TORCH病原及其實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)進(jìn)展

TORCH病原及其實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)進(jìn)展第1頁/共47頁TORCH弓形體（Toxplasma，Toxo）其他微生物(Others)風(fēng)疹病毒（Rubellavirus，RV）巨細(xì)胞病毒（Cytomegalovirus，CMV）單純皰疹病毒（herpessimplesvirus，HSV）

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TORCH的病原學(xué)和致病性TORCH感染可造成孕婦流產(chǎn)、胎兒畸形，是發(fā)病率較高的致畸微生物。許多國家已將TORCH檢測(cè)作為孕期常規(guī)篩查項(xiàng)目。第3頁/共47頁1.弓形蟲(Toxoplasma)

分類：弓形蟲目前在世界上只有一種，即剛地弓形蟲（T.gondii）。是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生的原蟲，為人獸共患病。生活史：分有性生殖和無性生殖。包括5個(gè)期：滋養(yǎng)體、包囊、裂殖體、配子體、卵囊。貓科動(dòng)物是終宿主；人和哺乳動(dòng)物是中間宿主。包囊速殖子第4頁/共47頁滋養(yǎng)體第5頁/共47頁

傳染源：貓及貓科動(dòng)物為重要傳染源，人類通過胎盤垂直傳播。1.弓形蟲(Toxoplasma)

第6頁/共47頁寄生場(chǎng)所：

中間宿主體內(nèi)：除紅細(xì)胞外的各種有核細(xì)胞內(nèi)。終宿主體內(nèi)：小腸上皮細(xì)胞內(nèi)。感染時(shí)期：包囊、假包囊、滋養(yǎng)體及卵囊。第7頁/共47頁感染方式：1）先天性感染經(jīng)胎盤感染。2）后天性感染經(jīng)口感染食入含有包囊或假包囊的肉、蛋、奶等制品；食入含有卵囊污染的水、食物等。經(jīng)皮膚粘膜感染經(jīng)輸血或器官移植感染第8頁/共47頁妊娠早、中、晚期，胎兒受染率分別為17%、25%和65%。早、中期感染：除可引起流產(chǎn)外，還可引起胎兒多發(fā)性畸形，如腦積水、小眼、無眼癥、先天性白內(nèi)障、唇腭裂、先天性心臟病、肛門閉鎖及肢體畸形等。晚期感染：可引早產(chǎn)、圍產(chǎn)兒死亡，也可致腦萎縮、腦積水、智力發(fā)育遲緩或癲癇等。1.弓形蟲(Toxoplasma)致病性：第9頁/共47頁

弓形蟲感染引起的腦膜膨出視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎眼底出現(xiàn)圓形或橢圓形病灶，約1-3個(gè)視乳頭面積大小，邊界清楚，病灶內(nèi)組織消失。1.弓形蟲(Toxoplasma)

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風(fēng)疹病毒為披膜病毒科風(fēng)疹病毒屬。病毒粒子具有多形性，大小為50～85nm單股正鏈RNA，并有若干個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白。病毒核心直徑約為30nm。人是病毒的唯一宿主，不能終身免疫。雙層包膜，表面嵌有具有凝血和溶血活性的刺突。對(duì)乙醚等脂溶劑敏感，不耐熱，紫外線。

2.風(fēng)疹病毒(Rubellavirus)

第11頁/共47頁2.風(fēng)疹病毒(Rubellavirus)

人是風(fēng)疹病毒的惟一自然宿主。病毒進(jìn)入呼吸道后先在局部粘膜，繼而在頸部、頦下和耳后淋巴結(jié)增殖，約7d后入血并擴(kuò)散至全身，引起皮疹(淡紅色斑丘疹)，疹期3d，病毒通過呼吸道分泌物排出體外。第12頁/共47頁2.風(fēng)疹病毒(Rubellavirus)

主要通過飛沫傳播。人群普遍對(duì)風(fēng)疹病毒易感，以兒童最多見。風(fēng)疹病毒還可發(fā)生垂直傳播，導(dǎo)致先天性風(fēng)疹綜合征，亦可導(dǎo)致流產(chǎn)或死胎等。第13頁/共47頁妊娠初期，母體血液中的病毒可通過胎盤感染胎兒，常導(dǎo)致白內(nèi)障、小眼球癥、重聽、心臟病和小頭癥等先天性異常。妊娠第一個(gè)月感染風(fēng)疹，CRS的發(fā)生率達(dá)50％，第二個(gè)月為30％，第三個(gè)月為20％，第四個(gè)月為5％。風(fēng)疹病毒感染后機(jī)體能獲得牢固的免疫力(特異性IgG抗體)。2.風(fēng)疹病毒(Rubellavirus)

