全國腎綜合征出血熱監(jiān)測方案(報送稿)20230722

附件4：全國腎綜合征出血熱監(jiān)測方案（試行）一、概述腎綜合征出血熱（以下簡稱出血熱）是由漢坦病毒引起的一種自然疫源性疾病，是《中華人民共和國傳染病防治法》規(guī)定的乙類傳染病。鼠類為其自然宿主和主要傳染源。根據(jù)我國出血熱的主要傳染源種類不同，本病可分為姬鼠型和家鼠型兩種主要類型，其中黑線姬鼠為姬鼠型出血熱的主要宿主動物和傳染源；褐家鼠為家鼠型出血熱的主要宿主動物和傳染源。通過多年研究，已經(jīng)基本明確了我國存在姬鼠型、家鼠型和家鼠姬鼠混合型3種疫區(qū)，此外，近年來在我國還發(fā)現(xiàn)了以棕背鼠平為主要宿主動物的普馬拉型漢坦病毒。世界上已有30多個國家發(fā)現(xiàn)腎綜合征出血熱，主要分布在歐亞大陸，其中發(fā)病最多的為中國、俄羅斯、朝鮮、芬蘭、瑞典、挪威、波蘭等。我國每年腎綜合征出血熱發(fā)病人數(shù)占世界報道的漢坦病毒感染病例的90%以上，是受漢坦病毒危害最為嚴重的國家。我國大陸的31個省、市、自治區(qū)均有病例發(fā)生，臺灣也有漢坦病毒感染病例報告。我國年發(fā)病數(shù)最高曾超過11萬，近十年來我國年報告發(fā)病人數(shù)一直在2～5萬左右，新疫區(qū)不斷出現(xiàn)，并時有暴發(fā)流行，老疫區(qū)的類型也有所變化。近年來個別省份出血熱發(fā)病率明顯升高，形勢不容樂觀。出血熱病例以農(nóng)村青壯年人群為主，不僅對人民身體健康和生命安全造成危害，而且對社會經(jīng)濟發(fā)展造成嚴重影響，已經(jīng)成為一個重要的公共衛(wèi)生問題。因此，在全國系統(tǒng)地開展出血熱的流行病學和病原學監(jiān)測，了解我國出血熱的疫情動態(tài)和流行規(guī)律，了解宿主動物情況和病原分布，分析其流行因素，對于全國出血熱的預防控制工作至關(guān)重要。二、監(jiān)測目的（一）了解我國出血熱的疫情動態(tài)和流行規(guī)律。（二）了解我國出血熱的主要宿主動物密度、構(gòu)成和感染情況。（三）了解我國出血熱流行毒株的型別、分布及變異等情況。（四）為分析出血熱流行趨勢和制定相應(yīng)的防治對策提供科學依據(jù)。三、監(jiān)測病例定義（一）診斷原則根據(jù)患者的流行病學史、臨床表現(xiàn)及實驗室檢查結(jié)果進行綜合判斷。（二）診斷標準1.流行病學史在出血熱疫區(qū)及流行季節(jié)，或發(fā)病前兩個月內(nèi)有疫區(qū)旅居史，或發(fā)病前兩個月內(nèi)有與鼠類或其排泄物（尿、糞）/分泌物（唾液）直接或間接接觸史。2.臨床表現(xiàn)2.1早期癥狀和體征：起病急，發(fā)冷，發(fā)熱（38℃以上）；2.2全身酸痛，乏力，呈衰竭狀；2.3頭痛，眼眶痛，腰痛（三痛）；2.4面、頸、上胸部充血潮紅（三紅），呈酒醉貌；2.5眼瞼浮腫、結(jié)膜充血，水腫，有點狀或片狀出血；2.6上腭粘膜呈網(wǎng)狀充血，點狀出血；2.7腋下皮膚有線狀或簇狀排列的出血點；2.8束臂試驗陽性。3.病程經(jīng)過典型病例有發(fā)熱期、低血壓期、少尿期、多尿期和恢復期五期經(jīng)過。前三期可有重疊，并存在有大量五期不全的異型或輕型非典型病例。4.實驗室檢查4.1血檢查早期白細胞數(shù)低或正常，3～4病日后明顯增多，桿狀核細胞增多，出現(xiàn)較多的異型淋巴細胞；血小板明顯減少。4.2尿檢查尿蛋白陽性，并迅速加重，伴顯微血尿、管型尿。4.3血清特異性IgM抗體陽性（見附件1、2）。4.4恢復期血清特異性IgG抗體比急性期有4倍以上增高（見附件3、4）。4.5從病人血清中分離到漢坦病毒和/或檢出漢坦病毒RNA（見附件5、6）。5.病例分類5.1疑似病例：具備1、2.1、2.2和2.3～2.8之一以上者；或雖無明確流行病學史但臨床癥狀典型者。5.2臨床診斷病例：疑似病例加3、4.1、4.2。5.3實驗室確診病例：臨床診斷病例加4.3、4.4、4.5中的任一項。四、監(jiān)測內(nèi)容（一）全國常規(guī)監(jiān)測1.病例的發(fā)現(xiàn)和報告按照《中華人民共和國傳染病防治法》和《突發(fā)公共衛(wèi)生事件與傳染病疫情監(jiān)測信息報告管理辦法》，各級各類醫(yī)療機構(gòu)、疾病預防控制機構(gòu)、衛(wèi)生檢疫機構(gòu)執(zhí)行職務(wù)的醫(yī)務(wù)人員發(fā)現(xiàn)疑似、臨床診斷或?qū)嶒炇掖_診病例，城鎮(zhèn)應(yīng)于6小時內(nèi)、農(nóng)村應(yīng)于12小時內(nèi)通過傳染病疫情監(jiān)測系統(tǒng)進行網(wǎng)絡(luò)直報。不具備網(wǎng)絡(luò)直報條件的應(yīng)在診斷后24小時內(nèi)向相應(yīng)單位送（寄）出傳染病報告卡，縣級疾病預防控制機構(gòu)和具備條件的鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院收到傳染病報告卡后立即進行網(wǎng)絡(luò)直報。2.個案調(diào)查各省對所報告的出血熱臨床診斷病例和實驗室確診病例抽樣進行個案調(diào)查（出血熱個案調(diào)查表見附表1），年報告病例數(shù)在1000例以上的省至少抽樣100例進行調(diào)查，病例數(shù)少于1000例的省至少抽樣50例進行調(diào)查，病例數(shù)少于50例的省，則對全部病例進行調(diào)查。抽樣調(diào)查的病例應(yīng)至少分布在三個縣。