基因工程制藥生物技術(shù)制藥

基因工程制藥生物技術(shù)制藥第1頁/共47頁第一節(jié)概述意義：自20世界70年代基因工程誕生以來，最先應(yīng)用基因工程技術(shù)且目前最為活躍的研究領(lǐng)域便是醫(yī)藥科學(xué)?；蚬こ碳夹g(shù)的迅猛發(fā)展使人們已能夠十分方便有效地生產(chǎn)許多以往難以大量獲得的生物活性物質(zhì)，甚至可以創(chuàng)造出自然界中不存在的全新物質(zhì)。1982年第一個基因重組產(chǎn)品——人胰島素在美國問世，吸引和激勵了大批科學(xué)家利用基因工程技術(shù)研制新藥品，迄今累計已有近30種基因工程藥物投入市場，產(chǎn)生了巨大的社會效益和經(jīng)濟效益。第2頁/共47頁基因工程技術(shù)可生產(chǎn)的藥物和制劑包括：（1）免疫性蛋白，如各種抗原和單克隆抗體；（2）細(xì)胞因子，如各種干擾素、白細(xì)胞介素、集落刺激生長因子、表皮生長因子、凝血因子；（3）激素，如胰島素、生長激素、心素納；（4）酶類，如尿激酶、鏈激酶、葡激酶、組織型纖維蛋白溶酶原激活劑、超氧化物歧化酶。第3頁/共47頁基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥物的優(yōu)點：（1）利用基因工程技術(shù)可大量生產(chǎn)過去難以獲得的生理活性蛋白質(zhì)和多肽，為臨床使用提供有效保障；（2）可以提供足夠數(shù)量的生理活性物質(zhì)，以便對其生理、生化和結(jié)構(gòu)進行深入的研究，從而擴大這些物質(zhì)的引用范圍；（3）利用基因工程技術(shù)可以發(fā)現(xiàn)，挖掘更多的內(nèi)源性生理活性物質(zhì)；（4）內(nèi)源生理活性物質(zhì)在作為藥物使用存放的不足之處，可以通過基因工程和蛋白質(zhì)工程進行改造和去;（5）利用基因工程技術(shù)可獲得新型化合物，擴大藥物篩選來源。第4頁/共47頁我國基因工程藥物研究和開發(fā)：起步較晚，基礎(chǔ)較差。α1b型基因工程干擾素是由我國自行研制開發(fā)的具有國際先進水平的生物高科技成果，于1997年

通過Ⅲ期臨床，并獲得國家一類新藥證書，成為“863”計劃生物技術(shù)領(lǐng)域第一個實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的基因工程藥物。目前我國已批準(zhǔn)12種基因工程藥物和疫苗上市，在研究開發(fā)中的也有10余種。第5頁/共47頁第二節(jié)基因工程藥物生產(chǎn)的基本過程定義：基因工程技術(shù)是指將重組對象的目的基因插入載體，拼接后轉(zhuǎn)入新的宿主細(xì)胞，構(gòu)建成工程菌（或細(xì)胞），實現(xiàn)遺傳物質(zhì)的重新組合，并使目的基因再工程菌內(nèi)進行復(fù)制和表達(dá)?；蚬こ趟幬镏圃斓囊话懔鞒蹋海?）獲得目的基因；（2）組建重組質(zhì)粒；（3）構(gòu)建基因工程菌；（4）培養(yǎng)工程菌；（5）產(chǎn)物分離純化；（6）除菌過濾；（7）半成品檢定；（8）包裝。第6頁/共47頁1、上游階段：首先獲得目的基因，然后用限制性內(nèi)切酶和連接酶將其插入適當(dāng)?shù)妮d體質(zhì)?；蚴删w中并轉(zhuǎn)大腸桿菌或其它宿主菌（細(xì)胞），以便大量復(fù)制目的基因。選擇基因表達(dá)系統(tǒng)主要考慮的是保證表達(dá)功能，其次要考慮的是表達(dá)量的多少和分離純化的難易。其中的（1）、（2）、（3）步驟屬于上游階段，在實驗室完成。2、下游階段：將實驗室成果產(chǎn)業(yè)化、商品化，它主要包括工程菌大規(guī)模發(fā)酵最佳參數(shù)大的確立，新型生物反應(yīng)器的研制，高效分離介質(zhì)及裝置的開發(fā)，分離純化的優(yōu)化控制，高純度純品的制備技術(shù)，生物傳感器等一系列儀器儀表的設(shè)計和制造，電子計算機的優(yōu)化控制等。