致病性與免疫性第14頁/共47頁3.巨細(xì)胞病毒（CMV）

1956年Smith等首先用組織培養(yǎng)方法分離出病毒。由于感染的細(xì)胞腫大并具有巨大的核內(nèi)包涵體故而命名巨細(xì)胞病毒。第15頁/共47頁3.巨細(xì)胞病毒（CMV）巨細(xì)胞病毒屬皰疹病毒科乙組皰疹亞科。病毒的直徑約200nm，是最大的動(dòng)物病毒之一。病毒衣殼是由162個(gè)質(zhì)粒組成的正20面體。核酸是雙鏈DNA。

第16頁/共47頁3.巨細(xì)胞病毒（CMV）CMV具有典型的皰疹病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)。病毒感染的宿主和細(xì)胞范圍狹窄，種屬特異性高：即人CMV只能感染人，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)也只能在人的成纖維細(xì)胞中增殖。生物學(xué)性狀第17頁/共47頁3.巨細(xì)胞病毒（CMV）復(fù)制周期長(zhǎng)，增殖緩慢，初次分離有時(shí)需1個(gè)月才能出現(xiàn)局灶病變。特點(diǎn)是細(xì)胞變圓、膨脹、核變大、形成巨大細(xì)胞，核內(nèi)出現(xiàn)周圍繞有一輪“暈”的大型嗜酸性包涵體。第18頁/共47頁3.巨細(xì)胞病毒（CMV）潛伏部位：唾液腺、乳腺、腎臟、白細(xì)胞及其他腺體，長(zhǎng)期或間歇地從尿、唾液、淚液、乳汁、精液、宮頸及陰道分泌物排出病毒。傳染源：患者及無癥狀的隱性感染者。傳播途徑：人與人之間的密切接觸，通過口-口或手-口傳播。此外還可通過輸血和器官移植等多種途徑傳播。第19頁/共47頁3.巨細(xì)胞病毒（CMV）CMV在人群中的感染極為普遍，初次感染大多在2歲以下，通常呈隱性感染，少數(shù)人有臨床癥狀。

60%～90%成人有CMV抗體，可長(zhǎng)期帶病毒。孕婦一旦感染，可通過血液、胎盤屏障、羊水等感染胎兒，致胚胎發(fā)育異常，造成流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)、先天畸形及出生后持續(xù)感染等一系列嚴(yán)重后果。第20頁/共47頁單純皰疹病毒屬皰疹病毒科，直徑150～200nm，為雙鏈DNA結(jié)構(gòu)，神經(jīng)節(jié)潛伏感染，根據(jù)其抗原性的不同分為Ⅰ型和Ⅱ型。I型病毒多侵襲腰以上部位，引起如口唇皰疹、皰疹性濕疹、口腔炎、角膜結(jié)膜炎等病癥；II型病毒多感染腰以下部位，引起生殖器皰疹，它主要通過性生活傳播，并可能與宮頸癌有關(guān)。4.單純皰疹病毒(Herpessimplesvirus)第21頁/共47頁

單純皰疹病毒在人群中廣泛存在，人是唯一的宿主。傳染源：患者及無癥狀單純皰疹病毒攜帶者是傳染源。（病毒常存在于皰疹病灶或健康人唾液中）傳播途徑：主要通過直接密切接觸和兩性接觸傳播。4.單純皰疹病毒(Herpessimplesvirus)第22頁/共47頁妊娠初8周受染：可發(fā)生流產(chǎn)及先天畸形如小腦、先天性無腦、腦積水等多器官畸形。晚期感染HSV：胎兒可見有小頭、小眼球、視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎、大腦半球萎縮、發(fā)育遲緩、智力障礙、嚴(yán)重病例可致死亡。4.單純皰疹病毒(Herpessimplesvirus)

致病性第23頁/共47頁5.其他微生物(others)