有條件的省可以對所有病例進行個案調(diào)查。縣級疾病預防控制機構(gòu)于每月10日前將上一月個案調(diào)查表錄入數(shù)據(jù)庫，并逐級上報。省級疾病預防控制中心每月20日前將上一月出血熱個案調(diào)查表數(shù)據(jù)庫上報中國疾病預防控制中心。3.血清學核實診斷各省對抽查的臨床診斷病例進行個案調(diào)查后采集急性期血清，用MacELISA或膠體金標記試紙條方法進行血清學核實診斷（見附件1、2）。以省為單位，核實診斷數(shù)不得少于50例，如果病例數(shù)低于50例，則全部進行檢測。血清學核實診斷結(jié)果及時錄入個案調(diào)查表數(shù)據(jù)庫。4.病原學監(jiān)測（1）核酸檢測各省采集30～50例發(fā)病7日內(nèi)的急性期（發(fā)熱期）患者血清，由省級疾病預防控制中心應(yīng)用RT-PCR分型方法檢測病毒核酸（見附件6），如果病例數(shù)少于30例，則全部進行核酸檢測。（2）病毒分離有條件的省級疾病預防控制中心可采集急性期病人全血分離病毒（見附件5），并將陽性病毒分離物送中國疾病預防控制中心做進一步鑒定。各省經(jīng)RT－PCR分型方法發(fā)現(xiàn)姬鼠型和家鼠型以外型別的漢坦病毒，將原始標本送中國疾病預防控制中心進行病毒分離和鑒定。（3）序列測定對分離到的病毒或PCR產(chǎn)物，各省每年測定家鼠型和姬鼠型漢坦病毒的M和S片段全序列各1株，并將測序結(jié)果報中國疾病預防控制中心。不具備序列測定條件的省份，可將標本送中國疾病預防控制中心進行序列測定。（4）結(jié)果的報告和反饋省級疾病預防控制中心每年7月15日和次年1月15日將病原學監(jiān)測結(jié)果表（包括核酸檢測、病毒分離、序列測定）報中國疾病預防控制中心（見附表4）。中國疾病預防控制中心收到各省所送標本后，兩個月內(nèi)將檢測結(jié)果反饋給各省級疾病預防控制中心。5.暴發(fā)疫情調(diào)查與監(jiān)測（1）暴發(fā)疫情的報告按照《中華人民共和國傳染病防治法》和《突發(fā)公共衛(wèi)生事件與傳染病疫情監(jiān)測信息報告管理辦法》的規(guī)定，各級各類醫(yī)療機構(gòu)、疾病預防控制機構(gòu)、衛(wèi)生檢疫機構(gòu)執(zhí)行職務(wù)的醫(yī)務(wù)人員發(fā)現(xiàn)疑似、臨床診斷或?qū)嶒炇掖_診病例，城鎮(zhèn)應(yīng)于6小時內(nèi)、農(nóng)村應(yīng)于12小時內(nèi)通過傳染病疫情監(jiān)測系統(tǒng)進行網(wǎng)絡(luò)直報。如果暴發(fā)疫情達到《全國突發(fā)公共衛(wèi)生事件應(yīng)急預案》規(guī)定的級別，則按相應(yīng)要求同時通過《突發(fā)公共衛(wèi)生事件報告管理信息系統(tǒng)》報告?？h級疾病預防控制中心接到暴發(fā)疫情后，應(yīng)立即報告縣衛(wèi)生行政部門和逐級報告上級疾病預防控制機構(gòu)。（2）暴發(fā)疫情的調(diào)查暴發(fā)疫情的調(diào)查由縣級衛(wèi)生行政部門組織，縣級疾病預防控制機構(gòu)具體實施?？h級疾病預防控制機構(gòu)接到疫情報告后，應(yīng)在24小時內(nèi)到達現(xiàn)場開展調(diào)查。1）核實診斷①病例核實：對報告的病例逐個進行詳細的個案調(diào)查，并進行血清學或病原學檢測。②疫情核實：了解暴發(fā)點近期有無類似病例發(fā)生，并對發(fā)現(xiàn)的可疑病例進行個案調(diào)查，了解三間分布情況。對所有病人進行血清學或病原學檢測。2）基本情況調(diào)查①詳細調(diào)查暴發(fā)點的人口資料、患者及居民居住環(huán)境、自然地理景觀、氣象資料等流行因素。②了解暴發(fā)點所在地的既往疫情情況和流行強度。③了解暴發(fā)點所在地出血熱宿主動物的種類、分布、密度及感染情況。3）宿主動物調(diào)查在暴發(fā)點的居民區(qū)（患者居住地及周圍）和野外進行宿主動物種類、密度調(diào)查，捕獲數(shù)量各不少于50只，對捕獲的宿主動物進行感染狀況調(diào)查。4）人群感染狀況調(diào)查采集暴發(fā)點內(nèi)高危人群血標本50～100份，用免疫熒光法或ELISA法進行抗體水平的檢測（見附件3、4），了解人群感染狀況。（3）控制措施在暴發(fā)疫情核實后，立即對暴發(fā)點采取滅鼠防鼠、預防接種等綜合性防制措施。1）滅鼠：按照衛(wèi)生部出血熱防治工作的有關(guān)要求進行滅鼠。滅鼠3周后的鼠密度室內(nèi)應(yīng)達到1％以下、室外3％以下。2）應(yīng)急預防接種：對暴發(fā)點內(nèi)的高危人群實施應(yīng)急預防接種，接種率應(yīng)達80％以上，防止疫情蔓延。3）滅螨：對床鋪草墊、地面、室外草叢、柴草堆等處采用藥物滅螨。4）環(huán)境治理：大力開展愛國衛(wèi)生運動，整治和改善環(huán)境衛(wèi)生。5）健康教育：利用各種媒體及途徑，在發(fā)生暴發(fā)的地區(qū)，開展出血熱防病知識的宣傳，增強群眾防病和參與防治的意識。（4）總結(jié)暴發(fā)疫情處理后，及時收集、整理、統(tǒng)計、分析調(diào)查資料，在疫情處理結(jié)束后7日內(nèi)，寫出詳細的暴發(fā)調(diào)查報告，逐級上報至中國疾病預防控制中心。同時，將個案調(diào)查表錄入數(shù)據(jù)庫，一并上報。