上述（4）、（5）、（6）、（7）、（8）等屬于下游階段。第7頁/共47頁第三節(jié)目的基因的獲得一、逆轉(zhuǎn)錄法逆轉(zhuǎn)錄法是先分離純化目的基因的mRNA，再反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后進行cDNA的克隆表達(dá)。1、mRNA的純化mRNA的特點：3’末端含有一多聚腺苷酸組成的末端。方法：親和層析法2、cDNA第一鏈的合成一般mRNA都帶有3’－polyA，所以可以用寡聚dT作為引物，在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下，開始cDNA鏈的合成。用放射性探針法檢測。第8頁/共47頁3、cDNA第二鏈的合成以cDNA第一鏈為模板合成第二鏈。4、cDNA克隆用于cDNA克隆的載體有兩類：質(zhì)粒DNA和噬菌體。又將其分為表達(dá)型載體和非表達(dá)型載體。選用表達(dá)型載體可以增加目的基因的篩選方法，有利于目的基因的篩選。cDNA片段與載體的連接通常采用下面方法：加同聚尾連接：在載體和cDNA的3’末端加上互補的同型多聚酶序列。人工接頭連接：所謂人工接頭是指用人工合成的、連接在目的基因兩端的含有某些限制酶切點的寡核苷酸片斷。第9頁/共47頁5、將重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞6、cDNA文庫的鑒定7、目的cDNA克隆的分離和鑒定（1）核酸探針雜交法（2）免疫反應(yīng)鑒定法逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶反應(yīng)法。該方法是mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈，不需再合成第二鏈，而是在特異引物的協(xié)助下，用PCR法進行擴增，特異地合成目的cDNA鏈，用于重組，克隆。二、化學(xué)合成法前提：較小的蛋白質(zhì)或多肽的編碼基因，必須知道目的基因的核苷酸排列順序，或知道目的蛋白質(zhì)的氨基酸順序，再按相應(yīng)的密碼子推導(dǎo)出DNA的堿基序列。第10頁/共47頁操作：見書限制：一、不能合成太長的基因。二、人工合成基因時，遺傳密碼的簡并會為選擇密碼子帶來很大的困難。三、費用高第11頁/共47頁第四節(jié)基因表達(dá)基因表達(dá)是指結(jié)構(gòu)基因在生物體中的轉(zhuǎn)錄、翻譯以及所有加工過程。基因表達(dá)研究是指外源基因在某種細(xì)胞中的表達(dá)活動，即剪切下一個外源基因片斷，拼接到另一個基因表達(dá)體系中，使其能獲得既有原生物活性又可高產(chǎn)的表達(dá)產(chǎn)物。基因表達(dá)概念的示意圖第12頁/共47頁一、宿主細(xì)胞的選擇宿主細(xì)胞應(yīng)滿足的要求：分類：第一類為原核細(xì)胞，如大腸桿菌等；第二類為真核細(xì)胞，如酵母等。1、原核細(xì)胞（1）大腸桿菌：目前采用最多的原核表達(dá)體系。（2）枯草芽孢桿菌（3）鏈霉菌2、真核細(xì)胞（1）酵母：釀酒酵母應(yīng)用廣泛。（2）絲狀真菌（3）哺乳動物細(xì)胞第13頁/共47頁真核生物和原核生物基因表達(dá)過程示意圖第14頁/共47頁二、大腸桿菌中的基因表達(dá)1、載體表達(dá)載體必須具備的條件：（1）載體能夠獨立的復(fù)制（2）具有靈活的克隆位點和方便的篩選標(biāo)記（3）具有很強的啟動子（4）具有阻遏子（5）有很強的終止子（6）有翻譯的起始信號常用的表達(dá)載體：（1）pBV220系統(tǒng)（2）pET系統(tǒng)第15頁/共47頁幾種常用的大腸桿菌表達(dá)載體第16頁/共47頁2、影響目的基因在大腸桿菌中表達(dá)的因素（1）外源基因的拷貝數(shù)（2）外源基因的表達(dá)效率①啟動子的強弱②核糖體結(jié)合位點③SD序列和起始密碼子ATG的間距④密碼子組成

