動物遺傳育種學實驗課件2 實驗二果蠅的形態(tài)培養(yǎng)和雜交方法

實驗二果蠅的形態(tài)、培養(yǎng)及雜交中國海洋大學水產(chǎn)學院遺傳育種學實驗一、實驗目的二、實驗原理三、實驗材料、器具及試劑四、果蠅的形態(tài)和生活史五、果蠅的培養(yǎng)六、雜交方法七、作業(yè)一、實驗目的1、了解果蠅生活史，觀察各發(fā)育階段的形態(tài)特征。2、掌握用肉眼（借以放大鏡、顯微鏡）鑒別雌雄果蠅的方法，認識一些常用突變性狀。3、初步了解實驗室飼養(yǎng)果蠅的常識方法和雜交方法二、實驗對象果蠅為完全變態(tài)的昆蟲,具有生長迅速，生活史短（12天）、突變性狀多、已定位的基因數(shù)多、染色體數(shù)目少（2n=8）。繁殖率高、產(chǎn)卵量大（400～500/只）和飼養(yǎng)簡便等特點在基因分離、連鎖交換、染色體畸變以及基因的表達與調(diào)控等方面，利用果蠅可進行廣泛而深入的研究

三、實驗材料、器具及試劑

1、材料果蠅(Drosophilamelanogaster)的各個品系

2、藥品：乙醚，培養(yǎng)基

3、器具顯微鏡、體視顯微鏡、麻醉瓶、白磁磚、毛筆、鑷子四、果蠅的形態(tài)和生活史外形身體分為頭、胸、腹三部分頭部有觸角、復眼等胸部有胸足，翅膀和剛毛等，腹部有條紋和色斑等。生活史生活史與溫度有密切的關系。30℃以上造成果蠅不育或死亡。10℃以下使生活史延長，生活力降低。飼養(yǎng)果蠅的最適溫度為20℃-25℃。生活史分為卵、幼蟲、蛹和成蟲4個階段，在25℃的條件下，果蠅從卵到成蟲約為10天。返回五、果蠅的培養(yǎng)1、培養(yǎng)基的配制步驟1.洋菜1.5g，紅糖13g，玉米粉17g，水150ml。取75ml水加入洋菜和紅糖，另75ml水中加入玉米粉，待洋菜完全熔化后，將調(diào)好的玉米粉倒入，不斷攪拌，煮沸數(shù)分鐘，待成稀粥狀，滴1ml丙酸，離火，攪拌均勻即可。2.分裝：將熱的玉米培養(yǎng)基倒入已消毒的培養(yǎng)瓶中，厚度為1-2cm，注意勿將培養(yǎng)基沾在瓶口處。待冷卻后，用棉球擦去瓶壁上的水珠，，再撒上少量酵母粉，并插一個三角形紙簽，最后塞上消毒過的棉塞，即可用來培養(yǎng)果蠅。返回六、雜交方法1、麻醉取種：對果蠅進行檢查時，用乙醚麻醉。取一麻醉瓶，瓶口應與培養(yǎng)瓶大小相仿，取一棉花塞，在塞入瓶口的一面滴加3滴乙醚（注意不要讓乙醚流進瓶內(nèi)，麻醉瓶要保持干燥，否則會粘住果蠅翅膀，影響觀察）。麻醉果蠅時，1）先輕拍長有果蠅的培養(yǎng)瓶的瓶壁，使果蠅全部震落在培養(yǎng)瓶底部，2）然后迅速打開培養(yǎng)瓶的棉塞，扣上麻醉瓶，3）將兩瓶倒過來，把果蠅倒入去蓋的麻醉瓶中，4）拿掉培養(yǎng)瓶，并立即用滴好乙醚的棉塞蓋好麻醉瓶，待果蠅全部昏迷后，倒在白瓷板上進行觀察。注意：過度麻醉將導致果蠅死亡。