（二）監(jiān)測點的監(jiān)測以縣為單位，建立國家級監(jiān)測點，開展人間疫情和宿主動物監(jiān)測。1.國家級監(jiān)測點選擇原則（1）近三年出血熱發(fā)病水平居全國前列的??；（2）多數(shù)監(jiān)測點近三年的出血熱發(fā)病率達到高發(fā)或中發(fā)水平，同時兼顧低發(fā)地區(qū)；（3）監(jiān)測點能夠代表我國疫區(qū)和疫源地主要類型；（4）監(jiān)測點具有一定的出血熱工作基礎(chǔ)，能夠承擔并完成監(jiān)測任務(wù)；（5）各省可結(jié)合原有國家級監(jiān)測點進行選擇；（6）國家根據(jù)疫情變化情況，將適時調(diào)整監(jiān)測點。根據(jù)國家級監(jiān)測點選擇原則，將國家級監(jiān)測點設(shè)置如下（共22個省39個監(jiān)測點）：遼寧（5）：沈陽市（于洪區(qū)），本溪市（本溪縣），丹東市（風城市），錦州市（凌海市），鞍山市（海城市）；黑龍江（4）：黑河市（嫩江縣），齊齊哈爾市（訥河市），雞西市（虎林市），牡丹江市（寧安市）；山東（4）：濟南市（章丘縣），青島市（膠南縣），濰坊市（青州市），臨沂市（莒南縣）；河北（4）：唐山市（灤縣），石家莊市（辛集市），保定市（定州市），滄州市（獻縣）；吉林（4）：延邊州（琿春市），白山市（撫松縣），長春市（雙陽區(qū)），吉林市（磐石縣）；陜西（2）：西安市（戶縣），寶雞市（眉縣）；浙江（1）：臺州市（天臺縣）；河南（1）：駐馬店市（確山縣）；湖南（1）：長沙市（寧鄉(xiāng)縣）；內(nèi)蒙古（1）：呼倫貝爾盟（莫力達瓦旗）；四川（1）：涼山彝族自治州（鹽源縣）；江蘇（1）：連云港市（贛榆縣）；江西（1）：宜春市（高安）；湖北（1）：宜昌市（當陽市）；安徽（1）：阜陽市（穎州區(qū)）；天津（1）：天津市（南開區(qū)）；貴州（1）：遵義市（遵義縣）；山西（1）：太原市（尖草坪區(qū)）；北京（1）：北京市；甘肅（1）：平?jīng)鍪校ㄈA亭縣）；云南（1）：紅河州（瀘西縣）；寧夏（1）：固原市（涇源縣）。2.監(jiān)測內(nèi)容（1）常規(guī)疫情和暴發(fā)疫情監(jiān)測同全國常規(guī)監(jiān)測，同時對轄區(qū)內(nèi)醫(yī)療機構(gòu)報告的出血熱疑似病例、臨床診斷病例和實驗室確診病例全部進行個案調(diào)查?？h級（或市級）疾病預防控制機構(gòu)每月10日前將上月個案調(diào)查表錄入數(shù)據(jù)庫，并逐級匯總上報。各省級疾病預防控制中心每月20日前上報中國疾病預防控制中心。（2）血清學核實診斷對監(jiān)測點報告的出血熱臨床診斷病例，按照不低于80％的比例采集急性期血清標本，少于50例的全部采集，由各省級疾病預防控制中心或有條件的縣級（市級）疾病預防控制機構(gòu)應(yīng)用MacELISA或膠體金標記試紙條方法進行血清學核實診斷（見附件1、2）檢測，進行核實診斷。并將血清學核實診斷結(jié)果立即錄入個案調(diào)查表數(shù)據(jù)庫。（3）病例的病原學監(jiān)測采集急性期患者的全血進行PCR、病毒分離、核苷酸序列測定和交叉中和實驗，分析流行型別（見附件5、6）。1）核酸檢測MacELISA法或膠體金標記試紙條方法核實診斷陽性的病例，由省級疾病預防控制中心采用RT-PCR進行核酸檢測。每個監(jiān)測點的抽樣數(shù)不少于20例，如果監(jiān)測點病例數(shù)低于20例，全部檢測。2）病毒分離各監(jiān)測點每年采集一定數(shù)量的急性期病例全血送省級疾病預防控制中心進行病毒分離。各省每年從血清中分離漢坦病毒2株，混合型疫區(qū)分離姬鼠型和家鼠型各1株。陽性病毒分離物送中國疾病預防控制中心進一步鑒定。3）序列測定各省級疾病預防控制中心對分離到的病毒和陽性PCR產(chǎn)物進行M和S片段序列測定，并將測序結(jié)果報中國疾病預防控制中心。不具備序列測定條件的省份，可將標本送中國疾病預防控制中心進行序列測定。4）血清分型各監(jiān)測點每年采集20份實驗室確診病例恢復期血清送省級疾病預防控制中心，進行交叉中和實驗（附件7），進行血清學分型。不具備條件的省份，可將標本送中國疾病預防控制中心進行血清分型。5）結(jié)果的報告和反饋各省級疾病預防控制中心每年7月15日和次年1月15日將病原學監(jiān)測結(jié)果（包括核酸檢測、病毒分離、序列測定）報中國疾病預防控制中心（見附表4）。中國疾病預防控制中心收到各省所送標本后，兩個月內(nèi)將檢測結(jié)果反饋給各省級疾病預防控制中心。（4）宿主動物監(jiān)測以縣（區(qū)）為單位，逐步查清居民區(qū)及野外宿主動物種類、分布、密度、感染率和所帶病毒的型別及變異情況（見附表2、3、4）。未設(shè)國家級監(jiān)測點的地區(qū)可參照以下內(nèi)容進行宿主動物監(jiān)測。1）鼠密度的監(jiān)測①調(diào)查點的選擇根據(jù)監(jiān)測點的疫情分布情況和地理景觀選擇調(diào)查地點。農(nóng)村居民區(qū)應(yīng)選擇有代表性的、既往有出血熱病人發(fā)生的自然村；在調(diào)查自然村外500米半徑范圍內(nèi)，進行野外鼠密度調(diào)查，應(yīng)選在河流、水渠、道路兩旁、田埂、墳地和場院等可能有鼠類棲息活動的地方。②監(jiān)測時間每年3～4月和9～10月各一次，分別在農(nóng)村居民區(qū)和野外同時進行監(jiān)測。各省可根據(jù)具體情況適當調(diào)整監(jiān)測時間。