柯薩奇病毒梅毒螺旋體微小病毒乙型肝炎病毒等乙肝病毒經(jīng)胎盤垂直傳給胎兒，可引起嬰幼兒非致命性傳染性肝炎。妊娠期發(fā)生急性微小病毒B19感染后，超過95%的胎兒在胎齡12周內(nèi)出現(xiàn)并發(fā)癥如水腫，甚至死亡等。第24頁/共47頁TORCH與優(yōu)生優(yōu)育關(guān)系第25頁/共47頁TORCH感染的臨床診斷第26頁/共47頁TORCH常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目第27頁/共47頁TORCH檢驗(yàn)?zāi)康牡?8頁/共47頁TORCH檢驗(yàn)方法ELISA化學(xué)發(fā)光法WesternBlot基因診斷組織細(xì)胞培養(yǎng)第29頁/共47頁ELISA

測(cè)特異的IgG和IgM間接法和捕獲法特異IgG抗體親和力（Avidity）的測(cè)定第30頁/共47頁第31頁/共47頁

特異IgG抗體親和力

基本原理:

機(jī)體感染病原體后,初次免疫應(yīng)答后產(chǎn)生的抗體,通常為低親合力(有功能的親和力),經(jīng)過數(shù)周或數(shù)月后,經(jīng)過親和力成熟的過程,其與抗原的互補(bǔ)更好,而成為高親合力抗體。第32頁/共47頁

特異IgG抗體親和力

在免疫測(cè)定中，臨床標(biāo)本中加入尿素或其他變性劑，則可測(cè)出可經(jīng)受及不能經(jīng)受尿素等變性劑作用的抗體，不能經(jīng)受的則為低親合力抗體，則反映為急性或近期感染。第33頁/共47頁

特異IgG抗體親和力測(cè)定的意義可排除患者前4-5個(gè)月內(nèi)發(fā)生的感染，其對(duì)第一個(gè)月的特異IgM和IgG均陽性的妊娠婦女尤其有用，如果此時(shí)特異IgG為高親合力,則說明為孕前感染，懷孕前感染對(duì)胎兒影響不大。第34頁/共47頁母嬰成對(duì)樣本IgG和IgM蛋白印跡（WesternBlot，WB)

母嬰成對(duì)樣本蛋白印跡可能對(duì)在常規(guī)方法測(cè)定IgA和/或IgM抗體為陰性但其母親在孕期有確定的或急性獲得性感染的新生兒的感染的診斷最有用。第35頁/共47頁WesternBlot

第36頁/共47頁母嬰成對(duì)樣本IgG和IgM蛋白印跡（WesternBlot，WB)

IgG可通過胎盤由母體至胎兒。IgA和IgM不能，但在出生過程中卻可能發(fā)生，來自母體的IgA和IgM持續(xù)時(shí)間短，只有數(shù)天。對(duì)母體和嬰兒血清進(jìn)行蛋白印跡檢測(cè),可出現(xiàn)不同的條帶，其原因可能對(duì)病原體的免疫應(yīng)答在胎兒和母體間不一樣。使用IgAWB最不敏感，聯(lián)合IgG和IgM的WB

最敏感。第37頁/共47頁母嬰成對(duì)樣本IgG和IgM蛋白印跡（WesternBlot，WB)

出生后幾天的血清標(biāo)本，WB陰性結(jié)果有可能為假陰性，因?yàn)橛锌赡艹錾髱字軆?nèi)都不出現(xiàn)陽性結(jié)果。WB應(yīng)與其他方法如ELISA測(cè)IgA和IgM聯(lián)合應(yīng)用。單個(gè)方法很難對(duì)先天性感染做出診斷。關(guān)鍵是對(duì)嬰兒進(jìn)行仔細(xì)的重復(fù)檢測(cè)來確定是否感染。第38頁/共47頁基因診斷測(cè)定樣本：血液、羊水、尿液、腦脊液等。PCR測(cè)定病原體核酸是測(cè)定特定病原體急性感染的最直接的證據(jù)。采用羊水進(jìn)行PCR測(cè)定是較常規(guī)檢測(cè)方法敏感、快速和更安全的方法。第39頁/共47頁TORCH檢驗(yàn)的應(yīng)用及結(jié)果解釋

目前尚不能依靠單個(gè)的方法來明確診斷

檢測(cè)方案是：

1.使用高質(zhì)量的IgM、IgA、IgG特異抗體檢測(cè)試劑；

2.使用高質(zhì)量的特異IgG親合力實(shí)驗(yàn)