果蠅操作方法進行雜交試驗時，為避免麻醉的果蠅直接掉落于培養(yǎng)基表面而粘著于培養(yǎng)基表面致死，可將培養(yǎng)瓶橫放，將麻醉的果蠅用毛筆掃于瓶壁，待其蘇醒后再將培養(yǎng)瓶正立果蠅計數(shù)取一白紙，沿對角線對折然后展平，平置于桌面，將麻醉的果蠅倒于對角線折痕上，以尺、毛筆或解剖針撥弄果蠅使其均勻分散于對角線折痕上，然后沿對角線將雌雄果蠅分類撥入各側(cè)。再麻醉觀察或計數(shù)過程中，果蠅可能蘇醒，可準備一玻璃培養(yǎng)皿，內(nèi)以膠帶貼一小塊棉球，滴入適量乙醚，培養(yǎng)皿口朝下置于一旁備用，如見果蠅翻身走動可將培養(yǎng)皿口朝下，蓋于果蠅上方待其麻醉后再移開。

果蠅具有豐富的外表型態(tài)差異，包括眼色、眼形、翅形，剛毛形狀與數(shù)目，請利用上課所提供的材料，比對下列圖觀察性別區(qū)分為進行果蠅雜交試驗所必須，務必熟悉。

果蠅形態(tài)觀察1）雌雄果蠅的區(qū)別：2）果蠅的形狀觀察雌雄果蠅主要特征性別形態(tài)特征雌

蠅（♀）雄

蠅（♂）體

型較大較小腹部末端稍尖，無黑斑鈍圓，有黑斑背部條紋5條3條，最后一條寬且延伸至腹面，呈明顯黑斑)腹片數(shù)６片４片性梳無有，位于前腿跗節(jié)上外生殖器外觀簡單，低倍鏡下明顯看到陰道板和肛上板外觀復雜，低倍鏡下明顯看到生殖弧，肛上板及陰莖（剛孵出的幼蠅更清楚）果蠅雌雄外形判別

（體形大?。┐菩?/p>

雄：4節(jié)，腹底部為交尾器，呈現(xiàn)黑色圓形外觀

雌：6節(jié)，腹底部為產(chǎn)卵管，呈現(xiàn)圓錐狀凸出

腹部體節(jié)數(shù)目：雄果蠅在前肢先端第二節(jié)具有性梳野生型：

體色灰，翅膀呈圓卵型，靜止時平放交叉重疊，長度約為腹部長度的兩倍

突變型：小翅（m）突變型：卷翅（Cy）突變型：殘翅（vg）野生型：眼睛顏色為磚紅色，飽滿圓形

突變型：白眼（w）突變型：墨黑眼（se）野生型：剛毛——頭胸部以及復眼的周圍具有平直，先端略彎的長型粗黑硬毛

卷剛毛

野生型(翅膀有橫隔脈)突變型：無橫隔脈（cv）突變型：黃體（y）突變型

黑檀體(e)果蠅常見突變性狀突變性狀基因符號染色體號性狀特征棒眼B1復眼呈狹窄垂直棒形，小眼數(shù)少褐眼bw2眼呈褐色卷曲翅Cy2翅膀向上卷曲，純合致死小翅m1翅膀小，長度不超過身體白眼w1復眼白色黑檀體e3身體呈烏木色，黑亮黑體b2體黑色，比黑檀體深黃體y1全身呈淺橙黃色殘翅vg2翅明顯退化，部分殘留，不能飛叉毛f1毛和剛毛分叉且彎曲猩紅眼st3復眼呈明亮猩紅色墨色眼se3羽化時眼呈褐色并深化成墨色步驟和方法果蠅生活史四個時期的觀察果蠅成蟲外形的觀察和雌雄性鑒別突變型的誘變及觀察將所要觀察的果蠅輕度麻醉，觀察后再分別裝入原培養(yǎng)瓶中飼養(yǎng)，貼上標簽，寫明品系、日期、實驗者姓名。飼養(yǎng)兩周后供下次實驗使用思考（雜交實驗中要注意事項）：1)雌體親本必須是處女蠅，為什么？2)為什么當子蠅開始孵化以前(即雜交后一星期內(nèi))，須倒出親體？3)子代計數(shù)為什么要在雜交后20天之內(nèi)進行？七、作業(yè)1、解剖鏡下觀察比較雌雄果蠅成體的外形和背腹面，并用顯微鏡觀察其第一對足