《斑蘭葉 組培快繁技術(shù)規(guī)程》-編制說明

《斑蘭葉組培快繁技術(shù)規(guī)程》海南省地方標(biāo)準(zhǔn)《斑蘭葉組培快繁技術(shù)規(guī)程》起草工作組2022年12月2《斑蘭葉組培快繁技術(shù)規(guī)程》地方標(biāo)準(zhǔn)編制說明2021年11月，中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所提出《斑蘭葉組培快繁技術(shù)規(guī)程》地方標(biāo)準(zhǔn)的立項(xiàng)申請(qǐng)，海南省市場(chǎng)監(jiān)督管理局將其列入2021年度海南省第三批地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目計(jì)劃，并印發(fā)《關(guān)于下達(dá)海南省2021年第三批地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目計(jì)劃的通知》,批準(zhǔn)由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所負(fù)責(zé)《斑蘭葉組培快繁技術(shù)規(guī)程》(編號(hào)：2021-Z074)地方中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所、海南興科熱帶作物工程技術(shù)有限公序號(hào)姓名性別1吉訓(xùn)志男助理研究員中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所組織、協(xié)調(diào)、2張昂男助理研究員中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所組培快繁3魚歡女研究員中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所組培快繁4秦曉威男副研究員中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所/海南熱作高科技研究院有限公司5女副研究員海南興科熱帶作物工程技術(shù)有限公司資料收集整理6賀書珍女助理研究員海南興科熱帶作物工程技術(shù)有限公司組培快繁7男研究員海南興科熱帶作物工程技術(shù)有限公司組培快繁7男研究員中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所組培快繁8男研究員中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所資料收集整理9鄧文明男中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所組培快繁廖子榮男副研究員海南熱作高科技研究院股份有限公司資料收集整理女副研究員中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所組培快繁閆林女研究員中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所組培快繁32021年11月，收到《關(guān)于下達(dá)海南省2021年第三批地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂項(xiàng)目4查閱中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)目錄的一些相關(guān)行業(yè)資料，收集在充分調(diào)研萬寧市、儋州市、海口市等市縣的斑蘭葉組培快繁情況，參考2022年7月形成《斑蘭葉組培快繁技術(shù)規(guī)程》征求意見稿。2022年11月3日，在海口市召開標(biāo)準(zhǔn)征求意見會(huì)議，提出建議19條，其中建議將標(biāo)準(zhǔn)文件名稱由《斑蘭葉組培快繁技術(shù)規(guī)程》修改為《斑蘭葉(香露兜)組培快繁技術(shù)規(guī)程》。對(duì)征求到的意見進(jìn)行匯總、整理，進(jìn)一步修改完善，于2022年11月底形成《斑蘭葉(香露兜)組培快繁技術(shù)規(guī)程》送審稿。