③捕鼠方法按出血熱鼠密度監(jiān)測有關(guān)規(guī)定方法進行。④分類鑒定記錄捕獲的宿主動物名稱應(yīng)寫學名，其名稱和鑒定方法、標準參考《醫(yī)學動物分類鑒定》、《腎綜合征出血熱監(jiān)測及疫苗應(yīng)用研究》附錄部分（陳化新，羅成旺主編，2001年香港醫(yī)藥出版社）。2）鼠感染率調(diào)查各監(jiān)測點，每次分別在居民區(qū)和野外各捕鼠50只以上，進行血清學和病原學檢測，計算感染率。①鼠標本的采集取分類鑒定的鼠，無菌解剖，取鼠肺，放入編號的冷凍塑料管內(nèi)，封口，放入液氮罐內(nèi)保存。在取鼠肺的同時，用濾紙條（5cm×1cm）沾取鼠血，陰干后用塑料袋包好放入液氮罐。罐中保存。上述標本帶到實驗室后，應(yīng)及時放到超低溫或低溫冰箱內(nèi)保存，或盡快分裝檢測。②鼠肺抗原和血清抗體檢測各省級疾病預防控制中心應(yīng)用免疫熒光法檢測鼠肺出血熱病毒抗原，或用雙抗原夾心ELISA檢測鼠出血熱抗體（見附件8、9）。③結(jié)果報告各省級疾病預防控制中心在完成捕鼠任務(wù)后，一個月內(nèi)將鼠密度和鼠感染情況監(jiān)測結(jié)果（附表2、3）報中國疾病預防控制中心。3）宿主動物的病原學監(jiān)測①核酸檢測各省級疾病預防控制中心對免疫熒光陽性鼠肺標本，采用RT-PCR方法（見附件6）進行核酸檢測。②病毒分離各監(jiān)測點對采集的陽性鼠肺標本，送省級疾病預防控制中心進行病毒分離（見附件5）。各省每年從鼠肺中分離漢坦病毒2株，混合型疫區(qū)分離姬鼠型和家鼠型各1株，陽性病毒分離物送中國疾病預防控制中心進一步鑒定。③序列測定各省級疾病預防控制中心對分離到的病毒和陽性PCR產(chǎn)物進行M和S片段序列測定，并將測序結(jié)果報中國疾病預防控制中心。不具備序列測定條件的省份，可將標本送中國疾病預防控制中心進行序列測定。④結(jié)果的報告和反饋各省級疾病預防控制中心每年7月15日和次年1月15日將病原學監(jiān)測結(jié)果（包括核酸檢測、病毒分離、序列測定）報中國疾病預防控制中心（見附表4）。中國疾病預防控制中心收到各省所送標本后，兩個月內(nèi)將檢測結(jié)果（不包括病毒分離）反饋給各省級疾病預防控制中心。五、監(jiān)測系統(tǒng)組成和職責監(jiān)測系統(tǒng)由衛(wèi)生部、各級衛(wèi)生行政部門、中國疾病預防控制中心及各級疾病預防控制中心組成。其職責分別為：（一）衛(wèi)生部和各級衛(wèi)生行政部門衛(wèi)生部領(lǐng)導全國出血熱監(jiān)測工作，各級衛(wèi)生行政部門負責組織開展本轄區(qū)內(nèi)出血熱監(jiān)測工作，并提供所需監(jiān)測經(jīng)費，保證監(jiān)測工作的順利開展。（二）中國疾病預防控制中心1.組織全國監(jiān)測方案的起草、論證、修改和完善，為全國出血熱監(jiān)測提供技術(shù)指導。2.組織考察、確定全國監(jiān)測點的布局，與國家級監(jiān)測點所在省級疾病預防控制中心簽訂協(xié)議，明確具體任務(wù)和目標，為國家級監(jiān)測點提供一定監(jiān)測經(jīng)費補助。3.組織對全國省級疾病預防控制中心和國家級監(jiān)測點專業(yè)技術(shù)人員的培訓。4.負責全國監(jiān)測數(shù)據(jù)的收集、整理，定期對監(jiān)測系統(tǒng)的全部數(shù)據(jù)進行分析、反饋。5.為各省級疾病預防控制中心和國家級監(jiān)測點提供相應(yīng)的血清學診斷、檢測試劑。6.負責完成本方案中規(guī)定的實驗室工作。7.組織專家定期對全國出血熱監(jiān)測系統(tǒng)進行檢查、考核。8.每年對全國出血熱監(jiān)測系統(tǒng)進行年度工作總結(jié)，組織召開全國年度工作總結(jié)研討會。（三）省級疾病預防控制中心1.根據(jù)國家監(jiān)測方案，結(jié)合本省實際情況制定本省監(jiān)測實施方案；協(xié)組國家疾病預防控制中心確定本省國家級監(jiān)測點，建立和完善本省的監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)；2.負責本省監(jiān)測專業(yè)技術(shù)人員培訓工作；3.承擔本省國家級監(jiān)測點的管理、業(yè)務(wù)指導，參與國家CDC對國家級監(jiān)測點的監(jiān)測工作檢查、考核。4.與本省國家級及省級監(jiān)測點疾病預防控制機構(gòu)簽訂協(xié)議，明確具體任務(wù)和目標，按其完成情況確定監(jiān)測經(jīng)費補助數(shù)額。5.完成國家監(jiān)測方案中要求的病例抽查、血清學和病原學等監(jiān)測任務(wù)。6.對全省監(jiān)測資料進行收集、匯總和分析，按方案要求的時限上報中國疾病預防控制中心，并進行反饋。7.對監(jiān)測點的監(jiān)測工作進行質(zhì)量控制。（四）市級疾病預防控制中心根據(jù)國家監(jiān)測方案的要求，協(xié)助省中心完成本地區(qū)監(jiān)測點的監(jiān)測任務(wù)和管理、業(yè)務(wù)指導；參與本地區(qū)監(jiān)測點的監(jiān)測工作。（五）縣級疾病預防控制中心1.按監(jiān)測方案要求，及時、準確的對臨床診斷病例進行個案調(diào)查，數(shù)據(jù)錄入，按規(guī)定的時限上報?。ㄊ校┘膊☆A防控制中心。負責病例標本的采集、檢測、上送。2.