（3）表達(dá)產(chǎn)物的穩(wěn)定性（4）細(xì)胞的代謝負(fù)荷（5）工程菌的培養(yǎng)條件3、真核基因在大腸桿菌中的表達(dá)形式（1）以融合蛋白的表達(dá)形式表達(dá)藥物基因由一段短的原核多肽和真核蛋白結(jié)合在一起的蛋白質(zhì)，稱為融合蛋白。（2）以非融合蛋白的形式表達(dá)藥物基因（3）分泌型表達(dá)蛋白藥物基因第17頁/共47頁三、酵母中的基因表達(dá)1、載體（1）載體的復(fù)制序列包括YEp類、YRp類、YRp類和YIp類。（2）克隆載體由于從大腸桿菌中制備質(zhì)粒比從酵母中容易，所以酵母質(zhì)粒的加工和制備大部分是通過大腸桿菌進行的。（3）表達(dá)載體包括普通表達(dá)載體和精確表達(dá)載體。

重組酵母表達(dá)質(zhì)粒pPIC9K/VP1的結(jié)構(gòu)示意圖第18頁/共47頁2、影響目的基因在酵母菌中表達(dá)的因素（1）外源基因的拷貝數(shù)（2）外源基因的表達(dá)效率主要與啟動子、分泌信號和終止序列有關(guān)。（3）外源蛋白的糖基化（4）宿主菌株的影響表達(dá)用的酵母宿主菌應(yīng)具備①菌體生長力強。②菌體內(nèi)蛋白酶要較弱。③菌株性能穩(wěn)定。④分泌能力強。四、動物細(xì)胞中的基因表達(dá)第19頁/共47頁第五節(jié)基因工程菌的穩(wěn)定性基因工程菌在傳代過程中經(jīng)常出現(xiàn)質(zhì)粒不穩(wěn)定的現(xiàn)象，又分為分裂不穩(wěn)定和結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。分裂不穩(wěn)定是指工程菌分裂時出現(xiàn)一定比例不含質(zhì)粒子代菌的現(xiàn)象。結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定是指外源基因從質(zhì)粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變。常用的基因工程菌種，以及帶有質(zhì)粒的菌種

第20頁/共47頁第六節(jié)基因工程菌生長代謝的特點對菌體生長的調(diào)控主要有兩種觀點：一種認(rèn)為能量的供應(yīng)決定了菌體的最大比生長速率；另一種認(rèn)為是小分子前體和催化組分等等的限制決定了菌體的最大比生長速率。一、菌體生長與能量的關(guān)系當(dāng)菌體生長所需能量大于菌體有氧代謝所能提供的能量時，菌體往往會產(chǎn)生代謝副產(chǎn)物乙酸。產(chǎn)生乙酸的機制還不完全清楚，一般認(rèn)為是由于呼吸鏈或三羧酸循環(huán)的供能不足，使部分乙酰輔酶A通過轉(zhuǎn)化為乙酸來供能。高濃度的乙酸能明顯抑制菌體的生長。第21頁/共47頁分批培養(yǎng)中選用不同的碳源、補料培養(yǎng)中控制補料速度、連續(xù)培養(yǎng)中控制稀釋速率等培養(yǎng)方法，都能在一定范圍內(nèi)控制菌體的生長，從而控制乙酸的產(chǎn)生，減少它的抑制作用，以實現(xiàn)工程菌的高密度培養(yǎng)和提高重組產(chǎn)物的表達(dá)水平。實質(zhì)：控制菌體的糖酵解速度，使之低于三羧酸循環(huán)和呼吸鏈的最大代謝能力，從而避免乙酰輔酶A的積累和乙酸的產(chǎn)生，以降低供能速度或前體供應(yīng)速度來降低蛋白合成和菌體生長速度。二、菌體生長與前體供應(yīng)的關(guān)系由于菌體中小分子前體量和催化結(jié)構(gòu)是有限的，因而生物大分子和合成處于亞飽和狀態(tài)，限制了菌體的比生長速率?；虮磉_(dá)在各個水平的競爭又是各個基因互相競爭共同的前體和催化結(jié)構(gòu)的結(jié)果。