實驗一培養(yǎng)基的制備消毒與滅菌及超凈工作臺的使用

微生物實驗課注意事項課程簡介：必修課，24學時考試成績按以下公式計算：平時（60％）＋操作考試（40％）當前1頁，總共25頁。課堂紀律嚴格遵守實驗室規(guī)章制度嚴肅課堂紀律不允許無故曠課、早退（1次）遲到（3次）不能做與實驗無關的事當前2頁，總共25頁。實驗室安全和衛(wèi)生安全實驗室嚴禁吸煙。注意用水、防電和防火正確使用化學試劑和儀器衛(wèi)生每次實驗需留下6位同學值日，協(xié)助保持實驗室清潔當前3頁，總共25頁。1、了解培養(yǎng)基的概念、種類和用途，明確培養(yǎng)基的配制原理。2、學習掌握培養(yǎng)基配制的一般方法和步驟。3、掌握高壓蒸汽滅菌的原理和方法步驟。實驗目的一、培養(yǎng)基的配制當前4頁，總共25頁。

培養(yǎng)基(culturemedium)是指人工配制的、適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質。自然界中微生物種類繁多，營養(yǎng)類型多樣，加之實驗和研究目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，不同種類的培養(yǎng)基一般都應含有微生物生長所需的碳源、氮源、能源、無機鹽、生長因子和水六大營養(yǎng)要素，且各成分比例應合適。為了滿足微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的要求，還必須控制培養(yǎng)基合適的pH。

實驗原理當前5頁，總共25頁。常用凝固劑是瓊脂，固體培養(yǎng)基瓊脂加量通常為1.5%-2%；半固體培養(yǎng)基瓊脂加量為0.5%-0.8%。實驗原理常用培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基廣泛用于細菌的培養(yǎng)；高氏一號培養(yǎng)基用于培養(yǎng)放線菌；麥芽汁培養(yǎng)基和豆芽汁培養(yǎng)基通常用于酵母菌的培養(yǎng)；馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基被廣泛用于培養(yǎng)霉菌。當前6頁，總共25頁。實驗分組安排5-6人一組，配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基每組配500mL牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基斜面1支（每人），其余分裝在兩個500mL三角瓶。

當前7頁，總共25頁。當前8頁，總共25頁。當前9頁，總共25頁。當前10頁，總共25頁。當前11頁，總共25頁。包扎：

加塞后，試管通常每7支一起，包上一層牛皮紙或兩層報紙，用線繩扎緊。三角瓶加塞后也用牛皮紙包扎。

以活結形式扎緊，以便使用時容易解開。

用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、配制日期、配制人或實驗組。滅菌時包牛皮紙、報紙當前12頁，總共25頁。滅菌：

培養(yǎng)基滅菌一般采用壓力蒸汽滅菌

通常滅菌條件為1.05kg/cm2,121℃滅菌20-30分鐘；含糖量高的培養(yǎng)基，如馬丁氏培養(yǎng)基則為0.56kg/cm2,115℃滅菌30分鐘。當前13頁，總共25頁。二、消毒與滅菌當前14頁，總共25頁。當前15頁，總共25頁。當前16頁，總共25頁。紫外線滅菌----紫外線波長在200-300nm,具有殺菌作用，其中以265-266nm殺菌力最強。無菌室或無菌接種箱空氣可用紫外線燈照射滅菌。當前17頁，總共25頁。干熱滅菌電烤箱1、干熱滅菌2、壓力蒸汽滅菌當前18頁，總共25頁。干熱滅菌1、裝入待滅菌物品2、升溫：接通電源，加熱升溫至160-170℃。3、恒溫：保持160-170℃2小時。4、降溫：切斷電源，自然降溫。5、開箱取物：待烤箱溫度降到70℃以下以后，方可打開箱門，取出物品。箱內(nèi)溫度高于70℃，切勿自行打開箱門，以免玻璃器皿炸裂。當前19頁，總共25頁。當前20頁，總共25頁。當前21頁，總共25頁。當前22頁，總共25頁。三、超凈工作臺的使用方法工作原理：相對無菌的隔離小環(huán)境使用方法和步驟：紫外線的效用和紫外燈的使用方法；照明系統(tǒng)的效用使用方法；酒精燈的效用和使用方法。維護常識：酒精擦理當前23頁，總共25頁。實驗報告與問題討論1、培養(yǎng)基配制的原理、方法、步驟及注意事項。2、干熱滅菌、壓力蒸汽滅菌方法的原理和方法步驟3、思考題1）培養(yǎng)基應具備哪些條件？為什么？2）在配制培養(yǎng)基過程中應注意哪些問題？為什么？3）培養(yǎng)基配制好后，為什么要立即滅菌？如何檢查滅菌是否徹底？4）壓力蒸汽滅菌時，為什么要將鍋內(nèi)冷