承擔宿主動物種群、密度的監(jiān)測工作和宿主動物標本的采集，并及時將采集的標本送省級疾病預防控制中心進行檢測。宿主動物監(jiān)測完成后，在15內(nèi)上報省疾病預防控制中心。3.負責暴發(fā)疫情的調(diào)查處理。（六）監(jiān)測點所在地醫(yī)療機構(gòu)在當?shù)匦l(wèi)生行政部門的統(tǒng)一領(lǐng)導下，配合疾病預防控制部門的各項監(jiān)測工作，負責完成門（就）診和住院病例的標本采集，協(xié)助疾病預防控制機構(gòu)開展病例個案調(diào)查。六、數(shù)據(jù)收集、分析、反饋（一）數(shù)據(jù)收集內(nèi)容1.疫情報告卡2.個案調(diào)查表（見附表1）3.暴發(fā)疫情調(diào)查處理報告4.宿主動物調(diào)查統(tǒng)計報表、宿主動物感染情況報表（見附表2、3）5.實驗室檢測記錄（二）統(tǒng)計分析指標1.發(fā)病情況及趨勢：發(fā)病數(shù)（例）、死亡數(shù)（例）、發(fā)病率（/10萬）、病死率（％）和死亡率（/10萬）。2.病例分布情況：病人年齡、性別、職業(yè)、時間、地理分布等。3.宿主動物種類、分布、密度、帶毒情況。4.病毒分離及基因變異情況。5.疫源地分型：通過RT-PCR分型、對病毒基因的核苷酸序列測定以及血清學分型結(jié)果，進行疫源地分型和疫區(qū)類型演變過程分析。（三）定期報告、反饋資料1.按照《中華人民共和國傳染病防治法》，出血熱為乙類法定管理傳染病，發(fā)現(xiàn)出血熱或疑似出血熱疫情后，必須按照規(guī)定及時進行網(wǎng)上直報。疫情證實后，應(yīng)通報相鄰有關(guān)市縣（區(qū)）鄉(xiāng)鎮(zhèn)。2.縣級疾病預防控制機構(gòu)每月10日前將前一月出血熱個案調(diào)查表錄入數(shù)據(jù)庫，并逐級匯總上報。各省級疾病預防控制中心每月20日前上報中國疾病預防控制中心。3.血清學試驗應(yīng)隨時進行，并將血清診斷結(jié)果立即錄入個案調(diào)查表數(shù)據(jù)庫。4.省級疾病預防控制中心每年7月15日和次年1月15日將病原學監(jiān)測結(jié)果（包括核酸檢測、病毒分離、序列測定）報中國疾病預防控制中心。中國疾病預防控制中心收到各省所送標本后，兩個月內(nèi)將檢測結(jié)果反饋給省級疾病預防控制中心。5.省級疾病預防控制中心在完成捕鼠任務(wù)后一個月內(nèi)，將鼠密度和鼠感染情況監(jiān)測結(jié)果（附表2、3）報中國疾病預防控制中心。6.中國疾病預防控制中心每個月做監(jiān)測簡報反饋給各省。七、監(jiān)測系統(tǒng)質(zhì)量控制指標（一）人員培訓每年對國家級監(jiān)測點所在縣有關(guān)業(yè)務(wù)人員進行1次培訓，由中國疾病預防控制中心負責指導、各國家級監(jiān)測點所在省疾病預防控制中心具體實施。（二）血清學試驗的核實工作省級疾病預防控制中心應(yīng)對監(jiān)測點所在縣進行的血清學試驗復核，至少抽樣30％進行檢查，若病例數(shù)低于30，則需要全部核實，符合率不低于90％。（三）病原學試驗的核實工作中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所對省級疾病預防控制中心所分離的漢坦病毒進行鑒定。至少抽樣30％對分型工作進行核實，符合率不低于90％。（四）技術(shù)資料檔案管理，原始記錄，總結(jié)等。八、附件附表1出血熱個案調(diào)查表附表2宿主動物調(diào)查統(tǒng)計報表附表3宿主動物感染情況報表附表4病原學檢測結(jié)果一覽表附件1IgM捕捉ELISA法（MacELISA）檢測出血熱IgM抗體附件2IgM捕獲法膠體金標記試紙條快速檢測IgM抗體附件3免疫熒光法（IFA）檢測人血清IgG抗體附件4酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清IgG抗體附件5VeroE6或Vero細胞分離漢坦病毒附件6RT-PCR檢測漢坦病毒基因及分型附件7交叉保護中和實驗附件8免疫熒光法檢測鼠肺抗原附件9酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）雙抗原夾心法檢測血清總抗體附表1出血熱個案調(diào)查表縣（市）名稱：國標碼：□□□□□□病例編號：□□□□□一、基本情況1.患者姓名：_________（如患者年齡<14歲，則家長姓名：_____________）2.性別：1男，2女□3.年齡：_____歲□□□4.民族：1漢族，2壯族，3維吾爾族，4其他少數(shù)民族□5.職業(yè)：□（1）幼托兒童（2）散居兒童（3）學生（4）教師（5）保育保姆（6）飲食從業(yè)人員（7）商業(yè)服務(wù)（8）醫(yī)務(wù)人員（9）工人（10）民工（11）農(nóng)民（12）牧民（13）漁（船）民（14）干部職員（15）離退人員（16）家務(wù)待業(yè)（17）其他6．所在單位：___________________________________；聯(lián)系：_________________7．家庭住址：____?。ㄗ灾螀^(qū)/直轄市）____縣（市區(qū)）_____鄉(xiāng)（鎮(zhèn)/居委會）____村（街道）二、發(fā)病情況1.發(fā)病日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□2.