由于基因工程菌質(zhì)粒的復(fù)制和外源基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯需要與宿主第22頁/共47頁細(xì)胞競爭共同的前體和催化結(jié)構(gòu)，從而加劇了這些成分的不足，因而在同樣的培養(yǎng)基中，工程菌的比生長速率往往低于其宿主細(xì)胞，特別是工程菌誘導(dǎo)后，由于外源基因的大量表達(dá)，引起菌體比生長速率下降，甚至生長停滯?！皣?yán)緊反應(yīng)”：當(dāng)氨酰tRNA不足時，核糖體在密碼子上停留，合并稱為“魔點”的ppGpp的結(jié)果。第23頁/共47頁第七節(jié)基因工程菌發(fā)酵基因工程菌的培養(yǎng)過程主要包括：（1）通過搖瓶操作了解工程菌生長的基礎(chǔ)條件，如溫度、pH、培養(yǎng)基各種組分以及碳氮比，分拆表達(dá)產(chǎn)物的合成、積累對受體細(xì)胞的影響；（2）通過培養(yǎng)罐操作確定培養(yǎng)參數(shù)和控制的方案以及順序。一、基因過程菌的培養(yǎng)方式常用的有：補料分批培養(yǎng)、連續(xù)培養(yǎng)、透析培養(yǎng)、固定化培養(yǎng)。1、補料分批培養(yǎng)將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中進行培養(yǎng)，經(jīng)過一段時間后，間歇或連續(xù)地補加新鮮培養(yǎng)基，使菌體進一步生長的培養(yǎng)方式。第24頁/共47頁第七節(jié)基因工程菌發(fā)酵基因工程菌的培養(yǎng)過程主要包括：（1）通過搖瓶操作了解工程菌生長的基礎(chǔ)條件，如溫度、pH、培養(yǎng)基各種組分以及碳氮比，分拆表達(dá)產(chǎn)物的合成、積累對受體細(xì)胞的影響；（2）通過培養(yǎng)罐操作確定培養(yǎng)參數(shù)和控制的方案以及順序。一、基因過程菌的培養(yǎng)方式常用的有：補料分批培養(yǎng)、連續(xù)培養(yǎng)、透析培養(yǎng)、固定化培養(yǎng)。1、補料分批培養(yǎng)將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中進行培養(yǎng)，經(jīng)過一段時間后，間歇或連續(xù)地補加新鮮培養(yǎng)基，使菌體進一步生長的培養(yǎng)方式。第25頁/共47頁2、連續(xù)培養(yǎng)將種子接入發(fā)酵反應(yīng)器中，攪拌培養(yǎng)至一定濃度后，開動進料和出料的蠕動泵，以控制一定稀釋率進行不間斷的培養(yǎng)。3、透析培養(yǎng)利用膜的半透性原理使代謝產(chǎn)物和培養(yǎng)基分離，通過去除培養(yǎng)液中的代謝產(chǎn)物來解除其生產(chǎn)菌的不利影響。4、固定化培養(yǎng)二、基因工程菌的發(fā)酵工藝基因工程菌的發(fā)酵工藝與傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵工藝的區(qū)別：（1）生物材料方面（2）生產(chǎn)目的方面1、培養(yǎng)基的影響常用碳源有葡萄糖、甘油、乳糖、甘露糖、果糖等。第26頁/共47頁常用的氮源有酵母提取物、蛋白胨、酪蛋白水解產(chǎn)物、玉米漿和氨水、硫酸銨、硝酸銨、氯化銨等。另外還要加一些無機鹽、微量元素、維生素、生物素等。對營養(yǎng)缺陷型菌株還要補加相應(yīng)的營養(yǎng)物質(zhì)。培養(yǎng)基及灌注式細(xì)胞培養(yǎng)袋