(一)制定標(biāo)準(zhǔn)的原則本文件按GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)各方的意見，制定《斑蘭葉組培快繁技術(shù)規(guī)程》,確保本文件具有先進(jìn)性、適(二)制定標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)5在充分調(diào)研萬寧市、儋州市、海口市等市縣的斑蘭葉組培快繁情況，參考(三)與有關(guān)的現(xiàn)行法律、法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系在標(biāo)準(zhǔn)的制定過程中嚴(yán)格貫徹國家有關(guān)方針、政策、法律和規(guī)章，經(jīng)過國(一)主要條款的說明2021年至2022年多次赴儋州兩院、中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院?？趯?shí)驗(yàn)站、興隆熱帶合了斑蘭葉組培快繁技術(shù)的實(shí)際情況，認(rèn)真訪問并征求斑蘭葉生產(chǎn)組培苗的意(二)主要技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、試驗(yàn)驗(yàn)證的論述1組培工廠要求(1)組培車間的設(shè)計(jì)6更衣室、接種室、培養(yǎng)室、煉苗室等，根據(jù)生產(chǎn)工藝流程(生產(chǎn)流水線)有序排(2)儀器設(shè)施加強(qiáng)設(shè)施建設(shè)是組培車間健康運(yùn)行的關(guān)鍵，儀器設(shè)施應(yīng)配置包括高壓滅菌量移液器、接種器具(電熱殺菌器)、石英玻璃珠、槍狀鑷子、手術(shù)刀柄刀片、切割碟子、溫度計(jì)、光照培養(yǎng)箱、培養(yǎng)架(包括LED燈)、調(diào)速振蕩器、組培瓶、試管、盛裝器皿(燒杯、試劑瓶等)、計(jì)量器皿(量筒、容量瓶等)以及其2接種前準(zhǔn)備(1)培養(yǎng)基配制為方便標(biāo)準(zhǔn)的具體執(zhí)行，在充分調(diào)研和實(shí)踐的基礎(chǔ)上，對(duì)斑蘭葉組培快繁配方及誘導(dǎo)率統(tǒng)計(jì)在表2。培養(yǎng)基C愈傷組織00叢生芽0繼代增殖生根壯苗00(2)培養(yǎng)基、器皿、水的滅菌水滅菌30min,取出冷卻備用。滅菌操作人員應(yīng)持有特種設(shè)備作業(yè)人員證。說明：121℃高壓滅菌15min～20min以充分殺滅培養(yǎng)基內(nèi)的菌類，滅菌(3)接種器材滅菌7使用接種器械滅菌器，接種器械先用75%酒精擦拭，待電熱滅菌器溫度升至250℃~300℃,再將槍狀鑷與解剖刀插入接種用電熱滅菌器中進(jìn)行滅菌，第一次滅菌3min～4min,以后每次接種后輪說明：接種前對(duì)接種器材進(jìn)行全面滅菌，能夠降低接種過程中的污染率。(4)超凈工作臺(tái)消毒超凈工作臺(tái)(或潔凈無菌接種室)提前30min打開紫外燈，滅殺菌30min才可進(jìn)入室內(nèi)。用75%酒精擦洗超凈工作臺(tái)臺(tái)面。說明：超凈工作臺(tái)(或潔凈無菌接種室)提前30min打開紫外燈，滅殺菌櫥將紫外燈殺菌產(chǎn)生對(duì)人體也有害的臭氧排出，即15min～20min后人員才可進(jìn)入室內(nèi)。用75%酒精擦洗超凈工作臺(tái)臺(tái)面消毒，以致接種環(huán)(5)接種人員準(zhǔn)備接種人員應(yīng)在更衣室更換拖鞋、穿白大褂(或接種服),戴上帽子和口罩后進(jìn)入接種室(或經(jīng)過風(fēng)淋室后進(jìn)入接種室),操作前和操作中經(jīng)常用75%酒精說明：本文件規(guī)定接種人員應(yīng)在更衣室更換拖鞋、穿白大褂(或接種服),戴上帽子和口罩后進(jìn)入接種室(或經(jīng)過風(fēng)淋室后進(jìn)入接種室),操作前和操作中3外植體采集與滅菌8選擇經(jīng)濟(jì)性狀良好、植株健壯、無病蟲害的優(yōu)良母株老莖上2.0cm～3.0cm的幼嫩側(cè)芽。采芽時(shí)用小刀將側(cè)芽連同母株的芽基部切下，裝入無菌袋，帶回實(shí)驗(yàn)室備用。說明：選擇2年生或3年生生長健壯、無病蟲害的斑蘭葉母株老莖上的2~3cm幼嫩側(cè)芽作為外植體材料。