就診日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□3.發(fā)病地點：_________________________________________4.住院醫(yī)院：____________________5.住院號：_____________________□□□□□□6.住院日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□7.出院日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□8.入院診斷：□1出血熱疑似病例，2臨床診斷病例，3實驗室確診病例，4其他9、臨床診斷日期：_______年______月_______日□□□□/□□/□□10.出院診斷：□1出血熱疑似病例，2臨床診斷病例，3實驗室確診病例，4其他11．臨床分型：1輕型，2中型，3重型，4危重型□12.轉(zhuǎn)歸：1痊愈，2好轉(zhuǎn)，3死亡（日期：_______年____月____日）□三、癥狀和體征及一般實驗室檢查1.起病急：1是，0否□2.乏力：1有，0無□3.發(fā)熱：1有，0無□4.頭痛：1有，0無□5.腰痛：1有，0無□6.眼眶痛：1有，0無□7.臉紅：1有，0無□8.頸紅：1有，0無□9.胸紅：1有，0無□10.關(guān)節(jié)痛：1有，2無□11.全身痛：1有，2無□12.腹痛：1有，2無□13.腹瀉：1有，2無□14.便秘：1有，2無□15.惡心：1有，2無□16.嘔吐：1有，2無□17.結(jié)膜充血：:1有，2無□18.眼瞼浮腫：1有，2無□19.黃疸：1有，2無□20.腋下/上臂/胸部或其它部位有無皮膚出血點：1有，2無□如有，則出血點為：1散在，2條/線狀，3簇狀，4其它_________□21.口腔、鼻腔等處粘膜有無出血點：1有，2無□22.少尿或無尿：1有，2無□23.低血壓：1有，2無□24.休克：1有，2無□25.白細胞計數(shù)：1正常，2增多，3減少，4未做此項檢查□26.血小板減少：1有，2無，3未做此項檢查□27.尿蛋白：1陽性，2陰性，3未做此項檢查，4不詳□28.有無尿膜狀物/管型尿/血尿：1有，2無□29.束臂試驗：1陽性，2陰性，3未做此項檢查，4不詳□30.出血時間：1正常，2延長，3縮短，4未做此項檢查，5不詳□31.凝血時間：1正常，2延長，3縮短，4未做此項檢查，5不詳□四、血清學及病原學檢測結(jié)果（未做者請注明為“未做”）項目標本采集時間檢測方法檢測結(jié)果出血熱抗體IgGIgM漢坦病毒分離五、既往史及家庭情況1.既往是否患過此病：1是，0否，9不詳□如是，診斷單位：______，時間：______年____月____日□□□□/□□/□□2．食物、糧食有無防鼠設(shè)備：1有，0無，9不詳□3.流行性出血熱疫苗預防接種史：1有，0無，9不詳□如有，最近一次接種時間：______年____月____日□□□□/□□/□□4.有無家庭其他成員出現(xiàn)過類似癥狀：1有，0無，9不詳□如有，最近一例發(fā)病時間（患者除外）：____年____月____日□□□□/□□/□□5.房內(nèi)有無鼠：1有，0無□6.院內(nèi)有無雜物、草堆等：1有，0無□六、接觸史及有關(guān)因素調(diào)查1.發(fā)病前2個月內(nèi)是否有外出（或旅游）史：1是，2否□如是，到何地：___________；外出時間：天□□返回時間：____年____月____日□□□□/□□/□□2.發(fā)病前1月內(nèi)是否接觸鼠類：1是，2否，9不詳□如為1，接觸方式：1挖鼠洞，2拿鼠，3鼠咬，4鼠尿，5鼠糞，□6鼠血污染手7手被鼠夾打傷8其他3.發(fā)病前1月內(nèi)是否有昆蟲叮咬史：1是，2否，9不詳□4.發(fā)病前1月內(nèi)是否吃過被鼠排泄物污染的食物：1是，2否，9不詳□5.發(fā)病前1月內(nèi)是否在野外喝過溝（塘）水：1是，2否，9不詳□6.發(fā)病前1月內(nèi)是否在鼠洞附近坐臥：1是，2否，9不詳□7.發(fā)病前1月內(nèi)是否在場院禾草上坐臥：1是，2否，9不詳□8.發(fā)病前1月內(nèi)是否在野外住宿：1是，2否，9不詳□如是，具體地點：；其附近有無鼠、鼠洞或鼠排泄物：1是，2否，9不詳□鋪的類型：1床，2土炕，3地鋪，4其他□9．工作場所有無鼠或鼠排泄物：1有，2無，9不詳□10．發(fā)病前1月內(nèi)是否接觸過出血熱病人血/尿：1有，2無，9不詳□（病例編號填寫說明：年號（兩位數(shù)）、流水號（后邊三位））調(diào)查日期：______年___月___日調(diào)查地點：調(diào)查者：附表2腎綜合征出血熱監(jiān)測宿主動物調(diào)查統(tǒng)計報表監(jiān)測點名稱：監(jiān)測點編號：□□□□□□捕鼠時間：____年____月____日□□□□/□□/□□捕鼠地點：1居民區(qū)，2野外（A田野，B山林，C草原，D河堤，E其他）□收夾數(shù)：夾次□□□捕鼠總數(shù)：只□□□總鼠密度：％□□主要鼠種及構(gòu)成情況鼠種鼠數(shù)構(gòu)成（％）鼠種鼠數(shù)構(gòu)成（％）黑線姬鼠褐家鼠大林姬鼠小家鼠黑線倉鼠大倉鼠黃毛鼠黃胸鼠填表時間：______年___月___日單位（蓋章）：___________________________________；填表人：____________________附表3腎綜合征出血熱監(jiān)測宿主動物感染情況報表監(jiān)測點名稱：監(jiān)測點編號：□□□□□□捕鼠