第27頁/共47頁2、接種量的影響接種量是指移入的種子液體和培養(yǎng)液體積的比例。接種量小，不利于外源基因的表達(dá)，大接種量有利于對基質(zhì)的利用，縮短生長延遲期，并使生產(chǎn)菌能迅速占領(lǐng)整個培養(yǎng)環(huán)境，減少污染機會，但接種量過高又會抑制后期菌體的生長。所以接種量大小取決于生產(chǎn)菌種在發(fā)酵中的生長繁殖速度。3、溫度的影響溫度對基因表達(dá)的調(diào)控作用可發(fā)生在復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯或小分子調(diào)節(jié)分子的合成水平上。在復(fù)制水平上，可通過調(diào)控復(fù)制，改變基因拷貝數(shù)，影響基因表達(dá)；在轉(zhuǎn)錄水平上，可通過影響RNA聚合酶的作用或修飾RNA聚合酶，來調(diào)控基因表達(dá)；溫度也可在mRNA講解和翻譯水平上影響基因表達(dá)，溫度還可能通過細(xì)胞內(nèi)小分子調(diào)節(jié)分子的量而影響基因表達(dá)，也可通過影響細(xì)胞內(nèi)ppGpp量調(diào)控一系列基因表。溫度還影響蛋白質(zhì)的活性和包含體的形成。第28頁/共47頁4、溶解氧的影響溶解氧是工程菌發(fā)酵培養(yǎng)過程中影響菌體代謝的一個重要參數(shù)，對菌體的生長和產(chǎn)物的生成影響很大。外源基因的高效表達(dá)和翻譯需要維持較高水平的DO2值。通常采用調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速的方法，可以改善培養(yǎng)過程中的氧供給，提高活菌產(chǎn)量。5、誘導(dǎo)時機的影響一般在對數(shù)生長期或?qū)?shù)生長后期升溫誘導(dǎo)表達(dá)。6、pH的影響pH對細(xì)胞的正常生長和外源蛋白的高效表達(dá)都有影響，所以應(yīng)根據(jù)工程菌的生長和代謝情況，對pH進行適當(dāng)?shù)恼{(diào)節(jié)?？傊?，工程菌發(fā)酵工藝的優(yōu)化對異源蛋白的表達(dá)關(guān)系重大，必須建立最佳化工藝。第29頁/共47頁三、基因工程菌的培養(yǎng)設(shè)備發(fā)酵罐的組成部分有：發(fā)酵罐體、保證高傳質(zhì)作用的攪拌器、精細(xì)的溫度控制和滅菌系統(tǒng)、空氣無菌過濾裝置、殘留氣體處理裝置、參數(shù)測量與控制系統(tǒng)以及培養(yǎng)液配置及連續(xù)操作裝置等。第30頁/共47頁第八節(jié)基因工程藥物的分離純化許多醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品都是活性肽或蛋白質(zhì)。這些產(chǎn)品的制得具有下列特點：（1）目的產(chǎn)物在初始物料中含量較低（2）含目的產(chǎn)物得初始物料組成復(fù)雜，且影響較大（3）目的產(chǎn)物得穩(wěn)定性差（4）種類繁多（5）應(yīng)用面廣，對其質(zhì)量、純度要求高，甚至要求無菌、無熱原等。因此，為了獲得合格得目的產(chǎn)物，必須建立與上述特點相適應(yīng)的醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品的分離純化工藝。第31頁/共47頁一、建立分離純化工藝的依據(jù)1、含目的產(chǎn)物的起始物料的特點：包括（1）菌種類型及其代謝特性（2）原材料和培養(yǎng)基的來源及其質(zhì)量（3）生產(chǎn)工藝和條件（4）初始物料的物理、化學(xué)和生物學(xué)特性。2、物料中雜質(zhì)的種類和性質(zhì)3、目的產(chǎn)物特性4、產(chǎn)品質(zhì)量的要求二、分離純化的基本過程分離純化是基因工程藥物生產(chǎn)中極其重要的一環(huán)。一般不應(yīng)超過4～5個步驟，包括細(xì)胞破碎、固液分離、濃縮與初步純化、高度純化直至得到純品以及成品加工。流程如圖3—7所示。第32頁/共47頁

重組蛋白表達(dá)及分離純化技術(shù)平臺基因工程藥物分離純化生產(chǎn)裝置