幼嫩組織細(xì)胞具有更強(qiáng)的分化分生能力，更容易培養(yǎng)成功出完整植株。圖1母株圖2外植體將采集的側(cè)芽裝入100ml洗滌瓶，加入3～4滴的70%百菌清乳狀溶液浸泡10min,后用自來水沖洗干凈。轉(zhuǎn)到超凈工作臺(tái)中，用無菌解剖刀和槍狀鑷子，在接種盤上剝?nèi)?cè)芽外圍的葉鞘。用75%酒精浸泡消毒30s后倒出酒精，用無菌蒸餾水沖洗2次，再用1g升汞可溶性粉劑1000倍溶液消毒8min,并不斷搖動(dòng)。消毒完后將升汞溶液倒入回收瓶，再用無菌蒸餾水沖洗4～5次，用無菌濾紙吸干水分。說明：70%百菌清與75%酒精能夠很好的清理外植體表面的污垢及菌類，起到初步表面消毒的目的，而升汞能夠有效地殺滅或抑制內(nèi)生菌，但毒性強(qiáng)，消毒時(shí)間過長會(huì)影響外植體的成活及活性，所有滅菌劑最后都應(yīng)用無菌水沖洗干凈，防止其影響后續(xù)外植體生長。接種時(shí)左手拿組培瓶，右手輕輕取下蓋子，然后用鑷子將培養(yǎng)材料送入瓶中，輕輕一壓與培養(yǎng)基緊密接觸，并使外植體在瓶內(nèi)均勻分布。接種完畢立即蓋上瓶9外植體接種到培養(yǎng)基A,溫度22℃~25℃,暗培養(yǎng)誘導(dǎo)60d～90d。說明：暗培養(yǎng)60天的時(shí)間可從幼嫩側(cè)芽基部獲得愈傷組織，再將愈傷組織愈傷組織接種到培養(yǎng)基B(見附錄A),溫度26℃~28℃,光照強(qiáng)度1000lx～2000lx,光照12h,黑暗12h,誘導(dǎo)40d～60d。圖3愈傷誘導(dǎo)圖4芽誘導(dǎo)養(yǎng)基C(見附錄A)中，宜4株(團(tuán))～5株(團(tuán))/瓶。溫度為26℃~28℃,光照強(qiáng)度10001x～20001x,光照12h,黑暗12h,30d繼代一次。組織，分成單株接種到裝有培養(yǎng)基D(見附錄A)的組培袋中，宜接種10株/袋，封口。光照強(qiáng)度15001x～25001x,光照12h,黑暗12h,30d后檢查幼苗基部圖5增殖培養(yǎng)圖6試管苗包裝5容器苗培育按DB46/T578斑蘭葉(香露兜)種苗繁育技術(shù)規(guī)程的相關(guān)規(guī)定。主要設(shè)說明：詳細(xì)的苗圃地的條件與設(shè)施已在海南省地方標(biāo)準(zhǔn)《斑蘭葉(香露兜)圖7裝滿育苗基質(zhì)并擺放圖8澆濕基質(zhì)凈其根部培養(yǎng)基，用1g生根可溶性粉劑1000倍液浸minmin將生根后的試管苗，剪開組培袋漏出3.0cm～4.0cm寬的開口，煉苗3d~5d,煉苗時(shí)溫度為26℃~28℃,光照強(qiáng)度10001x～1500lx,保持環(huán)境潔凈。6育苗管理噴施葉面肥，30d～60d施肥1次。葉面肥推薦用量為3%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))速溶復(fù)合肥(15-15-15)配制的液態(tài)肥，噴施量以種苗葉片濕潤為宜。更利于種苗的吸收與生長。病蟲害防治按海南省地方標(biāo)準(zhǔn)《林下間作斑蘭葉(香露兜)技術(shù)規(guī)程》的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。放置在遮光率60%～80%的可調(diào)節(jié)遮陽棚內(nèi)遮光。通過覆膜、水簾與冷熱風(fēng)機(jī)等方式調(diào)節(jié)，養(yǎng)護(hù)溫度為25℃~32℃。說明：剛移栽的容器苗比較孱弱，需要在室內(nèi)進(jìn)行養(yǎng)護(hù)。由于養(yǎng)護(hù)期在107出圃說明：容器苗生長期即煉苗期長，斑蘭葉對(duì)溫度變化敏感，因此在將近8按DB46/TAAA斑蘭葉組培苗的相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。說明：試管苗容器完好，培養(yǎng)基完整不松散，植株淡綠，生長旺盛，苗高率。容器苗育苗容器完好，育苗基質(zhì)完整不松散，植圖10組培苗煉苗移栽圖11組培苗出圃無七、采用國際標(biāo)準(zhǔn)或國外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的