)進行表皮生長因子（EGFR）和間變性淋巴瘤激酶（ALK）等基因突變檢測，檢測前應(yīng)有送檢標(biāo)本的質(zhì)控（包括亞型確認及樣本量確認）。檢測標(biāo)本類型包括活檢組織、細胞學(xué)標(biāo)本和細胞蠟快，檢測方法推薦使用獲得國家食品藥品監(jiān)督管理總局批準的檢測方法或試劑。常規(guī)檢測：晚期NSCLC診斷同時，需常規(guī)檢測EGFR&ALK基因狀態(tài)（特殊情況除外）非小細胞肺癌靶向個體化診療策略更新要點P71P69當(dāng)前15頁，總共25頁。腺癌/大細胞癌/NOS應(yīng)該進行EGFR及ALK檢測少吸煙/小活檢肺鱗癌，不能排除混合性成分，需要進行EGFR/ALK檢測為了識別出已經(jīng)有有效藥物治療的罕見驅(qū)動基因靶點，NCC指南強烈推薦對腫瘤病人進行更廣譜的腫瘤驅(qū)動基因檢測，或為病人推薦可獲得的臨床研究。廣譜的驅(qū)動基因篩查是改善NSCLC預(yù)后的關(guān)鍵Version4.2016強調(diào)分子檢測的重要性當(dāng)前16頁，總共25頁。如何檢測ALK融合突變？當(dāng)前17頁，總共25頁。CFDA獲批的三種診斷方法ALKbreak-apartFISHassay(AbbottMolecular,Vysisprobes)ALKimmunohistochemistry(RocheVentana)SplitIsolatedredAmoyDxEML4-ALK融合基因檢測試劑盒RT-PCR（廈門艾德）當(dāng)前18頁，總共25頁。熒光原位雜交（FISH）5′ALKEML43′陽性（分離–倒位）2p23-215′ALKEML43′倒位（70％）基因融合陰性兩個信號之間的距離小于2個信號直徑~12Mb本圖由LukasBubendorf提供當(dāng)前19頁，總共25頁。實時逆轉(zhuǎn)錄法（RT-PCR）原理20逆轉(zhuǎn)錄酶（AMV）催化合成cDNA第一條鏈加入PCR成分用TakaraExTaqTMHS合成cDNA第二條鏈擴增cDNART-PCR試劑盒的原理EML4ALK上游引物下游引物融合點檢測探針當(dāng)前20頁，總共25頁。VENTANAIHC試劑設(shè)計ALK融合蛋白:無ALK重排的NSCLC不表達ALK融合蛋白部分ALK融合蛋白表達較低VentanaIHC的原理:使用具有高度敏感性和特異性的一抗——D5F3全自動儀操作，充分保證特異性獨有Optiview擴增技術(shù)，充分保證敏感性D5F3rabbittmonoclonalantibodyOptiviewDABIHCDetectionOptiviewAmplificationKit當(dāng)前21頁，總共25頁。01+2+3+NegPosPosPosCST-IHCVentana-IHCPosVentana-IHC原理：在常規(guī)IHC之后加入擴增信號，并且通過充分洗滌一抗避免假陽性----創(chuàng)建一個“二元”的判讀系統(tǒng)J.Ying,etal.AnnalsofOncology2013;當(dāng)前22頁，總共25頁。Ventana

IHC與FISH檢測結(jié)果比較FISH總數(shù)敏感性特異性一致率陽性陰性VentanaIHC(1)陽性46753100%98.20%98.40%陰性0377377VentanaIHC(2)陽性3103194%100%99.10%陰性2198200VentanaIHC(2)陽性32032100%100%100%陰性0217217VentanaIHC(3)陽性4024291%96%94%陰性45357VentanaIHC(4)陽性1801890%100%99.60%陰性2503505VentanaIHC(5)陽性63265100%98.4%98.9%陰性0131131(1)JinghuiWang,etal.PLoSONE20149(7):e101551(2)EugenC.Minca,etal.JMolDiagn2013,15:341-346(3)MurryW.Wynes,etal.JThoracOncol.2014;