第33頁/共47頁三、分離純化的技術(shù)分離純化技術(shù)應(yīng)滿足下列要求：（1）技術(shù)條件要溫和（2）選擇性要好（3）收率要高（4）兩個技術(shù)之間要能直接銜接（5）整個分離純化過程要快1、細(xì)胞破碎與固液分離：有細(xì)胞收集、細(xì)胞破碎和細(xì)胞碎片分離等步驟。（1）細(xì)胞收集：細(xì)胞收集常用的是離心分離的方法，膜過濾法液逐步得到廣泛應(yīng)用。（2）細(xì)胞破碎：有機械破碎法和非機械破碎法。機械破碎法：高壓勻漿法、超聲破碎法、高速珠磨法、高壓擠壓法非機械破碎法：酶溶法、化學(xué)滲透法、熱處理法、滲透壓沖擊法等。第34頁/共47頁（3）固液分離：離心沉淀是固液分離的主要手段，包括高速離心和超速離心。常用的膜過濾技術(shù)有微濾、超濾和反滲透等。2、目的產(chǎn)物的分離純化主要依賴色譜分離方法。色譜技術(shù)分為離子交換色譜、疏水色譜、反相色譜。親和色譜、凝膠色譜、高壓液相色譜等。蛋白質(zhì)純化方法的設(shè)計通常根據(jù)產(chǎn)物分子的物理、化學(xué)參數(shù)和生物學(xué)特性，他們對分離純化的影響見表3—3。選擇純化方法應(yīng)根據(jù)目的蛋白質(zhì)和雜蛋白的物理、化學(xué)和生物學(xué)方面性質(zhì)的差異，尤其重要的是表面性質(zhì)的差異。第35頁/共47頁（1）離子交換色譜（ionexchangechromatography,IEC）基本原理是通過帶電的溶質(zhì)分分子與離子交換劑中可交換的離子進行交換，從而達(dá)到分離的目的。蛋白質(zhì)的等電點和表面電荷的分布主要影響其離子交換的性能，影響蛋白質(zhì)離子交換色譜保留的其他因素，還有交換基團和交換介質(zhì)的種類、吸附和洗脫的條件等。

第36頁/共47頁（2）反相色譜（reversedphasechromatography,RPC）和疏水色譜（hydrophobicinteractionchromatography,HIC）反相色譜和疏水色譜是根據(jù)蛋白質(zhì)疏水性的差異來分離純化的。第37頁/共47頁（3）親和色譜（affinitychromatography,AC）親和色譜是利用固定化配基與目的蛋白質(zhì)之間特異的生物親和力進行吸附的。親和色譜的過程大致分為3步：第一步配基固定化;第二步吸附目的產(chǎn)物；第三步樣品解吸。第38頁/共47頁（4）凝膠過濾色譜凝膠過濾是以具有空隙大小一定的多孔性凝膠作為分離介質(zhì)，小分子能進入孔內(nèi)，在柱中緩慢移動，而大分子不能進入孔內(nèi)，快速移動，利用這種移動差別可使大分子與小分子分開。3、非蛋白質(zhì)類雜質(zhì)的去除非蛋白質(zhì)類雜質(zhì)不應(yīng)忽視，在純化過程中，需特別注意3種可能存在的非蛋白類雜質(zhì)，它們是DNA、熱原質(zhì)和病毒，常用的分離純化方法見表3—4。（1）DNA的去除（2）熱原質(zhì)的去除（3）病毒的去除第39頁/共47頁四、選擇分離純化方法的依據(jù)1、根據(jù)產(chǎn)物表達(dá)形式來選擇2、根據(jù)分離單元之間的銜接選擇3、根據(jù)分離純化工藝的要求來選擇第40頁/共47頁第九節(jié)基因工程藥物的質(zhì)量控制一、原材料的質(zhì)量控制原材料的質(zhì)量控制是要確保編碼藥品的DNA序列的正確性，重組微生物來自單一克隆，所用質(zhì)粒純而穩(wěn)定，以保證產(chǎn)品質(zhì)量的安全性和一致性。二、培養(yǎng)過程的質(zhì)量控制在工程菌菌種貯存中，要求種子克隆純而穩(wěn)定；在培養(yǎng)過程中，要求工程菌所含的質(zhì)粒穩(wěn)定，始終無突變；在重復(fù)發(fā)酵中，工程菌表達(dá)穩(wěn)定；始終能排除外源微生物污染。第41頁/共47頁三、純化工藝過程的質(zhì)量控制產(chǎn)品要有足夠的生理和生物學(xué)試驗數(shù)據(jù)，確證提純物分子批間保持一致；外源性蛋白質(zhì)、DNA與熱原都控制在規(guī)定限度下。四、目標(biāo)產(chǎn)品的質(zhì)量控制基因工程藥物質(zhì)量控制主要包括以下幾項要求：產(chǎn)品的鑒別、純度、活性、安全性、穩(wěn)定性和一致性。1、產(chǎn)品的鑒別（1）肽圖分析：肽圖分析是