時間：____年____月____日□□□□/□□/□□捕鼠地點：1居民區(qū)，2野外（A田野，B山林，C草原，D河堤，E其他□捕鼠總數(shù)：只□□□感染率：％□□主要鼠種及感染情況鼠種鼠數(shù)抗原陽性數(shù)抗原陽性率（％）抗體陽性數(shù)抗體陽性率（％）黑線姬鼠褐家鼠大林姬鼠小家鼠大倉鼠黑線倉鼠黃毛鼠黃胸鼠填表時間：______年___月___日單位（蓋章）：___________________________________；填表人：___________________附表4腎綜合征出血熱監(jiān)測病原學檢測結(jié)果一覽表監(jiān)測點名稱：國標碼：□□□□□□病例編號標本類型采集日期采集人檢測結(jié)果型別檢測日期檢測人核酸檢測病毒分離序列測定注：對于核酸檢測中的序列測定，報送結(jié)果中應(yīng)包括原始測序彩圖文件和序列文件的電子版拷貝。填表時間：______年___月___日單位（蓋章）：___________________________________；填表人：_________________附件1IgM捕捉ELISA法（MacELISA）檢測出血熱IgM抗體本試劑盒系采用抗人μ鏈捕獲人血清IgM抗體，加辣根過氧化物酶－病毒抗原標記物，用以檢測出血熱特異性IgM抗體。具有較高的敏感性、特異性和重復性。特別適用于出血熱的早期特異性診斷及其它實驗性研究。本試劑盒為96人份/包裝。試驗材料：（1）抗人IgM抗體（μ鏈）：用pH9.5的包被液包被酶標板（2）凍干陽性血清/凍干陰性血清1支，0.2ml/支，工作濃度為1：10；（3）凍干辣根過氧化物酶－病毒抗原標記物1支，0.5ml/支，工作濃度為1：20；（4）凍干小牛血清1支，1ml/支；（5）濃縮洗液（10倍濃縮）1瓶，50ml；（標本稀釋液為含5%小牛血清原倍洗液）；（6）A/B顯色液和終止液各1瓶。（凍干試劑先用相應(yīng)量的去離子水溶解，然后臨用前根據(jù)所需按工作濃度稀釋使用，余下的放-20℃保存）（7）終止液：4NH2SO4（8）酶標儀。檢測步驟：（1）將待檢血清用稀釋液100倍稀釋，加入已包被抗人μ鏈抗體的酶標板一孔中，100μl/孔，同時加入已1：10稀釋的陽性血清/陰性血清對照各一孔，100μl/孔，置37℃水浴孵育1小時。（2）棄去血清，用PBS－T漂洗5遍，甩干。（3）將凍干辣根過氧化物酶－病毒抗原標記物1：10稀釋后，加入反應(yīng)板相應(yīng)孔內(nèi)，100μl/孔，37℃水浴孵育1小時。（4）棄去酶標抗體，用洗滌液洗滌6次，甩干。（5）加顯色液:于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B液各一滴，37℃，避光3～5分鐘。（6）加終止液（4NH2SO4）于每反應(yīng)孔，一滴/孔。結(jié)果判斷：（1）目測方法：陽性對照孔呈明顯藍色，陰性對照孔呈無色，對照成立；若待檢血清孔呈明顯淡藍色或深藍色（TMB），則標本為出血熱IgM抗體陽性，反之陰性。（2）酶聯(lián)免疫檢測儀檢測：于450nm（TMB）陽性對照孔OD值/陰性對照孔OD值,即P/N≥2.1，對照成立；若待檢血清孔OD值與陰性對照孔OD比值≥2.1，則標本為流行性出血熱IgM抗體陽性，反之陰性。（陰性對照孔OD值小于0.05按0.05記，若大于0.05按實際數(shù)值計算）意義：陽性結(jié)果，表明患者新近漢坦病毒感染，用于出血熱早期診斷。附件2IgM捕獲法膠體金標記試紙條快速檢測IgM抗體適用對象：本產(chǎn)品適用于人血清或血漿中出血熱病毒IgM抗體的快速檢測。檢測意義：檢測出血熱病毒IgM抗體對于早期診斷出血熱急性感染有重要指導意義。儲存條件和有效期：室溫或冰箱（4-30℃）密封保存，有效期18個月。注意事項：1.僅供專業(yè)人士使用2.嚴格按照說明書操作3.有效期內(nèi)使用，密封保存4.樣品中的脂質(zhì)、溶血及污染的的樣品有可能導致錯誤的結(jié)果樣品收集和保存：采取靜脈血于干凈未加抗凝劑（若收集血漿則加入抗凝劑）的容器內(nèi)，靜置使血凝固，分離血清備檢測，可于4℃冰箱內(nèi)保存2周；如不能及時檢測可將血清置于冰箱內(nèi)冷凍或冷藏。檢測前復溫并混勻。避免反復凍融標本。操作步驟：1.如果試劑盒儲存于4℃冰箱，請將所有實驗用試劑與器材取出并平衡至室溫2.打開密封的鋁箔袋，取出試劑盒，平放于水平桌面上，做好標記3.用滴管或加樣器從盛有血清或血漿的試管中取2-3滴或100l-150l樣品滴加于測試盒上的樣品孔內(nèi)，于15分鐘內(nèi)觀察測試結(jié)果結(jié)果判斷：陽性：可見質(zhì)控線與實驗線2條紫紅色帶陰性：只有一條質(zhì)控線出現(xiàn)無效：如果未能觀察到質(zhì)控線出現(xiàn)，則無論是否有實驗線顯示，均為無效，應(yīng)重新檢測注意：陽性結(jié)果最早1～2分鐘即可顯示出來，但陰性結(jié)果必須等到15分鐘才可判定。附件3免疫熒光法（IFA）檢測人血清IgG抗體試驗材料：（1）抗原片：家鼠型和姬鼠型漢坦病毒標準毒株感染VeroE6或Vero細胞制備，低溫干燥保存；（2）陽、陰性對照：單克隆抗體或確診陽性患者恢復期血清（陽性對照）、陰性血清；（3）羊抗人（或兔抗人）IgG熒光抗體；（4）常用稀釋液：pH7.2～7.4PBS、伊文思蘭等；（5）熒光顯微鏡。檢測步驟：（1）用pH7.4，0.02mol/LPBS稀釋待檢血清，從1:20開始做2倍或4倍連續(xù)稀釋至需要的稀釋度。（2）取出抗原片，用蒸餾水漂洗后，冷風吹干。（3）用加樣器依次從高稀釋度到低稀釋度逐個加入已稀釋的待檢血清，加入量以覆蓋細胞抗原面為準（若為雙份血清，最好上排為急性期血清，下排為恢復期血清），在37℃水浴箱濕盒孵育30～40分鐘（每次試驗同時設(shè)陽、陰性對照）。（4）用PBS震蕩洗滌3次，每次5分鐘，再用蒸餾水洗滌1次脫鹽，冷風吹干。（5）用含1：3萬的伊文思蘭PBS按工作濃度稀釋熒光結(jié)合物，滴加各孔（以覆蓋細胞抗原面為準），在37℃水浴箱濕盒孵育30分鐘，然后同（4）洗滌、漂洗、吹干。（6）熒光顯微鏡觀察結(jié)果。結(jié)果判斷：細胞內(nèi)病毒特異性熒光為黃綠色顆粒，分布在感染細胞的胞漿內(nèi)。根據(jù)特異性熒光顆粒多少、熒光亮度、陽性細胞在細胞總數(shù)中所占比例，可將免疫熒光反應(yīng)大致區(qū)分為1～4個“+”?？蓞⒖缄栃约毎麛?shù)：<25%為“+”，25%～50%為“++”，51%～75%為“+++”，>75%為“++++”；無特異性熒光者為“—”（陰性）。檢測抗體滴度時，以能觀察到明顯特異性熒光反應(yīng)（>“+”）最高血清稀釋度的倒數(shù)表示。意義：陽性結(jié)果，表明曾受到漢坦病毒感染，>1：20有診斷參考意義；恢復期血清抗體滴度比急性期抗體滴度有4倍或4倍以上升高則可確診。附件4酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清IgG抗體試驗材料：（1）純化的重組漢坦病毒核蛋白抗原預包被酶標板：（2）辣根過氧化物酶標記的抗人IgG抗體；（3）緩沖液：包被液：pH9.6碳酸緩沖液；稀釋液：pH7.4PBS（含5%脫脂奶）洗滌液：pH7.4PBS－T（0.05％吐溫－20）；（4）顯色液：A/B液（5）終止液：4NH2SO4（6）酶標板、酶標儀。檢測步驟：（1）將待檢血清用稀釋液從1：100開始作2倍連續(xù)稀釋，加入抗原孔，100μl/孔，同時設(shè)陰、陽性對照，37℃水浴1小時；（5）棄去血清，用洗滌液洗滌5～6次；（6）加酶結(jié)合物，用稀釋液按工作濃度稀釋，100μl/孔，37℃水浴1小時；（7）棄去酶標抗體，用洗滌液洗滌6次，甩干；（8）加顯色液：于各反應(yīng)孔內(nèi)加A/B液各一滴，37℃，避光3～5分鐘；（9）加終止液于每反應(yīng)孔，一滴/孔。結(jié)果判斷：于450nm（TMB）陽性對照孔OD值/陰性對照孔OD值，即P/N≥2.1，對照成立；若待檢血清孔OD值與陰性對照孔OD比值≥2.1，則標本為出血熱IgG抗體陽性，反之陰性。（陰性對照孔OD值小于0.05按0.05記，若大于0.05按實際數(shù)值計算）意義：陽性結(jié)果，表明曾受到漢坦病毒感染，>1：100有診斷參考意義；恢復期血清抗體滴度比急性期抗體滴度有4倍或4倍以上升高則可確診。附件5VeroE6或Vero細胞分離漢坦病毒標本：（1）患者血清：無菌采集發(fā)病后5日內(nèi)靜脈血3ml，置冰壺中，于實驗室中分離血清，接種細胞培養(yǎng)；不能及時接種細胞者可置-70℃保存。污染的血清要先用雙抗（青霉素、鏈霉素，最終濃度各500000U/mL），4℃2小時處理后接種細胞。（2）鼠肺：生理鹽水沖洗數(shù)次后，用研磨器研碎，每份加0.5mlHank’s液，2000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，取上清加雙抗（青霉素、鏈霉素，最終濃度各1000U/ml），4℃過夜，備用。病毒分離：將培養(yǎng)好的單層細胞上清棄掉，用Hank’s液洗滌2遍，接種用Hank’s液稀釋成10-1的患者血清0.1ml或組織懸液0.2ml。37℃孵箱吸附1小時，補加維持液。37℃培養(yǎng)，培養(yǎng)至第7～10天刮取細胞點抗原片，按附件5方法進行鑒定。陰性者需盲傳3代。附件6RT-PCR檢測漢坦病毒基因及分型材料：（1）急性期病人血清、鼠肺、鼠血或分離的漢坦病毒（2）引物：引物序列（5’～3’）位置片段（bp）逆轉(zhuǎn)錄引物TAGTAGTAGACTCC1~14LMS通用外引物AAAGTAGGTGITAYATCYTIACAATGTGG1910~1939M(+)GTACAICCTGTRCCIACCCC2373~2354M(-)型特異性引物漢灘病毒GAATCGATACTGTGGGCTGCAAGTGC1958~1984M(+)GGATTAGAACCCCAGCTCGTCTC2318~2340M(－)漢城病毒GTGGACTCTTCTTCTCATTATT1936~1957M(+)TGGGCAATCTGGGGGGTTGCATG2331~2353M(－)S片段引物ATGTTGCCTGGGGIAAAGAGG1200~1220S(+)GCGCACTAGTAGTAGTAGACTCCCTAAAGA1670~1696S(-)方法：（1）病毒RNA的提?。翰捎肨RIzol按說明提取，制備模板RNA；（2）逆轉(zhuǎn)錄、合成cDNA：采用SuperScripTMII或AMV逆轉(zhuǎn)錄酶，按說明書進行；（3）PCR擴增：反應(yīng)條件為95℃預變性10分鐘，94℃60秒、55℃60秒、72℃45秒、擴增30～35個循環(huán)，72℃延伸12分鐘。（4）擴增產(chǎn)物用1～2％瓊脂糖凝膠電泳鑒定。若條帶的分子量與預期片段大小相同，則表明為特異性擴增產(chǎn)物。必要時，可進行：（5）PCR片段的回收和核苷酸序列測定：切下特異分子量條帶，用QIAquick凝膠回收試劑盒回收（按其說明書進行），自動測序儀測序。意義：擴增到特異性條帶可確診漢坦病毒并明確其型別，序列測定還可以對漢坦病毒的變異情況進行研究。附件7交叉保護中和